|
| |
|
|
Development and applications of ambient mass spectrometry techniques
Rejšek, Jan ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lemr, Karel (oponent) ; Klejdus, Bořivoj (oponent)
(CZ) Ambientní hmotnostní spektrometrie zahrnuje širokou skupinu metod umožňujících analýzu povrchu tuhých látek a kapalin v otevřeném prostoru vně hmotnostního spektrometru, kdy je vzorek přístupný k vnějšímu zásahu i během analýzy. Ambientní hmotnostní spektrometrie je dynamicky se rozvíjející oblastí analytické chemie. Umožňuje rychlou přímou analýzu objektů vně přístroje bez předchozí úpravy vzorku. V této práci byla studována desorpční ionizace elektrosprejem (DESI) a desorpční fotoionizace za atmosférického tlaku (DAPPI) se softwarově ovládanou polohou držáku vzorku. Tyto metody využívají sprejování rozpouštědel k desorpci a ionizaci analytu z pevného substrátu a jsou vhodné pro zobrazovací hmotnostní spektrometrii nízkomolekulárních organických sloučenin, kde je chemická identita molekul na povrchu analyzovaného objektu zkoumána jako funkce prostorové distribuce. Tento projekt se zabývá aplikacemi a instrumentálním vývojem. Pokud jde o aplikace, byla studována poloha hmyzích obranných žláz, separace lipidů v reálných vzorcích pomocí tenkovrstvé chromatografie (TLC), nebo metabolity steroidů v ženské moči v průběhu těhotenství. Ohledně instrumentálního vývoje, nejdůležitějším bodem byla konstrukce nového iontového zdroje pro ambientní zobrazovací hmotnostní spektrometrii neplanárních objektů....
|
|
|
Využití monolitických kolon v kapilární kapalinové chromatografii
Holdšvendová, Petra ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
UVOD od 90. let minulého století [1]' kdy se objevily první zmínky o novémtypu stacionámifáze pro HPLC, o monolitech, se staly objektem zájmu mnoha vědeckých skupin [2-a]. Jejich nespornou qýhodou oproti klasickým náplňovým kolonám je jejich stabilita při pH v rozmezi 2 - 12, pÍi kterém není možné klasické kolony používat.Dalšímivyhodami je pakjejich snadná a levná příprava a nepřítomnost frit na koncích separačního media' jelikož monolit je kovalentné vázán na vnitřní stěnu kapiláry [5]. Jejich nevýhodou ovšem zatím zistává horší opakovatelnost přípravy stacionární fáze, neŽ je tomu u klasických kolon. Tato disertaění práce se zabývá monoliý na bázi organichých polymeru' a to zejména methakrylátové monolity. Týo monolity byly poprvé představeny Petersem a kol. [6], od tédoby bylo vyrobeno mnoho monoliticloých fází srozdílnými separaěními vlastnostmi [7-10]. Methakrylátové monolity jsou vhodné pro separaci jak nízkomolekulárníchlátek |7f, tak pro separaci vysokomolekulárních látek jako jsou proteiny, oligonukleotidy, peptidy ěi sacharidy [ 1 0- i 2].
|
|
|
Strukturní analýza přírodních látek s větvenými alifatickými řetězci pomocí hmotnostní spektrometrie
Strmeň, Timotej ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná diplomová práce se zabývá analýzou mastných alkoholů pomocí hmotnostní spektrometrie. Teoretická část shrnuje základní poznatky o mastných alkoholech, jejich výskytu, vlastnostech, analýze a využití. Experimentální část se zabývá hledáním vhodného derivatizačního činidla pro mastné alkoholy, které by umožnilo jejich detekci měkkými ionizačními technikami a zároveň jejich strukturní analýzu z fragmentačních spekter připravených derivátů. Hlavním cílem strukturní analýzy je lokalizace methylového větvení v řetězci mastných alkoholů.
|
|
|
Analýza diesterů diolů v novorozeneckém mázku pomocí HPLC/APCI-MS2
Šubčíková, Lenka ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
Novorozenecký mázek je přirozený biofilm pokrývající pokožku lidského plodu od třetího trimestru těhotenství. Má hydratační, regenerační a antimikrobiální účinky. Složky novorozeneckého mázku zodpovědné za tyto jeho vlastnosti by mohly být využity ve farmaceutickém a kosmetickém průmyslu. Z tohoto důvodu je analyzováno jeho celkové složení. Lipidová složka novorozeneckého mázku se skládá ze skvalenu, voskových esterů, esterů sterolu, diesterů 1,2-diolů, triacylglycerolů, volných mastných kyselin, mastných alkoholů, cholesterolu, diacylglycerolů, monoacylglycerolů a fosfolipidů. Tato práce je zaměřena na strukturní analýzu diesterů 1,2-diolů nacházejících se v novorozeneckém mázku. Byly optimalizovány podmínky pro jejich separaci pomocí HPLC. Byla použita Nova-Pak C18 kolona a jako mobilní fáze byl zvolen gradient acetonitril:ethylacetát. Před vstupem do APCI zdroje byl postkolonově přidáván mravenčan amonný, který v prostředí APCI sondy tvořil s diestery 1,2-diolů amonné adukty [M+18]+ pozorované ve spektru. MS metoda zahrnovala celkem osm skenovacích událostí, jednu pro MS spektrum, jednu pro MS2 spektrum prekurzorových iontů a šest pro MS3 spektra. V další části měření byla určena poloha dvojných vazeb u nenasycených diesterů 1,2-diolů fragmentací jejich aduktů [M+C3H5N]+ . Ze získaných dat bylo...
|
|
|
Use of the modern separation techniques for the analysis of insect pheromones
Žáček, Petr ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
(ČJ) Komunikace zprostředkovaná chemickými sloučeninami (semiochemikáliemi) je hlavní způsob dorozumívání se u hmyzu, zvláště pak hmyzu společenského. Metody plynové chromatografie v jednorozměrném, dvourozměrném komprehensivním a preparativním uspořádání spojené s hmotnostním a/nebo elektroantenografickým detektorem byly použity ke studiu těkavých nebo středně těkavých semiochemikálií u různých druhů hmyzu. V rámci této práce byla zkoumána biosyntéza pohlavního feromonu u samců čmeláků druhů Bombus terrestris, B. lucorum a B. lapidarius pomocí aplikace předpokládaných biosyntetických prekurzorů feromonů (octan sodný, vyšší mastné kyseliny) izotopicky značených atomy 2 H a 14 C. Pro tento účel bylo zkoumáno chromatografické chování a možnosti detekce izotopicky značených sloučenin v jednorozměrném a dvourozměrném komprehensivním systému (2 H, 13 C). U všech testovaných kolon byl pro sloučeniny značené oběma izotopy potvrzen "inverzní izotopický efekt". Vyvinuté analytické postupy byly aplikovány na reálné vzorky čmeláků. Analýza extraktů tkání čmeláků druhů B. terrestris a B. lucorum po in vitro inkubaci se značeným octanem sodným dokázala přítomnost značených metabolitů a potvrdila tak možnost de novo biosyntézy feromonu přímo v labiální žláze. Značené metabolity byly nalezeny i v případě in vivo...
|
|
| |
|
|
Analýza produktů reakcí ftalaldehydu s vybranými aminokyselinami
Křížová, Věra ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent)
Tato práce se zabývá analýzou produktů reakcí ftalaldehydu s vybranými aminokyselinami pomocí spojení vysokoúčinné kapalinové chromatografie s hmotnostní spektrometrií. V případě jednoduchých aminokyselin (glycinu, glycin ethyl esteru, alaninu, α-aminomáselné kyseliny, valinu, leucinu a isoleucinu) vzniká vždy pouze jeden produkt s dihydroisoindolovou strukturou. Reakcí ftalaldehydu s aminokyselinami se dvěma aminoskupinami (lysinem, asparaginem, glutaminem a argininem) vznikají různé typy sloučenin. Hlavní produkty vznikají interakcí obou aminoskupin s jednou molekulou ftalaldehydu. Kromě toho vznikají také očekávané analogy dihydroisoindolů z reakcí ftalaldehydu s jednoduchými aminokyselinami, navíc není vyloučen vznik produktů obsahujících jednu molekulu aminokyseliny a dvě molekuly ftalaldehydu. Produkty byly strukturně analyzovány pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie a tandemové hmotnostní spektrometrie. Produkty reakcí ftalaldehydu s α-aminomáselnou kyselinou, valinem, leucinem, isoleucinem a lysinem byly izolovány a dále byly podrobeny analýze za použití elektronové ionizace na přístroji sektorového typu s dvojí fokusací a nukleární magnetické resonance. Zjištěné informace mají zásadní význam na aplikovatelnost využití ftalaldehydu jako detekčního činidla při fluorimetrických...
|
|
|
Lipidomic analysis of vernix caseosa
Harazim, Eva ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Lísa, Miroslav (oponent) ; Kuda, Ondřej (oponent)
Metody analytické chemie jsou v lipidomice široce používané, a to zejména chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií či nukleární magnetická rezonance. Díky těmto technikám je možné identifikovat i lipidy vyskytující se v matrici ve velice malém množství. Tato práce shrnuje využití moderních analytických metod a instrumentace při zjišťování identity a charakterizace lipidů obsažených v novorozeneckém mázku. Ukazuje také, jakým dílem jsem v průběhu studia přispěla k rozpoznání struktury a charakterizaci neznámých lipidových tříd a k detailnějšímu popisu již těch identifikovaných v novorozeneckém mázku. Nedílnou součástí mé práce byla aplikace metody umožňující lokalizaci dvojných vazeb vyvinutou naší laboratoří u triacylglycerolů a 1,2-diesterů diolů novorozeneckého mázku. Tato analytická metoda je založena na tvorbě acetonitrilového aduktu v iontovém zdroji hmotnostního spektrometru s chemickou ionizací za atmosférického tlaku. Složitost třídy triacylglycerolů neumožnila kompletní charakterizaci dvojných vazeb. Fragmentace však ukázala přítomnost dvojných vazeb až do polohy n-12, ale byly rovněž identifikovány malé píky naznačující dvojné vazby ve vzdálených pozicích od koncových řetězců. Spolupracovala jsem také na charakterizaci větvení řetězců a polohy dvojných vazeb mastných kyselin...
|
|
|
Studium biosyntézy lipidů při hypoxii pomocí chromatografie a hmotnostní spektrometrie
Mušutová, Martina ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent)
4 Abstrakt Tato diplomová práce se zabývá studium biosyntézy lipidů při hypoxii pomocí chromatografie a hmotnostní spektrometrie. První část práce vysvětluje teoretický základ provedeného výzkumu, který je zakotven ve studiu obstrukční spánkové apnoe a její souvislosti s diabetes mellitus 2. typu. Je předložena teorie, že hypoxie vede ke zvýšení biosyntézy mastných kyselin, a to prostřednictvím reverzní dráhy citrátového cyklu. Studium této reverzní dráhy bylo provedeno pomocí kultivovaných buněk, ke kterým byl přidán značený [5-13 C] glutamin, jehož inkorporace mastných kyselin byla sledována pomocí GC-MS. Z buněčných vzorků byly extrahovány lipidy, z kterých byla pomocí tenkovrstvé chromatografie izolována frakce triacylglycerolů. Dále byla provedena transesterifikace na methylestery masných kyselin (FAME). Ze získaných dat byl zjištěn nárůst FAME 16:0 o 91 % a FAME 16:1 o 102 % při hypoxických podmínkách oproti podmínkám kontrolním. Dále bylo zjištěno, že při hypoxii je ve vzorku o 5,9 % více [13 C1] FAME 16:0, o 12 % více [13 C1] FAME 16:1 a o téměř 3 % více [13 C2] FAME 16:1 oproti kontrolním vzorkům. Klíčová slova Biosyntéza lipidů, diabetes mellitus 2. typu, FAME, GC-MS, hypoxie, obstrukční spánková apnoe, 3T3-L1 preadipocyty, [5-13 C] glutamin.
|
host ::
RSS.