|
|
Expression and purification of Tick-borne encephalitis virus Capsid protein
SCHMELZER, Jakob
Tick-borne encephalitis virus (TBEV) is an important pathogen of the family Flaviviridae with an emerging health concern. Virus causes severe neurological disorders to human population in Europa and Asia. Despite effective vaccine, there is no specific antiviral treatment till now. The capsid protein encapsules the viral positive-sense single-stranded RNA and is essential in packaging and assembling of new virions within the host. A deeper understanding of these interactions and their implications should lead to new antiviral strategies and drug design. This thesis deals with the expression and purification of the capsid protein without membrane anchor using Escherichia coli expression system.
|
|
|
Protilátky v terapii klíšťové encefalitidy
NEDVĚDOVÁ, Lenka
Klíšťová encefalitida (TBE) je závažné život ohrožující onemocnění způsobené virem klíšťové encefalitidy. Terapie onemocnění je založena na nespecifické terapii podáváním protizánětlivých léků nebo IVIg preparátů (obsahující nespecifické imunoglobuliny). Aplikace nespecifických imunoglobulinů však představuje určité riziko - především rozvoj protilátkami zesílenou infektivitu. Vyvinuli jsme a charakterizovali monoklonální protilátky, které cílí na nestrukturní protein NS1 a posoudili jeho potenciál pro diagnostiku a terapii KE.
|
|
|
Recombinant production and characterization of protease domain from TBEV nonstructural protein NS3
VEJVODOVÁ, Kateřina
The aim of this thesis was to produce and characterize recombinant protease domain of TBEV nonstructural protein 3 (NS3). The NS3 protein of TBEV is essential in viral replication and plays an indispensable role in cleaving viral polyprotein into structural and nonstructural viral proteins, thus making it an attractive target for antiviral treatment. This thesis summarized the cloning of TBEV NS3 protease,production and purification of recombinant enzyme, biochemical and kinetic characterazion of the protease domain from TBEV NS3.
|
|
| |
|
|
Patogeneze a klinické aspekty infekce virem klíšťové encefalitidy
ELSTEROVÁ, Jana
This thesis contributes to knowledge about the combined impacts of the pathogenesis of the tick-borne encephalitis virus (TBEV) and the immunopathogenesis of the host on the clinical course of acute tick-borne encephalitis (TBE). The thesis further focuses on the process of TBEV neuroinvasion and the utilization of the host's immune products as potential therapeutic interventions.
|
|
|
Klonování, exprese a charakterizace virových proteinů
Pekárek, Matěj ; Šilhán, Jan (vedoucí práce) ; Obšil, Tomáš (oponent)
Za posledních dvacet let se v lidské populaci objevily tři nové druhy koronavirů, které jsou původci nebezpečných infekcí respiračních cest. Momentálně neexistuje žádné schválené léčivo, které by dokázalo zmírnit průběh infekcí způsobených těmito viry. Jedním z možných cílů těchto léčiv jsou proteiny zodpovědné za replikaci virového genomu. Nsp13 je primárně helikasa rozplétající dvouřetězcové nukleové kyseliny ve směru 5'-3', ale také zvyšuje aktivitu replikačního a transkripčního komplexu, podílí se na syntéze 5' čepičky na virové RNA a pravděpodobně zprostředkovává posun replikačního a transkripčního komplexu do opačného směru transkripce (backtracking) během procesu opravy RNA. Navíc nsp13 je velmi konzervován napříč všemi koronaviry, a proto je možným cílem nejen pro léčbu COVID-19, ale i infekcím způsobeným potenciálními koronaviry v budoucnosti. V teoretické části této práce je stručně popsán životní cyklus SARS-CoV-2, funkce jednotlivých proteinů tohoto viru podílejících se na replikaci a transkripci RNA a jsou shrnuty dosavadní vědomosti ohledně funkce nsp13 a jeho potenciálních inhibitorů. V experimentální části byl připraven expresní vektor pro nsp13, který byl následně použit k transformaci bakterií a produkci rekombinantní nsp13. Nsp13 byl následně izolován a purifikován. Klíčová...
|
|
|
Strukturní a funkční charakterizace inhibice flavivirové methyltransferázy.
Todd, Matthew Zagorey ; Bouřa, Evžen (vedoucí práce) ; Honzejková, Karolína (oponent)
Viry rodu flavivirus, patřící do rodiny Flaviviridae, jsou rozšířenou skupinou virových patogenů, které představují globální hrozbu pro lidské zdraví. Následky infekce jsou neurologické nebo jiné onemocnění jako je encefalitida, meningitida, mikrocefalie nebo krvácivá horečka, přičemž přímá protivirová léčba existuje pouze proti některým členům flavivirů jako je Virus žluté zimnice (YFV) nebo Virus japonské encefalitidy (JEV). Genom flavivirů je pozitivní jedno-vláknová RNA, po jejíž translaci vzniká dlouhý virový polyprotein štěpen hostitelskými a virovými proteasami na strukturální a nestrukturální proteiny. Nestrukturální protein 5 (NS5) je tvořen C-koncovou doménou s funkcí RNA- dependentní RNA-polymerasy (RdRp) a N-koncovou doménou s funkcí methyltransferasy (MTasa). Flavivirové MTasy katalyzují poslední krok v tvorbě čepičky genomové RNA, která hraje klíčovou roli v procesech virové translace, replikace a úniku před imunitním systémem hostitele. Kvůli její konzervativní povaze je flavivirová MTasa slibným cílem terapeutického zásahu. Analýza její struktury je nezbytná pro vývoj širokospektrálních inhibitorů a léčiv proti onemocněním způsobené flaviviry. Klíčová slova Flaviviry, Virus St. Louisské encefalitidy (SLEV), Flavivirová methyltransferasa (MTasa), N-7 methylace, 2'-O methylace.
|
|
|
Příprava expresních vektorů pro expresi helikasy z virů Zika a Dengue
Daňhelová, Kateřina ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent)
Viry Zika a Dengue se vlivem globalizace rozšiřují do všech kontinentů, které leží aspoň částí v tropickém a subtropickém pásu. S jejich rozšířením souvisí i vzestup vážných onemocnění způsobených těmito viry. Řešením tohoto problému mohou být nová léčiva, jež by byla účinná proti těmto infekcím. Jejich cílem zásahu mohou být různé virové proteiny, mezi nimi i virová helikasa, kterou se zabývá tato bakalářská práce. Tématem této práce bylo připravit expresní konstrukty pro produkci rekombinantních helikas virů Zika a Dengue prostřednictvím vhodného bakteriálního kmene Escherichia coli. Byly připraveny varianty odvozené od plasmidu pET-16b s vloženou helikasou virů Zika a Dengue. Následnou purifikací byla získána helikasa viru Zika, která bude dále využita pro výzkumné účely. Klíčová slova: Flavivirus, virus Zika, virus Dengue, helikasa, exprese, purifikace, enzymová aktivita
|
|
|
Vakcíny proti viru dengue
Holšteinová, Aneta ; Šroller, Vojtěch (vedoucí práce) ; Poláková, Ingrid (oponent)
Od poloviny 20. století dochází k neustálému zvyšování počtu jedinců infikovaných virem dengue (DENV). Specifická antivirotika nejsou k dispozici, a tak se hlavním cílem při eliminaci transmise stala konstrukce účinné a bezpečné vakcíny. Důraz je kladen na vyvolání vyvážené imunitní odpovědi proti všem sérotypům DENV. Momentálně je jedinou licencovanou vakcínou CYD-TDV (Chimeric Yellow Fever-Dengue, Live-Attenuated, Tetravalent Dengue Vaccine). Ta využívá kostru účinné a bezpečné vakcíny proti viru žluté zimnice (YFV), ze které jsou odebrány sekvence pro povrchové proteiny a nahrazeny odpovídajícími sekvencemi DENV. Zatímco preklinické studie vykazovaly slibné výsledky, při klinických studiích se začaly objevovat komplikace a z nich vycházející omezující kritéria pro její využití. Proto se pokračuje ve vývoji dalších vakcín, které by mohly zajistit lepší ochranu proti DENV širšímu spektru populace a nahradit tak CYD-TDV. Ve III. fázi klinických studií se nachází dvě živé atenuované vakcíny (TetraVax-DV a DENVax). Do I. fáze postoupila podjednotková vakcína (V180), DNA vakcína (TVDV) nebo vakcína obsahující inaktivovaný virus (TDENV PIV). Využívaná je i kombinace více vakcinačních schémat (tetravalentní živá atenuovaná vakcína-tetravalentní purifikovaná inaktivovaná vakcína, TLAV-TPIV). V...
|
|
|
Interakce viru klíšťové encefalitidy s cytoskeletem hostitelských buněk
PRANČLOVÁ, Veronika
Tato práce je zaměřena na roli cytoskeletu, primárně mikrotubul a mikrofilament, v průběhu infekce virem klíšťové encefalitidy (VKE) u lidské neuroblastové linie SK-N-SH a klíštěcí linie IRE/CTVM19. Studium integrity a dynamiky cytoskeletu pro replikační cyklus viru za použití specifických chemických inhibitorů poukázal na potenciál VKE využívat námi studovaných struktur v obou buněčných liniích. Imunofluorescenční mikroskopie odhalila strukturní změny v aktinové síti buněk SK-N-SH během pozdní fáze infekce. Navíc byly u obou buněčných linií porovnány změny v expresi genů asociovaných s cytoskeletem, přičemž bylo zaznamenáno několik genů se zvýšenou expresí u buněk SK-N-SH v pozdní fázi infekce.
|
host ::
RSS.