|
|
Fluorescent analysis of the differential protein expression in normozoospermic and asthenozoospermic sperm samples
Děd, Lukáš ; Čapková, Jana ; Kubátová, Alena ; Teplá, O. ; Pěknicová, Jana
Asthenozoospermia is one of the main seminal pathologies underlying male infertility. Previous proteomic studies have demonstrated the significant differences in the protein profiles between normozoospermic and asthenozoospermic sperm samples. Since these studies were primarily focused on the identification of differentially expressed proteins by mass spectrometry, we aimed to evaluate the ability of our diagnostic antibodies to detect the differential expression of selected protein markers by fluorescent microscopy and flow cytometry techniques. Therefore, we analyzed sperm samples from 30 men with normal and 30 men with astheno spermiograms, average by the panel of our diagnostic anti-human sperm (Hs) antibodies. Fluorescent microscopy and flow cytometry analysis revealed quantitative differences in the protein abundances between normo and astheno sperm samples, namely, in GAPDHs, evaluated with Hs-8 MoAb, VCP, evaluated with Hs-14 MoAb, and ATP synthase, evaluated with MoAb Hs-36. From the methodological point of view, we observed very high correlation between the data obtained by fluorescent microscopy and flow cytometry techniques and therefore both methods are useful for evaluation of protein differences associated with asthenozoospermia. From the clinical point of view, we observed the strong association of the low sperm motility in the sample with the expression of proteins, playing an important role in sperm energy metabolism (expected), but also with the expression of all tested intra-acrosomal proteins. These findings further demonstrate asthenozoospermia as a complex semen disorder frequently associated with other semen pathologies, which are not diagnosed by basic semen analysis, and the possibility to use monoclonal antibodies as a tool for diagnosis of protein associated sperm pathologies in the semen with the low sperm motility.
|
|
|
Rozšíření invazních rostlin v CHKO Kokořínsko
Váňová, Petra ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Martin, Martin (oponent)
Bakalářská práce je zaměřena na výskyt invazních rostlin v CHKO Kokořínsko-Máchův kraj. V jižní části CHKO probíhalo mapování současného rozšíření tří invazních druhů - zlatobýlu kanadského (Solidago canadensis), křídlatky české (Reynoutria x bohemica) a netýkavky žláznaté (Impatiens glandulifera). Snahou bylo zmapování výskytu invazních rostlin a následné vytvoření map výskytu ve sledovaném území prostřednictvím programu ArcMap. Součástí práce bylo i určení výskytu invazních druhů v biotopech NATURA 2000 a ekosystémech dle KVES. Ze všech tří sledovaných rostlin se ve sledovaném území nejvíce vyskytoval zlatobýl kanadský. Z výsledného terénního výzkumu i současných odborných poznatků vyplývá, že nejvíce invadované plochy zlatobýlem jsou biotopy silně ovlivněné člověkem - hospodářské louky, nepůvodní křoviny, ale i urbanizované území. Při terénním mapování byl zaznamenán pouze omezený management při odstraňování rostlin z invadovaných biotopů, přestože část sledovaného území se nachází v EVL Kokořínsko.
|
|
|
Vliv environmentálních podmínek na šíření invazních rostlin v CHKO Kokořínsko
Heřmanová, Lucie ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Markéta, Markéta (oponent)
Bakalářská práce je zaměřena na problematiku výskytu invazních druhů. Ve vybrané části území CHKO Kokořínsko probíhalo mapování současného rozšíření vybraných invazních druhů zlatobýlu (Solidago) a křídlatky (Reynoutria). Cílem této práce bylo zmapování dotčených invazních druhů a následné vyhodnocení výsledků, kdy bylo zkoumáno, který biotop dotčené druhy osidlují. Jako doplňková analýza byla zkoumána preference typu půdy jednotlivých druhů. Nejčastěji se vyskytoval S. canadensis, který také pokrýval největší plochu. Z výsledného hodnocení vyplynulo, které biotopy a ekosystémy druhy nejvíce invadují. Z dat je zároveň možné vidět, že druhy nejčastěji osidlují antropogenně ovlivněná stanoviště a preferovanou půdou je hnědozem.
|
|
|
Invazní rostliny ve vybraných EVL Karlovarského kraje
Bernasová, Nikola ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Markéta, Markéta (oponent)
V zájmovém území Chráněná krajinná oblast (CHKO) Slavkovský les byly vybrány dvě lokality, ve kterých probíhalo mapování invazních rostlin. Terénní práce byly zaměřeny na zmapování výskytu bolševníku velkolepého, všech druhů křídlatek, zlatobýlu kanadského, zlatobýlu obrovského a netýkavky žláznaté. Cílem práce bylo stanovení invadovaných lokalit v zájmovém území CHKO Slavkovský les. Bylo zjištěno, že na mapovaném území se nejvíce vyskytuje bolševník velkolepý. Značné množství invadovaných lokalit bylo již po chemické likvidaci. Zlatobýl kanadský a zlatobýl obrovský se v zájmovém území nacházel v malé míře a netýkavka žláznatá se nevykytovala téměř vůbec. Lokality invadované křídlatkou nebyly nalezeny. Invadované lokality se nejčastěji vyskytovaly v okolí mezofilních luk, urbanizovaného území, orné půdy. Touto problematikou se zabývají jak Plán péče o chráněnou krajinnou oblast Slavkovský les, tak různé projekty zaměřené na mapování a likvidaci invazních druhů.
|
|
|
Vliv biotopů na šíření invazních rostlin v CHKO Kokořínsko
Kofránková, Petra ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Martin, Martin (oponent)
Cílem této práce je analyzovat výskyt hlavních invazních druhů na území CHKO Kokořínsko - Máchův kraj s využitím metod sběru dat v terénu.
Tři rostlinné ivazní druhy byly identifikovány v zájmovém území a prostorové informace o těchto druzích byly shromážděny pomocí terénního mapování s použitím zařízení GPS a mapového podkladu v podobě leteckých snímků.
Ivazní druhy se vyskytují na 12 katastrálních územích z 16. Nejzasaženější jsou biotopy ovlivněné člověkem, půdní typ kambizem a III.vegetační zóna.
|
|
| |
|
| |
|
|
Endocrine disruptors induce transgenerational alterations of the male reproductive parameters and mirna expression profiles in mouse primordial germ cells
Děd, Lukáš ; Brieno-Enríquez, M.A. ; García-López, J. ; Cárdenas, D.B. ; Guibert, S. ; Hourcade, J.de D. ; Pěknicová, Jana ; Weber, M. ; del Mazo, J.
Primordial germ cells (PGCs) are the embryonic precursors of the germ cell linage, which are restricted to form only sperm and oocytes following their specification from pluripotent cells. PGC precursors are specified in the epiblast around 6.25 days post coitum (dpc), and around 7.25 dpc become identifiable in a 40 cell-cluster. In the present study, we used a mouse model to evaluate the trans-generational (F1-F3) effects of vinclozolin (VCZ) administrated in two doses on male reproductive parameters. We observed decreased fertility rate, higher apoptotic rate and histopathologic alterations in adult testis, PGC number reduction, increments of PGCs apoptosis and changes in PGCs gene expression among all three generations. In the attempt to clarify the trans-generational transmition of the altered phenotypes, we performed the microRNA expression and DNA methylation analysis. We observed the significant alteration in the expression of multiple microRNA and microRNA-regulated genes which are important for PGCs specification, including LIN28, let-7 and BLIMP1. Trans-generational deregulation in the expression of factors involved in the Lin28-let-7-Blimp1 pathway can lead to specific VCZ-induced phenotype observed in our study.
|
|
|
The ubiquitin–proteasome system is involved in the regulation of activity of spermadhesin aqn1 and acrosin inhibitor, the two sperm surface proteins, during porcine fertilization
Jonáková, Věra ; Yi, Y.J. ; Postlerová, Pavla ; Pěknicová, Jana
The spermadhesin AQN1and acrosin inhibitor (AI/SPINK2) proteins bind to the sperm plasma membrane at ejaculation. The AQN1 has been implicated in sperm binding to zona pellucida (ZP) of the oocyte as well as in sperm interactions with the epithelium of the oviductal sperm reservoir. The SPINK2 protects spermatozoa from proteolytic degradation during their trip up the female genital tract toward the oocyte. This study examined the role of two components of the 19S proteasome regulatory complex, the ubiquitin C-terminal hydrolase UCHL3 and PSMD8 in the AQN1-mediated boar sperm binding to zona pellucida. Interaction of PSMD4 subunit with the acrosomal surface-associated acrosin inhibitor AI/SPINK2 provided another line of evidence for the presence of 26S proteasomes on the sperm surface. Detection of the ubiquitinated forms of SPINK2 supports the hypothesis that SPINK2 activity is controlled by ubiquitin-proteasome system (UPS). The activity of the porcine AQN1, and thus the efficiency of sperm-oocyte recognition/binding, may be controlled by elements of the sperm surface-bound UPS, in particular by UCHL3, and by proteasomal regulatory complex subunit PSMD8. Ubiquitinated isoforms of AQN1 were also detected in boar sperm extracts. The UCHL inhibitor ubiquitin aldehyde and the antibodies against UCHL3 or PSMD8 increased the rate of sperm-ZP penetration and polyspermy during porcine in vitro fertilization (IVF). In contrast, the addition of recombinant UCHL3 to fertilization medium significantly reduced polyspermy rates, while maintaining satisfactory rate of monospermic fertilization (~50%). These results are significant for production agriculture. The high level of polyspermy that hinders porcine IVF for commercial embryo transfer could be mitigated by the modulation of the UCHL3 and/or PSMD8 activity.
|
|
|
Changes in the expression of selected testicular genes in mice
Valášková, Eliška ; Margaryan, Hasmik ; Žatecká, Eva ; Pěknicová, Jana
The decrease in population fertility has become a major concern in many developed countries. Recent studies show that infertility is affecting an estimated 15% of all couples (World Health Organization, WHO, 2010). Male infertility is the primary or contributing cause in 60% of cases. Male infertility is caused by a number of factors, such as genetic background, various environmental factors and disease. Diabetes mellitus (DM), a serious health problem on its own, is also suspected to be a contributing factor to male infertility. The aim of this project was to analyze the cellular, molecular and genetic effects of diabetic environment on spermatogenesis and sperm quality and to determine the impact of DM on the in vivo reproduction, using the mouse model (Mus musculus) inbred FVB. Diabetes was induced using streptozotocin. We used our knowledge and tools (unique monoclonal antibodies developed by our group) to determine the status of reproductive organs, anogenital distance, and the quality of sperms. Genetic analysis was performed by a quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (qPCR). We tested selected genes which are expressed in testicular tissue and thus can influence process of spermatogenesis and consequently the sperm quality. Our preliminary data strongly suggest that DM impairs male fertility. We have found significant changes in the body and reproductive organ weight of mice with DM. We have identified qualitative and quantitative changes in the expression of proteins in epididymal fluid and sperms. We have also detected an increased number of apoptotic cells in sperm of diabetic mice compared to the control group. To our knowledge, there is no study assessing the correlation between DM and “unexplained infertility”. In view of this, it is essential to analyze the effects of DM on male fertility, sperm quality, and reproduction parameters.
|
host ::
RSS.