|
| |
|
| |
|
|
Využití kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro analýzu proteinů
Vatrasová, Kateřina ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Jáč, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Kateřina Vatrasová Školitel: doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Konzultant: PharmDr. Klára Petrů, Ph.D. Název diplomové práce: Využití kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro analýzu proteinů V současnosti existují různé způsoby stanovení bílkovin. Cílem této práce bylo vyvinout, optimalizovat a charakterizovat metodu kapilární elektroforézy s vodivostní detekcí pro analýzu modelové směsi proteinů (α-laktalbumin, β-laktoglobulin, karboanhydráza, lysozym a ribonukleáza) a porovnat s konvenční UV detekcí. Mezi zkoumané podmínky patřily vliv pokrytí vnitřní stěny kapiláry na adsorpci proteinů, dále složení a koncentrace vhodného separačního elektrolytu, vliv napětí a teploty. K analýze byla využita křemenná kapilára o délce 50 cm (efektivní délka pro vodivostní detektor 35cm, pro UV detektor 41,5 cm) a vnitřním průměru 50 μm. V případě UV detekce byla vybrána vlnová délka 210 nm. Vhodným způsobem úpravy kapiláry bylo statické pokrytí vnitřní stěny několikanásobnou vrstvou iontových polymerů (polybren-dextran sulfát- polybren). Rozdělení směsi pěti proteinů bylo dosaženo v základním elektrolytu 1,5M kyselině octové (pH 2). Separace probíhala při napětí -25 kV a teplotě 25 řC....
|
|
|
Separace chirálních pesticidů pomocí cyklodextrinů kapilární elektroforézou
Denková, Barbora ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent)
V této diplomové práci je představena předběžná studie využití EKC-PF (s cyklodextrinem, jako chirálním selektorem) pro separaci chirálních pesticidů. Úvodem jsou prezentovány teoretické informace týkající se přístrojového vybavení, teorie elektroforézy jakož i různých elektroforetických technik. Dále je zmíněna problematika chirálních separací pomocí CE, využití cyklodextrinů jako chirálních selektorů v CE a možnosti techniky částečného plnění kapiláry. Nakonec jsou definovány chirální pesticidy a uvedeny informace o separaci jejich enantiomerů. Experimentální část se zabývá hodnocením separace enantiomerů některých pesticidů (trichlorphon, cyprokonazol, hexakonazol, imazalil, myklobutanil, penkonazol, tebukonazol, propikonazol, a benalaxyl) pomocí CM-β-CD, jako chirálního selektoru. Nejprve byla provedena univariantní optimalizace separačních podmínek (doba nástřiku CM- β-CD, napětí, teplota, pH, povaha a koncentrace elektrolytu) u benalaxylu. Dále byl realizován screening efektu nástřikového času CM-β-CD na rozlišení a migrační časy u ostatních pesticidů se záměrem zjistit potenciál tohoto CD jako chirálního selektoru pro enantioselektivní separaci tohoto typu analytů.
|
|
|
Studium vhodnosti α-bromfenyloctové kyseliny jako modelového analytu pro chirální separace s využitím kapilární elektroforézy II
Bubáková, Zuzana ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Zuzana Bubáková Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D. Název diplomové práce: Studium vhodnosti α-bromfenyloctové kyseliny jako modelového analytu pro chirální separace s využitím kapilární elektroforézy II V publikaci od Rizviho a Shamsiho (Rizvi S.A.A., Shamsi S. A. Anal. Chem. 2006, 78(19), 7061-7069) byla α-bromfenyloctová kyselina (BPAA), rozpuštěná v 50% methanolu (v/v), použita jako modelový analyt pro chirální separace za využití kapilární elektroforézy (CE). Stabilita BPAA ve vodném methanolickém rozpouštědle je však diskutabilní (Kováčová G. 2018. Diplomová práce. Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta). Cílem této práce bylo určení řádu rozkladné reakce BPAA (c = 0,47 mM) v 50% methanolu (v/v). Studie reakční kinetiky byla provedena pomocí kapilární elektroforézy v kapiláře pokryté polyvinylalkoholem (50 µm vnitřní průměr; 30 cm/24,5 cm). BPAA a produkty nukleofilní substituce (kyselina mandlová, kyselina α-methoxyfenyloctová a Br-) byly analyzovány v 60 mM mravenčanovém pufru (pH 3,0) při -30 kV; UV detekce byla 200 nm. Kinetika prvního řádu byla pro tuto rozkladnou reakci potvrzena metodou lineární a nelineární regrese, s hodnotami rychlostních konstant 1,52×10-4 ± 2,76×10-5 s-1 a 7,89×10-5...
|
|
|
Příprava metodiky pro zjištění míry chelatace iontů vápníku a hořčíku
Konečný, Lukáš ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce) ; Jáč, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Lukáš Konečný Školitel: prof. PharmDr. Přemysl Mladěnka, Ph.D. Název diplomové práce: Příprava metodiky pro zjištění míry chelatace iontů vápníku a hořčíku Vápník a hořčík jsou biogenní prvky patřící do druhé skupiny periodické tabulky prvků. Vápník je pátým nejzastoupenějším prvkem v lidském těle. Kromě své důležité role v homeostáze kostí se podílí na řadě procesů jako srážení krve, svalové kontrakci a regulaci nervové excitability. Hořčík je kofaktorem mnoha enzymatických reakcí nezbytných pro řadu fyziologických funkcí. Cílem této práce bylo navrhnout novou screeningovou metodu pro stanovení míry chelatace iontů vápníku a hořčíku. V prvním kroku byla změřena UV-VIS spektra vybraného indikátoru o-kresolftalein komplexonu a jeho komplexů s vápníkem a hořčíkem. Následovalo ověření linearity a stanovení citlivosti metody. Současně byla měřena stabilita indikátoru a jeho komplexu s oběma ionty. V posledním kroku byla ověřena vhodnost metody na standardním chelátoru kyselině ethylendiamintetraoctové, (EDTA). Optimální vlnová délka pro komplex s vápníkem byla 572,5 nm a pro komplex s hořčíkem 568 nm. U těchto vlnových délek byla za použití indikátoru rozpuštěného v pufru o pH 7,5 linearita mezi...
|
|
|
Testování potenciálního využití chirálních iontových kapalin s dlouhým řetězcem pro chirální separace v kapilární elektroforéze II
Müllerová, Kateřina ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Lochman, Lukáš (oponent)
Katedra: Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Műllerová Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D Název diplomové práce: Testování potenciálního využití chirálních iontových kapalin s dlouhým řetězcem pro chirální separace v kapilární elektroforéze II Chirální iontová kapalina (−)-N-dodecyl-N-methylephedrinium bromid (DMEB) byla testována jako selektor pro chirální separace vybraných léčiv (chinolonová antibiotika, ketoprofen a flurbiprofen) pomocí kapilární elektroforézy (CE). Byl zkoumán vliv několika parametrů na enantioseparaci: (i) typ a pH pufru, (ii) typ a množství organického modifikátoru a (iii) koncentrace DMEB. Při použití tohoto chirálního selektoru byla pozorována enantioseparace pouze u ofloxacinu, u zbylých chirálních léčiv separace za daných podmínek neproběhla. Jako další krok byla vyvinuta CE metoda pro stanovení levofloxacinu, aby bylo možné předvést potenciál DMEB jako chirálního selektoru v kontrole kvality chirálně čistých léčiv. Nejlepší separace bylo dosaženo se základním elektrolytem o složení: 20mM trizmový pufr o pH 8,5 se 100 mM DMEB a 20 % (v/v) acetonitrilu. Separace probíhala v křemenné kapiláře (80,5 cm / 72 cm) s vnitřním průměrem 50 µm při −30 kV s UV detekcí při 291 nm. Rozlišení mezi píky S- a R-ofloxacinu bylo 4,22 ± 0,02 (n = 3). Linearita metody byla...
|
|
|
Vývoj CE-C4D metody pro analýzu sacharidů v medu
Šebestová, Gabriela ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Gabriela Šebestová Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj CE-C4D metody pro analýzu sacharidů v medu Med je běžně využívaná přírodní směs, u které je nutné sledovat kvalitu kvůli možnému nesprávnému zacházení nebo falšování. Tato diplomová práce je zaměřena na vývoj metody kapilární elektroforézy s kapacitně vázanou bezkontaktní vodivostní detekcí (CE-C4D) pro stanovení obsahu sacharidů ve vzorcích medu. Pro optimalizaci separačních podmínek bylo využito plánování experimentů (DoE), které umožňuje nalezení vhodných separačních podmínek na základě multivariantní optimalizace. Během optimalizace byl zkoumán především vliv těchto faktorů: složení elektrolytu, separační napětí a teplota během separace a vnitřní průměr separační kapiláry. Byly optimalizovány dvě metody: jedna s normálním elektroosmotickým tokem (EOF) a druhá za využití obráceného EOF po přídavku CTAB. Pro validaci a analýzu vzorků medu byla využita metoda v režimu normálního EOF. Separace probíhala v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 20 m, celkové délce 48,7 cm a efektivní délce 33,8 cm. Teplota byla 27,7 řC a napětí +16,5 kV. Jako optimální byl zvolen základní elektrolyt o koncentraci 35 mM NaOH a 15 mM...
|
|
|
Peptidové mapování bioléčiv pomocí CE
Kosolapov, Dmytro ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Khalikova, Maria (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Dmytro Kosolapov Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Juraj Lenčo, Ph.D. Název diplomové práce: Peptidové mapování bioléčiv pomocí CE Tato práce se zabývá optimalizací kapilárně elektroforetické (CE) metody pro peptidové mapování a enzymatického štěpení proteinů pomocí trypsinu. Jako substrát pro enzymatické štěpení byl použit koňský myoglobin a referenční protilátka. Byly testovány dvě metody štěpení: konvenční štěpení trypsinem v roztoku a štěpení za využití komerční soupravy Smart Digest Trypsin Kit, která využívá imobilizovaný trypsin. Štěpení bylo kontrolováno pomocí RP- HPLC. Po optimalizaci tryptického štěpení byla provedena řada pokusů pro stanovení optimálních podmínek pro kvalitní separaci hydrolyzátu pomocí CE. Všechna měření se prováděla v PVA-kapiláře s vnitřním průměrem 50 µm, efektivní délkou 56 cm a celkovou délkou 64,5 cm. Vzorek byl dávkován hydrodynamicky za tlaku 50 mbar, vkládané napětí mělo hodnotu 30 kV, teplota kapiláry byla nastavena na 20 řC. Zóny analytů byly zaznamenávány UV-VIS detektorem při vlnové délce 200 nm. Byl testován vliv koncentrace a typu základního elektrolytu (30, 60, 90, 120, 150mM kyselina mravenčí a 0,5%, 1%, 1,5%, 2% kyselina octová), doby...
|
|
|
Možnosti kapilární elektroforézy pro separaci boswellových kyselin
Poušková, Jitka ; Jáč, Pavel (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Jitka Poušková Školitel: PharmDr. Pavel Jáč, Ph.D. Název diplomové práce: Možnosti kapilární elektroforézy pro separaci boswellových kyselin Hlavní náplní této práce bylo popsání možností kapilární elektroforézy pro separaci boswellových kyselin v extraktu Boswellia serrata a ve směsi standardů boswellových kyselin. V průběhu testování byl zkoušen vliv pěti různých pufrů a přídavku některých aditiv do roztoku základního elektrolytu jako jsou například cyklodextriny, organické modifikátory nebo povrchově aktivní látky. Po vybrání vhodných složek elektrolytu byly tyto složky testovány v různých koncentracích za účelem co nejlepší separace boswellových kyselin. Všechny analýzy byly prováděny v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 50 μm, nejdříve s celkovou délkou 48,5 cm a efektivní délkou 40 cm, později s celkovou délkou 83,5 cm a efektivní délkou 75 cm. Vkládané napětí bylo +30 kV. Pro UV detekci byly použity vlnové délky 200 nm, 250 nm a 280 nm. Nejlepších výsledků bylo dosaženo v roztoku základního elektrolytu, který obsahoval 80 mM fosfátový pufr o pH 7,0 s přídavkem 10 % (v/v) metanolu a 80 mg/ml 2-hydroxypropyl-β-cyklodextrinu. Pomocí tohoto elektrolytu byly extrakt Boswellia serrata i směs pěti...
|
host ::
RSS.