|
|
Studium struktury a metabolismu spermií savců a ryb ve vztahu k procesu reprodukce
Koubek, Pavel ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Komrsková, Kateřina (oponent) ; Flajšhans, Martin (oponent)
4. áVĚR V rámcistudiaspermiíkostnatýcha chrupavčitýchrybby|vytvořenkomp|exníprotoko| optima|izovanýproimunof|uorescenčníznačeníproteinůkapřícha jeseteříchspermií. Tento protoko|'vycházejícíz postupupro imunof|uorescenčníznačenína savčích spermiích,ref|ektujepředevŠímjednoduššía snáze poŠkodite|noustruktururybích spermií.Je tak minima|izovánomoŽnépoškozeníběhemzpracovánívzorkůa vznik nespecifickýchartefaktů,kteréby moh|ynegativněov|ivňovatvýs|edky.Vytvoření vhodnéhoprotoko|upro imunof|uorescenčníznačeníje tak dů|eŽiténejen pro výzkumnéexperimenty,a|ei proap|ikačnívyuŽití'např.při hodnoceníkva|ityspermií' kdyje reprodukovate|nostmetodynezbytná. Při studiu energetickéhometabo|ismu,zajišťujícíhopohyb kapříchspermií,by|a s vyuŽitímspecifickémonok|onálníproti|átkypotvrzenapřítomnostminimá|nědvou isoforem kreatin kinasy (cK)' tvořícíchATP-transportníkyvad|o.Na modeIu demembranizovanýchkapříchspermiíby| prokázánvýznamtohototransportního mechanismua schopnostcytop|asmatickéCK umoŽnitcAMP_nezávis|ouiniciaci f|age|árníhopohybua jeho udÉení.Vdalšíprácizbýváověřitpředevšímhypotézu, zda-lije ú|ohafosfokreatinuv kapříchspermiíchprimárnětransportnínebose jedná předevŠímo energetickézásoby. Studiumspermiíchrupavčitýchryb by|ozaměřeno na strukturuspermiíjesetera ma|éhos vyuŽitímskenovacíhoi...
|
|
|
Myosin I and actin binding proteins in cell
Krásna, Hana ; Hozák, Pavel (vedoucí práce) ; Motlík, Jan (oponent) ; Pěknicová, Jana (oponent)
Existuje množství prací, které dokazují přítomnost a důležitost aktinu v jádře. Aktin se v buněčném jádře pojí s procesy od chromatinového remodelingu přes transkripci, splicing, až po jaderný transport. Pro zabezpečení dynamiky jaderných procesů se aktin spojuje s jedním ze základních motor proteinů, kterým je myozin. Poukazuji na úlohu aktinu a jaderného myozinu I (NMI) v transkripci ribozomálních genů pomocí RNA polymerázy I (Pol I). Mikroinjekcí protilátek proti aktinu a NMI jsme potlačili transkripci Pol I in vivo. Skupina in vitro pokusů potvrzuje inhibici transkripce Pol I po použití protilátek proti aktinu a NMI na čisté DNA i upraveném chromatinovém templátu. Koimunoprecipitační pokusy odhalují fyzické spojení aktinu a NMI s rRNA geny a s transkripčním komplexem Pol I. Zatím co se aktin váže na iniciační a elongační Pol I molekulu, NMI interaguje se subpopulací Pol I zodpovědnou za iniciaci vázanou na TIF-IA, tedy bazální transkripční faktor zodpovědný za regulaci rRNA syntézy. V současnosti je známých několik hypotéz o formě jaderného aktinu. Nedávné výzkumy poukazují na pravděpodobnou dynamickou rovnováhu mezi monomerní a polymerní formou. V této práci prezentuji ultrastrukturální rozložení šesti aktin vazebných proteinů (-aktinin, filamin, spektrin, paxilin, p190RhoGAP a tropomyozin)...
|
|
|
Vliv diabetes mellitus 2. typu na myší reprodukční parametry
Stiborová, Martina ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Nagyová, Eva (oponent)
Neplodnost je definována jako neschopnost počít potomka do jednoho roku při pravidelném pohlavním styku. Postihuje až 15 % párů po celém světě (WHO, 2010). k celkové neplodnosti mužský faktor přispívá z více jak 50 % případů. Plodnost muže je ovlivněna řadou faktorů, jako je genetické pozadí, životní prostředí a různé onemocnění, například diabetes mellitus (DM). Diabetes mellitus je závažný zdravotní problém, který postihuje 451 miliónů lidí po celém světě (ve věku 18-99 let) a počet jedinců s tímto onemocněním stále přibývá (Cho a spol., 2018). Navíc je mateřství odkládáno do pozdějšího věku, kdy klesá plodnost jedinců a zároveň se objevují metabolická onemocněními jako je diabetes mellitus 2. typu (DM2). Cílem této práce bylo zjistit vliv metabolického onemocnění diabetes mellitus 2. typu na reprodukční parametry myší inbrední linie C57BL/6J v porovnání s kontrolní skupinou a možný vliv paternálního diabetu na první filiální generaci. Při hodnocení vlivu DM2 byly použity inovativní metody, pomocí nichž byly studovány interní proteiny spermie a semenotvorného kanálku. Výsledky naší práce ukázaly, že navozený DM2 ovlivnil váhu těla, prostaty a jater paternální generace. u experimentálních potomků byla snížena váha testes, epididymu a jater. Dále byla ovlivněna u obou generací morfologie spermií a...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Protein synthesis and protein degradation in mammalian oocyte development
Šušor, Andrej ; Motlík, Jan (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent) ; Petr, Jaroslav (oponent)
ZÁvĚnv U savčíchoocytůjsme ana|yzovali expresi a regulaci eukaryoticlcýchiniciaěníchfaktoruajejich ďrnity k ,methylSefaróze v invitro podmínkách.V nďí laboratořijsmeoptimalizovaliprotokol pro produkci partenogeniclcýchembryí,která sloužilajako modelpro studiumčasnéembryogeneze. Metoda protilátkovéhomikročipunám umožnilasledovat regulaci signálních drah, primrárněv pruběhu meiózy praseěích oocytůa takéu druhůjakojsoubovinní,žabía oocytyhvězdice. Proteomická ana|ýza zrqicích oocytů nám umoŽnila identiťftovatdůležitouregulačnímolekulu UCH-LI, která byla následnédetailně sfudovánaa úspěšněbyla odkryta její speciťrcká role v průběhumeiózy av procesufertilizace. I6
|
|
| |
|
| |
|
|
Rekombinantní fragmenty protilátek
Král, Vlastimil ; Sedláček, Juraj (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent) ; Hašek, Jindřich (oponent)
6. ZÁvĚn Cílem této disertace bylo rozvinout v tuzemských podmínkách technologii příprav1, rekombinantních fragmentů protilátek a ověřit ce|ý postup na několika modelových monok|onálních protilátkách potenciálně využite|ných v diagnostice a terapii. Pro čtyři protilátky' mAb TU-20, M75, MEM97 a F||,2'32' byly zkonstnrovány rekombinantní fragmenty v ruzných formátech (scFv fragmenty monovalentní i bivalentní' tzv. diabody; intrabod)' pro intracelulámí expresi) a pro .iejich hetero|ogní expresi byly použity vektory umožňrrjícíexpresi vE. coli (ve ťormě c1,toplasmatíckých inkluzí' periplasmatických irrktuzí a v rozpustné formě) a v hmyzích 52 buňkách (exprese glykosylovaných ťorem scFv Ířagmentťr do nrédia). V případě exprese proteinťl v nerozpustne formě byly vyvinuty rel|aturačnípostupy pÍo získáni aktivních forem scFv fragmenhi. By| testován vliv délkylinkeru .(GlyaSer)". (kde x je I až4)spojujicího varíabilní doménu lehkého a těŽkého řetězce na vznik ruzných muItirnerních forem scFv. Jako optinrátní pro vznik pouze lrronon|emího scFv fragmentu se ukiizala déIka 20 arninokyse|in. ScFv s linkerem 15 arninokyse|in dlouhýn je srněsí mono-, di. a trimernich forern scFv, .;ejichž zastoupeni je ávislé na koncentraci scFv v roztoku (se vzrustajíci koncentrací vzrůstá množstvínásobných forem scFv, hlavně dimeru)....
|
host ::
RSS.