|
|
Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik
Kubíček, Jiří ; Konečná, Klára (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Studijní obor: Farmacie Autor: Jiří Kubíček Vedoucí práce: RNDr. Klára Konečná, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení bezobratlého zvířecího modelu, Galleria mellonella, pro studium účinnosti in vivo, stávajících a nově syntetizovaných, kandidátních antituberkulotik. Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo představit bezobratlý organismus, Galleria mellonella (G. mellonella), Pyralidae, jakožto alternativní, ekonomicky výhodnější a morálně lépe akceptovatelný model pro studie účinnosti antituberkulotických látek in vivo. V experimentální části této práce byla úvodem věnována pozornost optimalizaci metodických kroků, které by měly vést k vyšší reprodukovatelnosti a validitě získaných dat. Byl hodnocen vliv disagregačního suplementu, tyloxapolu, na růst bakterie Mycobacterium aurum (M. aurum). Byl rovněž mapován růst tohoto mikrobiálního kmene v kultivačním médiu, Middlebrook 7H9, za účelem určit exponenciální fázi růstu. V rámci druhé části experimentů byla provedena infekce larev G. mellonella bakteriálním kmenem M. aurum, s následnou administrací vybraných, komerčně dostupných antituberkulotik (anti-TB). Metody: Pro mapování exponenciální fáze růstu bakterie M. aurum byla provedena kultivace...
|
|
|
Screening systémových amyloidóz v materiálu endoskopických biopsií.
Květoň, Martin ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Diplomová práce Kandidát: Bc. Martin Květoň Studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Školitel: prof. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Název: Screening systémových amyloidóz v materiálu endoskopických biopsií CÍL PRÁCE Systémové amyloidózy tvoří komplexní a heterogenní skupinu závažných onemocnění, které jsou výsledkem konformační poruchy proteinů a jejichž společným znakem je ukládání patologických proteinových hmot (amyloidu) v extracelulárním prostoru tkání. Diagnostika amyloidóz je založena na histopatologickém vyšetření tkáňových vzorků a přímé demonstraci přítomnosti amyloidových depozit. Celkovým účelem této diplomové práce bylo vytvořit, aplikovat a následně evaluovat screeningový program zaměřený na systémové amyloidózy. METODY V první části experimentální studie byly porovnány dostupné barvící techniky, používané k průkazu amyloidových hmot ve tkáni. Druhá část experimentální studie spočívala v provádění screeningových vyšetření u endoskopických bioptických vzorků gastrointestinálního traktu. VÝSLEDKY Na základě výsledků porovnání byla jako vhodná screeningová technika zvolena metoda, využívající barvivo Sirius red F3B. V rámci screeningového programu bylo histopatologicky...
|
|
|
Markery dysfunkce endotelu a solubilní endoglin
Pešlová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Školitel: Doc. PharmDr. Petr Nachtigal, PhD. Posluchač: Lenka Pešlová Název diplomové práce: Markery dysfunkce endotelu a solubilní endoglin Cíl práce: Popsat případné změny v histologické stavbě srdce u myší s nízkou a vysokou hladinou solubilního endoglinu (Sol-Eng+). Zaměřili jsme se na popis obecné histologie, na sledování změn ve vazivu a na případný rozvoj zánětlivých reakcí pomocí imunohistochemických metod. Metoda: Použili jsme geneticky modifikované samice kmene CBAxC57BL/6J s nízkými či vysokými hladinami solubilního endoglinu (Sol-Eng+ ). Šest měsíců staré samice byly krmeny vysokotukovou dietou pro hlodavce obsahující 1,25 % cholesterolu a 40 % tuku po dobu tří měsíců. Poté byly samicím odebrány myokardy. K detekci exprese endoglinu byla využita metodika imunohistochemie En Vision- CD3-T-lymfocyty (rabbit anti mouse). Při histologické analýze bylo zvoleno barvení hematoxylin-eosin a zelený trichrom. Výsledky: Histologická analýza neprokázala patologickou akumulaci kolagenu v myokardu u žádného sledovaného zvířete, nebyly pozorovány ani žádné změny v barvení jader ani v cytoplazmě, ani žádná infiltrace leukocytů. Imunohistochemická analýza neprokázala přítomnost lymfocytů T u žádného...
|
|
|
Imunohistochemická detekce makrofágů v aterosklerotických plátech arteria brachiocephalica I
Škodová, Sabina ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Sabina Škodová Imunohistochemická detekce makrofágů v aterosklerotických plátech arteria brachiocephalica. Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotní laborant Cíl práce: Cílem této bakalářské práce bylo nastavit imunohistochemické metody pro detekci makrofágů v arteria brachiocephalica apoE/LDLR receptor deficientních myší. Práce se dále zaměřuje na kvantifikaci exprese těchto makrofágů u skupiny myší, které byla podávána standardní dieta a u myší, kterým byla podávána dieta s nízkým obsahem sacharidů a vysokým obsahem proteinů Metody: Ke studii byly použity samice apoE/LDLR deficientní myši rozdělené do dvou skupin (v každé skupině bylo 6 myší). Jedné skupině byla podávána standardní dieta (kontrolní skupina) a druhé skupině byla podávána dieta s nízkým obsahem sacharidů a vysokým obsahem proteinů (LCHP). Tato dieta byla myším podávána 8 týdnů. Následně byla na řezech arteria brachiocephalica provedena imunohistochemická analýza, využívající ke zviditelnění makrofágů metodiku Immpress s detekčním činidlem diaminobenzidin (DAB). Poté byla provedena biochemická a stereologická analýza. Výsledky: Biochemická analýza prokázala zvýšení hladin celkového cholesterolu u myší krmených LCHP dietou. Imunohistochemická analýza prokázala přítomnost makrofágů v...
|
|
| |
|
|
Sledování markerů oxidačního stresu u modelu chronického zánětu tlustého střeva
Hocková, Erika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Crohnova nemoc a ulcerózní kolitida se řadí do idiopatických střevních zánětů. NF - κB představuje skupinu pěti různých proteinů - p65 (RelA), c-Rel, RelB, p50 a p52. NF - κB je schopen nastartovat expresi různých prozánětlivých genů a ovlivnit tak proces mukosálního zánětu, také zprostředkovává různé specifické buněčné děje. Bilirubin je endogenní látka, u které byly zjištěny antioxidační a protizánětlivé účinky, které by mohly ovlivnit proces zánětu a mít protektivní účinek. Tato diplomová práce se zabývala vypracováním metodiky pro detekci nukleárního transkripčního faktor kappa B na parafinových řezech a sledováním jeho exprese ve stěně tlustého střeva normobilirubinemických a hyperbilirubinemických (Gunn kmen) potkanů po indukci chronického zánětu pomocí imunohistochemických metod. Ve studii bylo použito 8 potkanů kmene Gunn (G+ ) a 8 potkanů kmene Wistar (K+ ), kterým byl dlouhodobě podáván dextran sulfát (DSS). Sedm dnů po sobě byl do pitné vody přidáván DSS (koncentrace 2% w/v) s následným podáváním pouze pitné vody bez DSS po dobu 14 dnů. Popsaný třítýdenní cyklus se 2x zopakoval (proběhly tedy 3 cykly). Jako kontroly byli opět použiti potkani kmene Gunn (n=6) a Wistar (n=6), kteří nebyly vystaveni vlivu DSS. Výsledky imunohistochemické analýzy prokázaly detekci NF-κB receptoru ve stěně...
|
|
|
Vliv atorvastatinu na expresi markerů kaskády transformujícího růstového faktoru beta v experimentální aterogenezi
Frnochová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Lenka Frnochová Vliv atorvastatinu na expresi markerů kaskády transformujícího růstového faktoru beta v experimentální aterogenezi. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo pozorovat expresi ALK-1 a VEGF v aterosklerotických plátech u apoE a LDL-receptor deficientních myší s ohledem na podávání atorvastatinu. Metody: K výzkumu jsme použili samice myší kmene C57BL/6J s dvojitým deficitem apolipoproteinu E a LDL-receptoru. Myši byly staré 8 týdnů. Myši byly rozděleny do dvou skupin: skupiny atorvastatinové a kontrolní. Oběma skupinám byla podávána po 8 týdnů cholesterolová dieta a u atorvastatinové skupiny byl také podáván atorvastatin. Poté byla provedena biochemická analýza krve. K detekci lipidů v aterosklerotických lézích jsme využili histologického barvení olejovou červení. Imunohistochemická analýza byla uskutečněna v 1 cm aortálního sinu a části aortálního oblouku. Použitou metodikou pro detekci exprese ALK-1 a VEGF byla metodika avidin-biotin s detekcí pomocí DAB. Výsledky: Biochemická analýza ukázala, že atorvastatin snížil hladiny celkového cholesterolu. Po barvení olejovou červení byly u obou skupin viditelné aterosklerotické léze. Atorvastatin snižoval velikost aterosklerotických plátů....
|
|
|
Vliv Sunitinibu na expresi ICAM-1 u normotenzních a hypertenzních potkanů
Frnochová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Mgr. Lenka Frnochová Vliv Sunitinibu na expresi ICAM-1 u normotenzních a hypertenzních potkanů Rigorózní práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Kvantifikovali jsme expresi ICAM-1 v aortě normotenzních Wistar Kyoto potkanů a spontánně hypertenzních potkanů při užívání sunitinibu. Pro kvantifikaci jsme aplikovali stereologické a imunohistochemické metody. Metody: Pro výzkum jsme používali inbrední samce Wistar Kyoto potkanů a spontánně hypertenzních potkanů. Potkani obou kmenů byli rozděleni do dvou skupin - skupina se sunitinibem a kontrolní skupina. Experimentální skupina přijímala sunitinib v pitné vodě v dávce 10 mg/kg denně a potkani v kontrolní skupině dostávali pouze pitnou vodu. Spontánně hypertenzní potkani přijímali sunitinib po 8 týdnů a po 5 dnech regenerace opětně dostávali do vody sunitinib po dalších 8 týdnů. Wistar Kyoto potkani dostávali nejprve také 8 týdnů sunitinib do vody, ale po 5 dnech regenerace, sunitinib byl podáván těmto potkanům už jenom 2 týdny z důvodu toxicity a snížení váhy. Imunohistochemická analýza byla použita na aortě potkana. K detekci exprese ICAM-1 byla užita metoda En Vision s detekcí prostřednictvím DAB. Výsledky: Imunohistochemické barvení prokázalo, že exprese ICAM-1 byla vyšší u potkanů, kteří byli...
|
|
|
Vliv Sunitinibu na endoteliální expresi hemooxygenázy-I u normotenzních potkanů
Svobodová, Barbora ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Barbora Svobodová Vliv sunitinibu na endoteliální expresi hemooxygenázy I u normotenzních potkanů. Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotní laborant Cíl práce: Cílem této práce bylo popsat a vyhodnotit expresi hemoxygenázy-1 (HO-1) v aortě normotenzních Wistar Kyoto (WKY) potkanů s ohledem na podávání sunitinibu za použití imunohistochemických a stereologických metod. Metody: Použili jsme dvě skupiny WKY potkanů (v každé bylo 6 zvířat), přičemž jedné z nich byl podáván sunitinib a druhé (kontrolní) byla podávána pouze voda. Aplikace sunitinibu probíhala podle schématu: 8 týdnů podávání/5 týdnů pauza/2 týdny podávání. Následně jsme na 60 preparátech potkaních aort provedli imunohistochemickou analýzu, která sledovala expresi HO-1 metodikou En Vision s detekcí pomocí DAB. Poté byla provedena stereologická analýza. Výsledky: Imunohistochemická analýza ukázala expresi HO-1 pouze u endotelových buněk a obecně lze konstatovat, že byla pozorována jen u několika zvířat, zejména ze skupiny zvířat léčených sunitinibem. Exprese HO-1 nebyla pozorována mimo cévní endotel. Závěr: Imunohistochemická a následná stereologická analýza prokázala signifikantní nárůst exprese HO-1 u potkanů, kterým byl podáván sunitinib. Tato zvýšená exprese může souviset s rozvojem...
|
|
| |
host ::
RSS.