|
|
Signální dráhy a geny regulující u prasete zrání oocytů a expanzi kumulu indukované gonadotropiny
Blaha, Milan ; Němcová, Lucie (vedoucí práce) ; Král, Jiří (oponent)
V podmínkách in vitro jsou meotické zrání prasečích oocytů a expanze kumulu indukovány FSH a peptidy rodiny EGF (AREG a EREG). FSH a tyto peptidy způsobují expresi genů spojených s expanzí kumulu (HAS2, PTGS2 a TNFAIP6). Za účelem zjistit signální dráhy, které kontrolují expanzi kumulu indukovanou FSH nebo AREG, prasečí komplexy oocyt-kumulus (COC) byly ošetřeny specifickými inhibitory proteinkináz. Inhibitory MAPK3/1, MAPK14 a ERBB1 signifikantně redukovaly expresi HAS2, PTGS2 a TNFAIP6. Tyto inhibitory rovněž snížily expresi AREG a EREG indukovanou FSH a LH v buňkách stěnové granulózy. Inhibitor PKA překvapivě neměl efekt na expresi AREG v COC, ale snížil expresi TNFAIP6 indukovanou AREG. Inhibitor PI3K zvýšil expresi AREG a PTGS2, ale snížil expresi EREG, HAS2 a TNFAIP6. Anlog cGMP (8-CPT-cGMP) neovlivnil expresi genů spojených s expanzí kumulu. Nicméně blokoval spontánní meiotickou maturaci prasečích oocytů a jeho efekt byl eliminován FSH. Klíčová slova: expanze kumulu, geny spojené s expanzí kumulu, meiotická maturace, FSH, amfiregulin, cGMP
|
|
|
Regulation of translation in mammalian oocytes and early embryos
Jindrová, Anna ; Šušor, Andrej (vedoucí práce) ; Flemr, Matyáš (oponent) ; Fulková, Helena (oponent)
Oocyty, které dorostou do své plné velikosti, procházejí dalším vývojem jako transkripčně inaktivní. Dokončení meiózy a raná embryogeneze závisí na maternálních mRNA syntetizovaných a uložených během období růstu, tedy genová exprese je v oocytech během této doby řízena téměř výhradně na úrovni stabilizace a translace mRNA. Z tohoto důvodu jakýkoliv metabolismus mRNA může mít v této fázi vývoje rozhodující roli. Umístění RNA v rámci buňky a její následná lokalizovaná translace jsou mechanismy zodpovědné za časově a místně ohraničenou genovou expresi. Zaměřili jsme se na vizualizaci mRNA a jejich in situ translaci během vývoje savčích oocytů a raných embryí. Charakterizovali jsme lokalizaci populace celkové RNA společně s proteiny vázajícími RNA v jádře oocytu a raného embrya. Vizualizovali jsme specifické ribozomální proteiny, které se podílí na translaci. Ukázali jsme, že klíčový regulátor cap- dependentní translace, kináza mTOR, je aktivován po rozpadu jaderného obalu (nuclear envelope breakdown, NEBD) a díky tomu je následně jeho substrát, translační represor 4E-BP1, inaktivován. Přítomnost inaktivovaného 4E-BP1 na nově vznikajícím meiotickém vřeténku indikuje probíhající translaci v této oblasti oocytu. Na základě naší RNA sekvenační databáze jsme vybrali specifický kandidátní transkript,...
|
|
|
Signální dráhy a geny regulující u prasete zrání oocytů a expanzi kumulu indukované gonadotropiny
Blaha, Milan ; Němcová, Lucie (vedoucí práce) ; Král, Jiří (oponent)
V podmínkách in vitro jsou meotické zrání prasečích oocytů a expanze kumulu indukovány FSH a peptidy rodiny EGF (AREG a EREG). FSH a tyto peptidy způsobují expresi genů spojených s expanzí kumulu (HAS2, PTGS2 a TNFAIP6). Za účelem zjistit signální dráhy, které kontrolují expanzi kumulu indukovanou FSH nebo AREG, prasečí komplexy oocyt-kumulus (COC) byly ošetřeny specifickými inhibitory proteinkináz. Inhibitory MAPK3/1, MAPK14 a ERBB1 signifikantně redukovaly expresi HAS2, PTGS2 a TNFAIP6. Tyto inhibitory rovněž snížily expresi AREG a EREG indukovanou FSH a LH v buňkách stěnové granulózy. Inhibitor PKA překvapivě neměl efekt na expresi AREG v COC, ale snížil expresi TNFAIP6 indukovanou AREG. Inhibitor PI3K zvýšil expresi AREG a PTGS2, ale snížil expresi EREG, HAS2 a TNFAIP6. Anlog cGMP (8-CPT-cGMP) neovlivnil expresi genů spojených s expanzí kumulu. Nicméně blokoval spontánní meiotickou maturaci prasečích oocytů a jeho efekt byl eliminován FSH. Klíčová slova: expanze kumulu, geny spojené s expanzí kumulu, meiotická maturace, FSH, amfiregulin, cGMP
|
host ::
RSS.