|
|
Enzymy metabolismu katecholaminů u experimentální hypertenze
Loučková, Anna ; Kuneš, Jaroslav (vedoucí práce) ; Klevstigová, Martina (oponent)
Katecholaminy dopamin, noradrenalin a adrenalin se významně podílejí na regulaci krevního tlaku. Nejdůležitější enzymy účastnící se jejich metabolizmu jsou tyrosinhydroxyláza, DOPAdekarboxyláza, dopamin-β-hydroxyláza a fenyletanolamin-N-metyltransferáza. Tato práce shrnuje dosavadní poznatky o těchto enzymech, se zaměřením na jejich význam v procesu rozvoje esenciální hypertenze. Ke studiu hypertenze se z důvodů praktických i etických často používají experimentální modely. Nejvíce poznatků bylo získáno na spontánně hypertenzních potkanech, kvůli jejich podobnosti s lidskou esenciální hypertenzí. Metabolizmus katecholaminů se u spontánně hypertenzního potkana liší od normotenzních kontrol v mnoha ohledech. Primární příčinu tohoto typu hypertenze se od kompenzačních reakcí zatím nepodařilo rozlišit. Nicméně některými zásahy lze dosáhnout zabránění vzniku nebo alespoň zpomalení rozvoje onemocnění. Tyto poznatky mohou pomoci při hledání nových způsobů léčby lidské hypertenze.
|
|
|
Úloha adrenergního systému v genetické hypertenzi
Loučková, Anna ; Kadlecová, Michaela (vedoucí práce) ; Husková, Zuzana (oponent)
Adrenergní systém hraje významnou roli v regulaci krevního tlaku. U spontánně hypertenzního potkana, nejvíce studovaného modelu esenciální hypertenze, je mnoho součástí adrenergního systému změněno. Změny v úrovni exprese některého z enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů nebo některého podtypu adrenergních receptorů by mohly být jednou z příčin vzniku hypertenze. V této práci byla měřena exprese genů adrenergního systému v nadledvině, kůře ledvin a dřeni ledvin u třináctitýdenních spontánně hypertenzních (SHR), Wistar-Kyoto a Brown Norway potkanů. V nadledvině SHR byla snížená exprese všech enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů (tyrosinhydroxylasy, DOPA-dekarboxylasy, dopamin-β-hydroxylasy a fenyletanolamin-N-metyltransferasy) a téměř všech podtypů adrenergních receptorů (kromě Adra1a a Adra1d). Toto celkové snížení exprese v nadledvině SHR naznačuje, že alespoň část regulace exprese genů adrenergního systému je společná. Mechanismem útlumu exprese u SHR může být zpětná vazba přes adrenergní receptory stimulované vysokou plasmatickou koncentrací noradrenalinu. V ledvině SHR nebyl zjištěn rozdíl v expresi většiny podtypů adrenergních receptorů s výjimkou Adrb1 a Adra2c, jejichž exprese byla zvýšená. Tento rozdíl v expresi je spíše důsledkem nebo průvodním jevem než příčinou vzniku hypertenze.
|
|
|
Příprava vazebných partnerů 14-3-3 proteinů pro strukturní studie.
Kopecká, Miroslava ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Teisinger, Jan (oponent)
Tyrosinhydroxylasa patří do skupiny hydroxylas aromatických aminokyselin a katalyzuje počáteční krok biosyntézy katecholaminových neuropřenašečů. Tento enzym má homoteramerní strukturu a skládá se ze tří strukturních domén: N-koncové regulační domény, katalytické domény a C-koncové tetramerizační domény. Aktivita tyrosinhydroxylasy je regulována fosforylací a regulací na úrovni exprese. Fosforylace Ser-19 umožňuje navázání proteinu 14-3-3, které ovlivňuje strukturu regulační domény a chrání ji před její defosforylací a degradací. Struktura regulační domény je stále neznámá, proto jsme se rozhodli pro její objasnění pomocí technik nukleární magnetické rezonance. Byl optimalizován expresní a purifikační protokol regulační domény tyrosinhydroxylasy. Protein byl exprimován jako fúzní protein obsahující histidinovou kotvu na N-konci polypetidového řetězce. Purifikace se skládala ze dvou kroků: z niklové chelatační chromatografie a gelové permeační chromatografie. Dynamický rozptyl světla a 1 H-NMR spektroskopie byly využity k ověření monodisperzity proteinu a jeho možného použití pro další experimenty.
|
|
|
Úloha adrenergního systému v genetické hypertenzi
Loučková, Anna ; Kadlecová, Michaela (vedoucí práce) ; Husková, Zuzana (oponent)
Adrenergní systém hraje významnou roli v regulaci krevního tlaku. U spontánně hypertenzního potkana, nejvíce studovaného modelu esenciální hypertenze, je mnoho součástí adrenergního systému změněno. Změny v úrovni exprese některého z enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů nebo některého podtypu adrenergních receptorů by mohly být jednou z příčin vzniku hypertenze. V této práci byla měřena exprese genů adrenergního systému v nadledvině, kůře ledvin a dřeni ledvin u třináctitýdenních spontánně hypertenzních (SHR), Wistar-Kyoto a Brown Norway potkanů. V nadledvině SHR byla snížená exprese všech enzymů biosyntetické dráhy katecholaminů (tyrosinhydroxylasy, DOPA-dekarboxylasy, dopamin-β-hydroxylasy a fenyletanolamin-N-metyltransferasy) a téměř všech podtypů adrenergních receptorů (kromě Adra1a a Adra1d). Toto celkové snížení exprese v nadledvině SHR naznačuje, že alespoň část regulace exprese genů adrenergního systému je společná. Mechanismem útlumu exprese u SHR může být zpětná vazba přes adrenergní receptory stimulované vysokou plasmatickou koncentrací noradrenalinu. V ledvině SHR nebyl zjištěn rozdíl v expresi většiny podtypů adrenergních receptorů s výjimkou Adrb1 a Adra2c, jejichž exprese byla zvýšená. Tento rozdíl v expresi je spíše důsledkem nebo průvodním jevem než příčinou vzniku hypertenze.
|
|
|
Enzymy metabolismu katecholaminů u experimentální hypertenze
Loučková, Anna ; Kuneš, Jaroslav (vedoucí práce) ; Klevstigová, Martina (oponent)
Katecholaminy dopamin, noradrenalin a adrenalin se významně podílejí na regulaci krevního tlaku. Nejdůležitější enzymy účastnící se jejich metabolizmu jsou tyrosinhydroxyláza, DOPAdekarboxyláza, dopamin-β-hydroxyláza a fenyletanolamin-N-metyltransferáza. Tato práce shrnuje dosavadní poznatky o těchto enzymech, se zaměřením na jejich význam v procesu rozvoje esenciální hypertenze. Ke studiu hypertenze se z důvodů praktických i etických často používají experimentální modely. Nejvíce poznatků bylo získáno na spontánně hypertenzních potkanech, kvůli jejich podobnosti s lidskou esenciální hypertenzí. Metabolizmus katecholaminů se u spontánně hypertenzního potkana liší od normotenzních kontrol v mnoha ohledech. Primární příčinu tohoto typu hypertenze se od kompenzačních reakcí zatím nepodařilo rozlišit. Nicméně některými zásahy lze dosáhnout zabránění vzniku nebo alespoň zpomalení rozvoje onemocnění. Tyto poznatky mohou pomoci při hledání nových způsobů léčby lidské hypertenze.
|
|
|
Příprava vazebných partnerů 14-3-3 proteinů pro strukturní studie.
Kopecká, Miroslava ; Obšil, Tomáš (vedoucí práce) ; Teisinger, Jan (oponent)
Tyrosinhydroxylasa patří do skupiny hydroxylas aromatických aminokyselin a katalyzuje počáteční krok biosyntézy katecholaminových neuropřenašečů. Tento enzym má homoteramerní strukturu a skládá se ze tří strukturních domén: N-koncové regulační domény, katalytické domény a C-koncové tetramerizační domény. Aktivita tyrosinhydroxylasy je regulována fosforylací a regulací na úrovni exprese. Fosforylace Ser-19 umožňuje navázání proteinu 14-3-3, které ovlivňuje strukturu regulační domény a chrání ji před její defosforylací a degradací. Struktura regulační domény je stále neznámá, proto jsme se rozhodli pro její objasnění pomocí technik nukleární magnetické rezonance. Byl optimalizován expresní a purifikační protokol regulační domény tyrosinhydroxylasy. Protein byl exprimován jako fúzní protein obsahující histidinovou kotvu na N-konci polypetidového řetězce. Purifikace se skládala ze dvou kroků: z niklové chelatační chromatografie a gelové permeační chromatografie. Dynamický rozptyl světla a 1 H-NMR spektroskopie byly využity k ověření monodisperzity proteinu a jeho možného použití pro další experimenty.
|
host ::
RSS.