|
|
Optimalizace metabolomického workflow: kritický pohled na krok přečištění vzorku
Syřínek, Jakub Eduard ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jakub Eduard Syřínek Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace metabolomického workflow: kritický pohled na krok přečištění vzorku Metabolomické schéma (workflow) sestává z plánování experimentu, vzorkování, přípravy vzorku, samotné analýzy a následného zpracování získaných dat a jejich interpretace. Vzhledem k tomu, že v metabolomice je zájem soustředěn na malé molekuly s hmotností menší než 1500 Da, je krok přípravy biologického vzorku kritický. Tato práce se zabývá optimalizací postupu pro eliminaci polyethylenglykolů (PEG) ve vzorku. PEG mohou interferovat s metabolity během ionizace v iontovém zdroji hmotnostního spektrometru. Pro eliminaci PEG bylo využito mikroextrakce na tuhou fázi pomocí pipetovacích špiček (SPE-PT) plněných sorbentem tvořeným porézním TiO2. Vaginální stěry byly získány od pacientek trpících vulvovaginálním dyskomfortem způsobeným kmenem Candida albicans. Vzorky byly nejprve rozpuštěny v pufrovaném fyziologickém roztoku. V rámci SPE-PT bylo optimalizováno 5 různých složení kondicionačního činidla, počet aspirací/vypuštění v kroku nanesení vzorku, 5 různých složení promývacího činidla, elučního činidla a počet aspirací/vypuštění v obou...
|
|
|
Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze
Lejnarová, Michaela ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Nováková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Lejnarová Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze Diplomová práce se zabývá porovnáním dvou metod vyhodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze za použití ionizace elektrosprejem a trojitého kvadrupólu. Konkrétně se jednalo o porovnání metody využívající směrnic kalibračních křivek a metody post-extrakčního přídavku, kdy hlavní cílem bylo posoudit, zda získané hodnoty matricových efektů spolu korelují, či nikoli. Případně objasnit důvody rozdílných výsledků a definovat podmínky umožňující aplikaci obou metod tak, aby byly získány správné a přesné výsledky. Na základě fyzikálně-chemických vlastností jako jsou molekulová hmotnost, acidobazické vlastnosti a rozdělovací koeficient byla vybrána skupina 28 různorodých látek. Vlastnímu hodnocení matricových efektů předcházel výběr vhodné LC metody, optimalizace jednotlivých parametrů iontového zdroje a zároveň výběr vhodného SRM přechodu a kolizní energie pro každou látku. K hodnocení matricových efektů bylo zvoleno lyofilizované sérum jako matrice a proteinová precipitace pomocí acetonitrilu jako technika přípravy vzorků. Pro obě metody vyhodnocení...
|
|
|
Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích
Čapková Maxová, Eliška ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Eliška Čapková Maxová Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích Cílem této práce byl vývoj rychlé a selektivní metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích. Pro separaci byla použita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systému reverzních fází s kolonou BEH C18 spojená s tandemovou hmotnostní spektrometrií (UHPLC-MS/MS). Byla zvolena gradientová eluce s mobilní fází se složkou A (0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí) a B (acetonitril) při průtoku 0,35 ml/min a 40 žC v kolonovém prostoru. Parametry hmotnostního spektrometru byly optimalizovány a následně nastaveny: ionizace elektrosprejem v pozitivním módu; napětí na kapiláře 1,0 kV; napětí na vstupním kuželu 35 V; napětí na extraktoru 3,0 V; napětí na RF čočce 0,1 V; průtok desolvatačního plynu 1000 l/h; teplota desolvatace 450 žC; průtok plynu na vstupním kuželu 100 l/h; teplota iontového zdroje 130 žC. Pro kvantifikaci byl použit SRM mód. Jako metoda přípravy vzorků byla zvolena extrakce z kapaliny do kapaliny (LLE). Nejlepší výtěžnost (>90%) byla získána při použití dichlormetanu. Metoda byla validována v kalibračním...
|
|
|
Testování stability antivirotik pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Pavlasová, Pavlína ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Pavlína Pavlasová Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Testování stability antivirotik pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Diplomová práce se zabývá stanovením stability pěti antivirotik (ledipasvir, sofosbuvir, tenofovir, monoester a diester tenofoviru) při různých teplotních podmínkách. Byla využita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie s detektorem fotodiodového pole detekcí při 259 nm. Zkoumaná antivirotika jsou nové léčivé přípravky využívané k léčbě při závažných onemocnění jako je AIDS a hepatitida typu C. Byly testovány dva typy stabilit: krátkodobá a dlouhodobá. Krátkodobá stabilita látek byla testována v acetonitrilu a methanolu při 4 řC a 22 řC po dobu 24 hodin. Dlouhodobá stabilita sofosbuviru, monoesteru a diesteru tenofoviru v 50 % acetonitrilu, ledipasviru ve 100 % acetonitrilu a tenofoviru ve vodě byla stanovována při uchovávání látek ve třech teplotních prostředích: - 20 řC, 4 řC a 22 řC, po dobu 28 dnů. Dále byly látky testovány ve fosfátovém pufru po 90 dnů při skladování - 20 řC. Z výsledků testování je možné určit podmínky pro skladování a dobu, po kterou je ještě léčivá látka stabilní. Chromatografické podmínky stabilit byly...
|
|
|
Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích
Štětková, Kateřina ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Štětková Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph. D. Název diplomové práce: Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích Tato diplomová práce se zabývá vlivem koncentrace ACN, pH a koncentrace pufru v mobilní fázi na retenci a selektivitu kolon Atlantis HILIC Silica (3 μm, 2,1 mm x 100 mm) a Luna NH2 (3 μm, 2,0 mm x 100 mm). Ke studii bylo vybráno celkem 35 analytů, které zahrnují látky neutrální, bazické a kyselé. Detekce byla provedena pomocí PDA detektoru při vlnové délce 245 nm. Všechna měření probíhala za podmínek izokratické eluce při průtoku 0,4 ml.min-1 s využitím směsi acetonitril/voda (pufr) jako mobilní fáze. Teplota na koloně byla nastavena na 30 řC, teplota autosampleru na 4 řC a použitý nastřikovaný objem byl 2 μl. Pro vyhodnocení výsledků byly z naměřených hodnot sestrojeny grafy a tabulky, které sloužily k hodnocení kolon z hlediska selektivity a retence jednotlivých skupin analytů. Kolona Atlantis HILIC Silica vykazovala chování typické pro HILIC chromatografii, tj. retence stoupala se zvyšující se koncentrací ACN v mobilní fázi a to především od >85% ACN. Kolona Luna NH2 kromě HILIC chování navíc vykazovala silnou retenci...
|
host ::
RSS.