|
|
Příprava a charakterizace povrchově modifikovaných nanoliposomů s využitím technik klik chemie
Frydrychová, Aneta ; Bartoš,, Milan (oponent) ; Turánek, Jaroslav (vedoucí práce)
Liposomy jsou již desítky let intenzivně zkoumány pro své unikátní vlastnosti, díky kterým jsou použitelné například jako systémy pro cílené doručování léčiv či ke konstrukci vakcín. Tato diplomová práce přináší přehled o jejich nejdůležitějších vlastnostech, možnostech přípravy a modifikacích. Cílem práce je pak samotná příprava, charakterizace a následná povrchová modifikace nanoliposomů. Liposomy byly připraveny metodou hydratace lipidového filmu, pro povrchovou modifikaci byl použit polysacharid manan. Díky využití lipidu s N-oxy skupinou probíhala modifikace přes oximovou vazbu prostřednictvím klik chemie. Nanoliposomy byly charakterizovány řadou fyzikálně-chemických metod jako je TEM, DLS, FT-IR či nano-průtoková cytometrie. Součástí práce je také studium interakce liposomů s vybranými buněčnými liniemi pro ověření, zda stimulují cesty imunitní odpovědi. Výsledky této studie potvrzují aktivaci inflamasomu NLRP3 vedoucí k produkci prozánětlivých cytokinů (IL-1). Připravené liposomy jsou tedy potenciálně použitelné jako adjuvans vakcín.
|
|
|
Modifikace a analýza nízkomolekulárních chitosanů
Moravcová, Dagmar ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Strašák, Tomáš (oponent)
3 Abstrakt Chitosan je přírodní biopolymer odvozený od chitinu, který se nachází v exoskeletonech korýšů a hub. Získal značnou pozornost díky své biologické rozložitelnosti, biokompatibilitě, antimikrobiálním vlastnostem a potenciální protinádorové aktivitě. Chitosan má kationtové aminoskupiny, které umožňují interakce s různými aniontovými sloučeninami. Proto je ideálním kandidátem pro konjugaci s monovalentními bioaktivními sloučeninami za účelem vytvoření účinných multivalentních konjugátů. Bylo zjištěno, že v nádorových buňkách dochází k nadměrné expresi galektinů, zejména Gal-1 a Gal-3. Bylo syntetizováno několik monovalentních inhibitorů odvozených od základního inhibitoru thiodigalaktosidu, modifikovaných mj. i kumarylovými skupinami, které vykazují vysokou selektivitu a afinitu vůči Gal-3. Hlavním cílem této práce bylo syntetizovat nosič na bázi chitosanu a konjugovat jej s ligandy vykazujícími selektivitu a inhibiční účinek vůči Gal-3. První krok zahrnoval modifikaci chitosanu pomocí jedinečné a efektivní metody založené na hydrolýze v pevné fázi, která výrazně snižuje spotřebu chemických materiálů a zabraňuje nadměrným ztrátám při čištění. Současně byl chitosanový nosič funkcionalizován kyselinou pentynovou. Dále byly syntetizovány monovalentní ligandy galektinů,...
|
|
|
Photoaffinitive conjugation of biomolecules
Masárová, Petra ; Slanina, Tomáš (vedoucí práce) ; Vrábel, Milan (oponent)
Foto-click chémia zahŕňa skupinu foto-aktivovateľných click reakcií, ktoré sú význačné presnou priestorovou a časovou kontrolou, vysokou selektivitou a kvantitativnými výťažkami. Táto práca sa zameria na niekoľko hlavných tried svetlom kontrolovaných reakcií a pokúsi sa popísať ich chémiu v reverzibilných (nukleofilných) a ireverzibilných (cykloadičných a Diels- Alderových) reakciách iniciovaných po ožiarení fotoaktívneho prekurzoru. Derivatizáciou fotoaktívnych prekurzorov je možné posunúť absorpciu látky do viditelného spektra a teda uskutočniť nedeštruktívnu excitáciu in vivo, čo ponúka značný potenciál v biologicky zameranom výskume. Význam click fotochémie spočíva v neobyčajnej selektivite, ktorá umožňuje, aby reakcie prebiehali v komplexných, nekontrolovaných biologických prostrediach. Foto-aktivovateľné prekurzory je možné konjugovať s biologicky významnými skupinami, čo predstavuje metódu častokrát využívanú vo fotoafinitnom značení. Reaktivita fotoaktívnych substrátov voči biologickým nukleofilom bola skúmaná v rôznorodých oblastiach aplikovaného výskumu - popis a diskusia recentného úsilia bude taktiež témou tejto práce.
|
|
|
Synthesis of a combinatorial compound library based on the double click reaction
Krutáková, Mária ; Zitko, Jan (vedoucí práce) ; Kučerová, Marta (oponent)
(Slovak) Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutickej chémie a farmaceutickej analýzy Autor: Mária Krutáková Vedúci diplomovej práce: doc. PharmDr. Jan Zitko, Ph.D. Názov: Syntéza kombinatoriálnej knižnice zlúčenín pomocou dvojitej click reakcie Click chémia je významným nástrojom pri objavovaní liečiv. Je veľmi užitočná pri vytváraní knižníc zlúčenín prostredníctvom kombinatoriálnych metód. Meďou(I) katalyzovaná 1,2,3-triazolotvorná reakcia medzi azidmi a terminálnymi alkínmi sa stala zlatým štandardom click chémie vďaka vysokej účinnosti reakcie, miernym reakčným podmienkam, chemo- a regioselektivite. Zlúčeniny, obsahujúce triazol vo svojej štruktúre, vykazujú široké spektrum výhodných vlastností a môžu byť uplatnené ako potenciálne antibakteriálne, antivírové, protizápalové, protinádorové látky alebo ako antituberkulotiká. Táto práca bola zameraná na prípravu knižnice zlúčenín s využitím dvojitej click reakcie. Najskôr sme nasyntetizovali niekoľko zlúčenín s dvoma alkínovými skupinami ("alkínové jadrá") a rôznorodú skupinu azidov s jednoduchou štruktúrou. V nasledujúcom kroku reagoval jeden ekvivalent alkínového jadra s dvoma ekvivalentmi všetkých pripravených azidov. Reakcia medzi každým alkínovým jadrom a desiatimi azidmi mala výťažnosť 100 zlúčenín....
|
|
|
Studying protein interactions with expanded genetic code
Tekel, Andrej ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Fuertes Vives, Gustavo (oponent)
Příroda, používající proteiny tvořené nejčastěji repertoárem 20 aminokyselin, je schopna velkého množství obdivuhodných věcí, z nichž mnoho stále neumíme napodobit. Avšak je třeba podotknout, že množina chemických koster dostupných přírodě je limitována. Proto je rozumné předpokládat, že bychom mohli udělat věci lepšími, začneme-li využí- vat i chemické kostry dosud přírodou nevyužívané. Přesně na této ideji stojí koncept rozšířeného genetického kódu, osvobození od limitací standardního genetického kódu. Tato práce si klade za cíl shrnout různé postupy v této problematice, a to hlavně v kon- textu proteinových interakcí. Pokusím se zvýraznit metody, kterými umíme rozšiřovat genetický kód v současné době, specifické chemické a fyzikální vlastnosti nekanonických aminokyselin a biofyzikální metody, které z takových aminokyselin mohou profitovat. Klíčová slova: rozšířený genetický kód, nekanonická aminokyselina, amber kodon, fluo- rescence, magnetická rezonance, síťování, klik chemie
|
|
|
Příprava a charakterizace povrchově modifikovaných nanoliposomů s využitím technik klik chemie
Frydrychová, Aneta ; Bartoš,, Milan (oponent) ; Turánek, Jaroslav (vedoucí práce)
Liposomy jsou již desítky let intenzivně zkoumány pro své unikátní vlastnosti, díky kterým jsou použitelné například jako systémy pro cílené doručování léčiv či ke konstrukci vakcín. Tato diplomová práce přináší přehled o jejich nejdůležitějších vlastnostech, možnostech přípravy a modifikacích. Cílem práce je pak samotná příprava, charakterizace a následná povrchová modifikace nanoliposomů. Liposomy byly připraveny metodou hydratace lipidového filmu, pro povrchovou modifikaci byl použit polysacharid manan. Díky využití lipidu s N-oxy skupinou probíhala modifikace přes oximovou vazbu prostřednictvím klik chemie. Nanoliposomy byly charakterizovány řadou fyzikálně-chemických metod jako je TEM, DLS, FT-IR či nano-průtoková cytometrie. Součástí práce je také studium interakce liposomů s vybranými buněčnými liniemi pro ověření, zda stimulují cesty imunitní odpovědi. Výsledky této studie potvrzují aktivaci inflamasomu NLRP3 vedoucí k produkci prozánětlivých cytokinů (IL-1). Připravené liposomy jsou tedy potenciálně použitelné jako adjuvans vakcín.
|
|
|
Synthesis of block copolymers by ring-opening polymerization and post polymerization modification with phenylboronic acid
Dudičová, Dorota ; Uchman, Mariusz Marcin (vedoucí práce) ; Strachota, Adam (oponent)
Tato práce se zabývá syntézou amfifilních diblokových kopolymerů na bázi poly(ethylenoxidu)-b-polykaprolaktonu modifikovaných propargylem (PEO-PgCL). V syntéze byla použita tzv. Polymerizace prostřednictvím otevírání kruhů (ROP) propargylovaného kaprolaktonu iniciovaná α-hydroxy-ω-methoxy poly(ethylenoxidem) o dvou různých délkách (2000, 5000 g/mol). Následně byla do modifikovaného bloku zavedena fenylboronová funkční skupina pomocí mědí katalyzované cykloadice (CuAAC) s pinakolátem 2-azidometyl fenylboronové kyseliny. K Charakterizaci kopolymerů bylo použito několik různých technik např. protonová nukleárni magnetická rezonance 1 H NMR, gelová permeační chromatografie (GPC) a hmotnostní spektrometrie (MALDI-ToF). Výsledky práce přispěly k optimalizaci reakčních podmínek polymerizace v rámci grantového projektu laboratoře. Klíčová slova: Amfifilní blokové kopolymery, CuAAC click, fenylboronová kyselina, poly-ε- kaprolakton, polymerizace prostřednictvím otevírání kruhů
|
|
|
Synthesis of block copolymers by ring-opening polymerization and post polymerization modification with phenylboronic acid
Dudičová, Dorota ; Uchman, Mariusz Marcin (vedoucí práce) ; Strachota, Adam (oponent)
Tato práce se zabývá syntézou amfifilních diblokových kopolymerů na bázi poly(ethylenoxidu)-b-polykaprolaktonu modifikovaných propargylem (PEO-PgCL). V syntéze byla použita tzv. Polymerizace prostřednictvím otevírání kruhů (ROP) propargylovaného kaprolaktonu iniciovaná α-hydroxy-ω-methoxy poly(ethylenoxidem) o dvou různých délkách (2000, 5000 g/mol). Následně byla do modifikovaného bloku zavedena fenylboronová funkční skupina pomocí mědí katalyzované cykloadice (CuAAC) s pinakolátem 2-azidometyl fenylboronové kyseliny. K Charakterizaci kopolymerů bylo použito několik různých technik např. protonová nukleárni magnetická rezonance 1 H NMR, gelová permeační chromatografie (GPC) a hmotnostní spektrometrie (MALDI-ToF). Výsledky práce přispěly k optimalizaci reakčních podmínek polymerizace v rámci grantového projektu laboratoře. Klíčová slova: Amfifilní blokové kopolymery, CuAAC click, fenylboronová kyselina, poly-ε- kaprolakton, polymerizace prostřednictvím otevírání kruhů
|
|
|
Příprava a charakterizace nových analogů insulinu s triazolovým můstkem v C konci řetězce B
Kuntová, Vendula ; Jiráček, Jiří (vedoucí práce) ; Ryšlavá, Helena (oponent)
Insulin je peptidový hormon nezbytný k udržení stálé hladiny glukózy v krvi. V lidském těle interaguje s dvěma isoformami receptoru, IR-A a IR-B. Tyto receptory se liší především tkáňovou distribucí v organismu, přičemž IR-A má spíše funkci mitogenní, kdežto IR-B metabolickou. Cílem této práce bylo vytvořit analog insulinu, který bude selektivní k IR-B. Připravili jsme tři nové analogy insulinu s triazolovým můstkem v pozicích B26 a B29. 1,2,3-triazolová skupina byla připravena cykloadiční reakcí katalyzovanou ionty Cu(I) mezi postranními řetězci kyseliny azidopentanové (N3Pent) v pozici B26 a propargylglycinu (Prg) v pozici B29. Analogy se navzájem lišily konfigurací atomů C nepřirozených aminokyselin v polohách B26 a B29. Konkrétně jsme připravili analog 1 s D-N3PentB26 a D-PrgB29, analog 2 s D-N3PentB26 a L-PrgB29 a analog 3 s L-N3PentB26 a D-PrgB29. Nové analogy byly testovány pro vazbu vůči oběma isoformám receptoru insulin (IR-A a IR-B). Analogy 1 a 2 byly oba slabší ve vazbě než lidský insulin a nevykazovaly selektivitu pro žádnou z isoforem. Analog 3 byl 4x silnější ve vazbě na IR-B a 2x silnější ve vazbě na IR-A než lidský insulin. Avšak vazebná selektivita tohoto analogu vůči IR-B (asi 2x) byla nižší než selektivita (asi 2,6x) jeho diastereoisomeru s L-N3PentB26 a L-PrgB29 připraveného v...
|
|
|
Optimization of methods for analysis of early steps of mouse polymavirus life cycle
Soukup, Jakub ; Španielová, Hana (vedoucí práce) ; Němečková, Šárka (oponent)
Abstrakt Myší polyomavirus je typickým zástupcem čeledi Polyomaviridae a slouží jako model pro studium virové infekce lidskými patogenními polyomaviry. Minoritní proteiny virové kapsidy se ukázaly jako nezbytné pro efektivní zahájení infekce. Za účelem studia jejich role v časných fázích infekce jsme využili nový Cre-LoxP systém produkce virové mutanty postrádající minoritní proteiny. Virus produkovaný touto cestou byl porovnán s virem produkovaným standardní metodou a zjistili jsme, že oba systémy umožňují produkci mutantního viru se srovnatelnou kvalitou a kvantitou. Mutantní virus obsahoval snížené množství virové DNA a tvořil kapsidy se zhoršenou stabilitou. Pro další studium vnitrobuněčného transportu virionů jsme připravili viriony s genomem modifikovaným analogy tymidinu 5-bromo-2'-deoxyuridin (BrdU) a 5-Ethynyl-2'-deoxyuridin (EdU) a optimalizovali metody detekce analogu. Virový genom se zpřístupní detekci 4 hodiny po infekci. Pro ultramikroskopickou analýzu dopravy viru do jádra jsme použili mrazovou substituci. Všechny tyto metody budou použity pro detailní studium odlišných kroků virové infekce. Klíčová slova: Myší polyomavius, minoritní proteiny, mutantní virus, Cre rekombináza, BrdU, EdU, Click...
|
host ::
RSS.