|
|
Vývoj metody pro identifikaci alkaloidních látek v rostlinných extraktech čeledi Amaryllidaceae pomocí techniky UHPLC-MS/MS
Plečková, Hana ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Hana Plečková Školitel: Doc. PharmDr. Lucie Nováková Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj metody pro identifikaci alkaloidních látek v rostlinných extraktech čeledi Amaryllidaceae pomocí techniky UHPLC-MS/MS Cílem této diplomové práce je vývoj metody pro identifikaci alkaloidních látek z čeledi Amaryllidaceae v rostlinných extraktech s použitím propojení dvou metod UHPLC a MS/MS. Kombinace metod UHPLC a MS/MS umožňuje pracovat s velmi malými částicemi (< 2 µm), čímž je dosaženo rychlé separace s vysokou účinností a zkrácení doby analýzy. MS se používá k určování hmotnosti atomů, molekul, fragmentů, a to po převedení na ionty. Vývoj metody sloužil k výběru optimální stacionární a mobilní fáze, probíhal nejdříve na UHPLC s PDA detekcí. Byly testovány kolony: BEH PHENYL, BEH C18, BEH SHIELD RP18, HSS T3. Byly studovány možnosti separace a chování sledovaných látek při změnách pH (3 a 9), doby retence, průtokové rychlosti. Nejlepší výsledky z těchto kolon vykazovala kolona BEH SHIELD R18, za použití mobilní fáze methanolu a pufru pH 3, a dále průtokové rychlosti 0,4 ml/min. Později byla představena nová stacionární fáze CSH (charged surface hybrid, hybridní povrchově nabitá) na bázi mixed-mode sorbentů,...
|
|
|
Sekvenční injekční analýza chromatografie - testování moderních chromatografických kolon pro rychlé a efektivní separace
Dědková, Lucie ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Lucie Dědková Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, PhD. Název diplomové práce: Sekvenční injekční analýza chromatografie - testování moderních chromatografických kolon pro rychlé a efektivní separace Následující diplomová práce se zabývala optimalizací metody separace tří červených azobarviv (Karmoisin, Ponceau 4R, Red 2G) za použití systému Sekvenční injekční chromatografie. Při dané metodě se používala detekce pomocí VIS detektoru při vlnových délkách 380, 480, 500 a 600 nm. Byla testována kolona Chromolith® SpeedROD CN 50x4.6mm. Nejprve byla provedena separace s využitím mobilní fáze o složení: kyselina fosforečná a hydroxid amonný o pH 6 v různých koncentracích. Bohužel žádná koncentrace neumožnila separovat všechna barviva najednou - barvivo Karmoisin bylo eluováno s vysokým retenčním časem a s rozmytým píkem. Proto byl pokus obměněn a byla použita gradientová separace. Byly využity dvě mobilní fáze s koncentracemi 0,06 % a 0,01 %. Tato metoda umožnila separovat všechna barviva v optimálním čase a kvalitě. Byla provedena kalibrace a změřena opakovatelnost a výtěžnost. Jako testovací vzorek byl použit nápojový koncentrát Malina light a Albert sirup černý rybíz.
|
|
|
Vývoj HILIC metodiky pro UHPLC-MS/MS stanovení pteridinů, porovnání selektivity různých stacionárních fází
Jánská, Radka ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Radka Jánská Školitel: PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HILIC metodiky pro UHPLC- MS/MS stanovení pteridinů, porovnání selektivity různých stacionárních fází Tato diplomová práce se zabývá vývojem HILIC metodiky určené k identifikaci a stanovení biologicky aktivních látek neopterinu, biopterinu, 7,8-dihydroneopterinu a 7,8- dihydrobiopterinu za použití ultra-účinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostním spektrometrem typu trojitého kvadrupolu. Testovány byly tři chromatografické kolony (BEH Glycan, BEH Amide a BEH HILIC), na kterých bylo zkoušeno několik druhů mobilních fází a jejich vliv na separaci zkoušených látek. Mobilní fáze byla tvořena vodnou složkou (kyselina octová a mravenčí, octan a mravenčan amonný a hydroxid amonný o nízké koncentraci) s acetonitrilem. Na chromatografické koloně BEH Glycan byly jako nejlepší vyhodnoceny mobilní fáze ve složení 1mM octan amonný o pH= 3,8 s acetonitrilem v poměru 30:70 a 1mM octan amonný o pH= 6,8 s acetonitrilem v poměru 28:72. Chromatografická kolona BEH Amide poskytla nejlepší výsledky při užití dvou mobilních fází ve složení 1mM octan amonný o pH= 4,8 s acetonitrilem v poměru 23:77 a 1mM octan amonný o pH= 6,8...
|
|
|
Extrakce zinku z vodných roztoků pomocí extrakce na tuhou fázi v sekvenční injekční analýze
Klinerová, Jana ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
v češtině Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Jana Klinerová Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Extrakce zinku z vodných roztoků pomocí extrakce na tuhou fázi v sekvenční injekční analýze Tato práce se věnuje extrakci zinku z vodných vzorků pomocí extrakce na tuhou fázi v sekvenční injekční analýze. Extrakce zinku byla testována z roztoků o třech koncentracích (100 nmol/l, 200 nmol/l a 500 nmol/l), na čtyřech různých chelatačních sorbentech (Iontosorb OXIN, Iontosorb SALICYL, Iontosorb IDA a Toyopearl), při sedmi různých pH (3, 4, 5, 6, 7, 8 a 9) promývacího pufru a při pH 2 elučního roztoku. Při detekci byla sledována absorbance komplexu zinku s činidlem 4-(pyridyl-2-azo) resorcinol při vlnových délkách 490, 510, 560 a 600 nm. Po celkovém zhodnocení všech čtyř sorbentů při různých podmínkách měření byl určen jako nejlepší sorbent Iontosorb OXIN a jako vhodné podmínky pro extrakci pH promývacího pufru a vzorku 6 a vyšší.
|
|
|
Extrakce na tuhou fázi metodou Lab-On-Valve
Koblasa, Lukáš ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Lukáš Koblasa Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Extrakce na tuhou fázi metodou Lab-On-Valve Diplomová práce se zabývá vývojem metody pro přímé stanovení kalium šetřícího diuretika amiloridu ze vzorku moči metodou bead injection (BI) využívajícím systém Lab-on-Valve (LOV). Stanovení bylo založeno na selektivním zachycením amiloridu na kuličkách sorbentu (Sephadex-CM C-25 Ion-exchange), zatímco možné interferující komponenty moči byly vypláchnuty nosným proudem do odpadu. Po zakoncentrování byl amilorid z kuliček eluován roztokem elučního činidla (0,25 M HNO3 + 0,05 M KCl) o rychlosti průtoku 5 µl/s. Detekován byl pomocí fluorescenčního spektrometru při vlnové délce 272 nm. Amilorid byl naspikován do desetkrát zředěné moči, k jedné analýze ho bylo zapotřebí 300 µl. Linearita odezvy se pohybovala v rozmezí koncentrací 0,2 - 10,00 µg/ml (r = 0,990). Limit detekce (LOD) odpovídal koncentraci 0,05 µg/ml. Celá analýza trvala 280 sekund.
|
|
|
Automatizace toxikologických testů
Žižková, Klára ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Klára Žižková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: Automatizace toxikologických testů Cílem této práce bylo najít vhodnou metodu stanovení luciferázy I. a II. typu pomocí metody sekvenční injekční analýzy a optimalizovat podmínky stanovení. Hlavním cílem bylo automatizovat analýzu v sériích vzorků připravených v rámci testování různých látek, které mohou ovlivnit zejména hladinu sekretované luciferázy (II. typ) při interakci buněk s testovanými látkami v toxikologických studiích. V teoretické části je popsána luminiscence, její typy a využití. Dále jsou zmíněny typy luciferáz a činidla, se kterými probíhá chemická reakce. Jsou popsány principy průtokových technik. Byla provedena rešerše na dané téma - stanovení luciferázy. Měření byla prováděna za pomoci metody sekvenční injekční analýzy. V experimentální práci byly použity tři přístroje. Jeden průtokový injekční analyzátor, který pracuje na principu SIA a jeden sekvenční injekční analyzátor se dvěma způsoby detekce - detektor s neprůtokovou celou a s průtokovou spirální celou. Byla provedena optimalizace měření - zejména koncentrace a objem vzorků a činidel, pořadí jejich aspirace a také průtoková rychlost průchodu...
|
|
|
Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve pro stanovení farmaceuticky významných látek
Jelínková, Iva ; Chocholouš, Petr (vedoucí práce) ; Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Iva Jelínková Školitel: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název diplomové práce: Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve pro stanovení farmaceuticky významných látek Diplomová práce se zabývá vývojem metody extrakce na tuhou fázi (SPE) s využitím mikroextrakce tuhým sorbentem (MEPS) pro stanovení vitamínů A, D, E a možnostmi automatizace této metody. Stanovení bylo založeno na absorpci vitamínů na mikrokoloně MEPS, rušivé složky byly odstraněny promývacím roztokem (zředěná kyselina octová o pH 3) a byla provedena extrakce elučním roztokem (100% ACN). Detekce proběhla za pomocí UV spektrofotometru při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A - 325 nm, pro vitamín D - 265 nm, pro vitamín E - 295 nm. Metoda byla optimalizována. Byl vyvíjen program, kde byly testovány koncentrace jednotlivých vitamínů, dávkovací objemy, průtokové rychlosti a složení rozpouštědel. Po optimalizaci metody byla provedena extrakce a následné stanovení krevní plazmy fortifikované vitamíny A, D, E metodou sekvenční injekční chromatografie (SIC). Výtěžnost metody byla pro vitamín A 156,83 %, pro vitamín D 28,38 %, pro vitamín E 15,79 %. Byla hodnocena opakovatelnost, pro kterou byly použity tři...
|
|
| |
|
|
Optimalizace SIA stanovení dakarbazinu
Horáková, Markéta ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Dakarbazin byl stanovován sekvenční injekční analýzou s chemiluminiscenční detekcí, při reakci vzorku s manganistanem draselným v prostředí kyseliny sírové. Optimalizovány byly objemy činidel, jejich koncentrace, průtoková rychlost, struktura měřícího cyklu. Také byl zkoušen vliv rozpouštědel (voda, 60% etanol, 60% metanol) a zesilovačů chemiluminiscenční reakce (polyfosfát sodný, kyselina mravenčí, glutaraldehyd a formaldehyd). Výslednými optimálními podmínkami byla sekvence: 40 μl 1 M H2SO4, 3 μl 10 mM KMnO4, 30 μl 10 mM roztoku dakarbazinu, 40 μl 1 M H2SO4, případná aspirace 50 μl zesilovače. Aspirace roztoků probíhala za průtokové rychlosti 100 μl/s, promísení a průtoková rychlost transportu do detektoru byla 40 μl/s, po každém měření byl přidán výplach kyselinou šťavelovou, aby se předešlo usazování KMnO4 v hadičkách. Napětí na fotonásobiči detektoru bylo 420 V. Kalibrační závislosti velikosti CL intenzity na koncentraci dakarbazinu byly nelineární, s možností výběru určité lineární oblasti. Pro roztok dakarbazinu bez zesilovače nebyla lineární oblast nalezena s dostatečně vysokým korelačním koeficientem, pro roztok dakarbazinu s 60% metanolem 0,5 - 10 mmol/l, pro roztok dakarbazinu s 1,39 M kyselinou mravenčí 4 - 10 mmol/l. Detekční limit byl pro roztok dakarbazinu bez zesilovače vypočítán...
|
|
|
Studie chemiluminiscenčních vlastností metforminu pomocí sekvenční injekční analýzy
Horáková, Markéta ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Markéta Horáková Konzultant: PharmDr. Hana Sklenářová Ph.D. Název rigorózní práce: Studie chemiluminiscenčních vlastností metforminu pomocí sekvenční injekční analýzy Chemiluminiscenční vlastnosti metforminu byly studovány pomocí sekvenční injekční analýzy ve třech systémech s různým složením činidel. První systém používal manganistan draselný a kyselinu sírovou, druhý síran ceričitý a (tris(2,2'- bipyridyl)dichloro-ruthenium hexahydrát. Třetí systém využíval N-bromsukcinimid a fluorescein. U prvních dvou systémů byla optimalizována průtoková rychlost, koncentrace a objemy činidel, schéma měřícího cyklu a použitá rozpouštědla. U třetího systému koncentrace N-bromsukcinimidu (NBS) a fluoresceinu vycházela z údajů vyhledaných v odborné literatuře [Zhouping Wang, Anal. Lett. 2003]. Objem a rychlost byly nalezeny automaticky s využitím programu FaFSIAOptim, vytvořeným na Katedře analytické chemie. Schéma měřícího cyklu bylo optimalizováno stejným způsobem jako u předešlých dvou systémů. Během optimalizace a následného měření bylo zjištěno, že jediným vhodným systémem je třetí systém s NBS a fluoresceinem. Proto bylo dále pokračováno jen s ním. Postup odpovídal výslednému schématu shrnujícímu...
|
host ::
RSS.