|
|
Vývoj a využití vysokoúčinných separačních metod pro analýzu pojivových tkání
Braun, Martin ; Štulík, Karel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Samcová, Eva (oponent)
4 Anotace: Tato práce se zabývá vývojem a využitím vysokoúčinných separačních metod vhodných pro stanovení klinicky významných degradačních produktů kolagenu a elastinu představujících nejvýznamnější proteiny pojivových tkání. K jejich analýze byly použity různé chromatografické a elektroforetické metody, zahrnující vysokoúčinnou kapalinovou chromatografie (HPLC), kapilární zónovou elektroforéza (CZE) a micelární elektrokinetickou kapilární chromatografii (MEKC). Cílem této práce byla optimalizace analytických separačních postupů a metod a jejich využití ke stanovení klinicky významných markerů degradace pojiva. Hodnoceny byly také nejvýznamnější validační parametry použitých metod, což umožňuje jejich srovnání s jinými přístupy. Jedním z nejvýznamnějších přínosů této práce bylo potvrzení vysoké citlivosti, přesnosti, opakovatelnosti a robustnosti použitých metod jak bylo potvrzeno u řady typů biologických vzorků. Důležitým přínosem této práce je také úspěšná současná HPLC separace příčných vazeb kolagenu a elastinu. V práci jsou popsány metody navržené a optimalizované za účelem separace a kvantitativní analýzy nejvýznamnějších příčných vazeb kolagenu a elastinu, tj. pentosidinu, pyridinolinů a desmosinů. Tyto vysokoúčinné separační metody pro separaci a stanovení síťujících elementů pojivových tkání již...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Separace hepcidinu na magnetických sorbentech s následnou analýzou pomocí MALDI-TOF-MSí
Vávrová, Jana ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Tichá, Marie (oponent)
Hepcidin je peptid, který se tvoří v hepatocytech a který je sekretován do krevní plazmy a vylučován močí. Předpokládá se, že tento peptid hraje důležitou regulační úlohu v metabolismu železa a určení změn jeho hladiny v moči a krevním séru má význam pro diagnózu závažných onemocnění. Dosud popsané metody pro stanovení hepcidinu v moči a séru mají omezení a nelze je obecně používat. V současné době se pro konečnou analýzu hepcidinu používá MALDI-TOF MS. Před tímto závěrečným krokem je však nutná separace peptidu ze vzorků moči nebo séra. Předmětem diplomové práce bylo studium separačních metod, které by následně umožnily MALDI-TOF MS analýzu hepcidinu. V naší práci jsme použili magnetické sorbenty lišící se gelovou matricí a funkčními skupinami. Byly použity jednak komerční magnetické sorbenty obsahující -COOH skupiny a jednak hydrofilní polymetakrylátové mikročástice P(HEMA-co-GMA)-IDA s imobilizovanými kovovými ionty (připravené na Ústavu makromolekulární chemie AV ČR). Naše výsledky prokázaly, že pro adsorpci hepcidinu při pH 6,8 je možné použít komerční magnetické částice fluidMAG-CMX, SiMAG-Carboxyl a SiMAG-Silanol. Magnetické částice P(HEMA-co-GMA)-IDA s imobilizovanými měďnatými ionty jsou pro adsorpci standardu hepcidinu použitelné v širokém rozmezí pH, zatímco v případě imobilizovaných...
|
|
|
Pharmaceutical application of high performance ion chromatography in analysis of organic anions and cations
Čujová, Sabína ; Čabala, Radomír (oponent) ; Pacáková, Věra (vedoucí práce)
Tato práce je zaměřena na aplikaci iontové chromatografie v analýze organických iontů pro farmaceutické účely. V oblasti farmaceutické analýzy se iontová chromatografie používá stále časteji. Její použití zahrnuje analýzu nečistot a metabolitů. Práce se nejprve věnuje srovnání iontové chromatografie s běžnými separačními technikami použivanými ve farmacii, jako je například plynová nebo vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Dalším cílem práce byl vývoj a validace metod iontové chromatografie pro určení čistoty a kontrolu kvality účinných látek Rivastigmine hemitartrate a Pramipexole hydrochloride. Klíčová slova: iontová chromatografie, chromatografie na reverzní fázi, iontově-párová chromatografie, iontově-vylučovací chromatografie, ionexová chromtografie, GC and HPLC
|
|
|
Stanovení lipidového profilu v biologickém materiálu metodou HPLC-ELSD
Vaindlová, Petra ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Feltl, Ladislav (oponent)
Byla optimalisována metoda kapalinové chromatografie s evaporativním detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) pro stanovení neutrálních a polárních lipidů. Jako stacionární fáze byla využita kolona plněná silikagelem s chemicky vázaným diolem. Jako mobilní fáze sloužil ternární gradient o složení A: hexan-tetrahydrofuran 99:1 (v/v), B: isopropanol-chloroform- kyselina octová 82:20:0,01 (v/v/v), C: isopropanol-voda-triethylamin 47:47:6 (v/v/v). Kalibrační závislosti byly měřeny v rozsahu 2-200 μg v nastřikované dávce a pro jednotlivé lipidové třídy odpovídalo optimální proložení experimentálních bodů těmto funkcím: triacylglyceroly - polynom 3. stupně (R=0,998), estery cholesterolu - mocninná závislost (R=0,998), volný cholesterol - polynom 3. stupně (R=0.9998), ceramid - mocninná závislost (R=0,992), kardiolipin - kvadratická závislot (R=0,998), fosfatidylethanolamin - mocninná závislost (R=0,999), fosfatidylcholin - kvadratická závislost (R=0,997), fosfatidylserin - polynom 3. stupně (R=0,9985), sfingomyelin - polynom 3. stupně (R=0,9997), lysofosfatidylcholin - mocninná závislost (R=0,9986). Analysa synthetického kontrolního vzorku ukázala výtěžnost v rozmezí 82-95%. Na základě těchto měření byly pak stanoveny koncentrace jednotlivých lipidových tříd v mozkové tkáni u myších samic a třicetidenních...
|
|
|
Využití monolitických kolon v kapilární kapalinové chromatografii
Holdšvendová, Petra ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
UVOD od 90. let minulého století [1]' kdy se objevily první zmínky o novémtypu stacionámifáze pro HPLC, o monolitech, se staly objektem zájmu mnoha vědeckých skupin [2-a]. Jejich nespornou qýhodou oproti klasickým náplňovým kolonám je jejich stabilita při pH v rozmezi 2 - 12, pÍi kterém není možné klasické kolony používat.Dalšímivyhodami je pakjejich snadná a levná příprava a nepřítomnost frit na koncích separačního media' jelikož monolit je kovalentné vázán na vnitřní stěnu kapiláry [5]. Jejich nevýhodou ovšem zatím zistává horší opakovatelnost přípravy stacionární fáze, neŽ je tomu u klasických kolon. Tato disertaění práce se zabývá monoliý na bázi organichých polymeru' a to zejména methakrylátové monolity. Týo monolity byly poprvé představeny Petersem a kol. [6], od tédoby bylo vyrobeno mnoho monoliticloých fází srozdílnými separaěními vlastnostmi [7-10]. Methakrylátové monolity jsou vhodné pro separaci jak nízkomolekulárníchlátek |7f, tak pro separaci vysokomolekulárních látek jako jsou proteiny, oligonukleotidy, peptidy ěi sacharidy [ 1 0- i 2].
|
host ::
RSS.