|
|
Vývoj nové metody pro in vitro selekci DNA aptamerů
Bláhová, Kamila ; Míšek, Jiří (vedoucí práce) ; Moserová, Michaela (oponent)
DNA či RNA, které vázat různé molekuly (léčiva, lipidy, cukry, proteiny atd.) oligonukleotidů pomocí metody SELEX Přes úspěšnost této metody, kce často vyžaduje více než deset kol afinitní selekce a taktéž optimalizaci podmínek selekce. Pro zvýšení účinnosti selekce aptamerů bylo vyvinuto několik metod, které využívají zvýšení počtu sekundárních struktur náhodných knihovnách oligonukleotidů. Tyto metody, založené na zvýšení možnosti jednovláknových oligonukleotidech, zvýšily efektivitu metody o testováno, jestli zvýšení pravděpodobnosti výskytu kvadruplexů, jako strukturních motivů náhodných sekvencích, povede ke zvýšení efektivity selekce aptamerů. Byly použity čtyři knihovny počtem guaninu (25 %, 35 %, 45 %, 55 %) v selekci byl zvolen streptavidin, vůči kterému již bylo dříve vyselektováno několik aptamerů, (G). Předběžné výsledky naznačují, že G nezvyšují efektivitu selekce přinejmenším u molekul, které nepreferují G Klíčová slova:
|
|
|
Detekce fytoplazmy Candidatus Phytoplasma mali metodou dřevinných indikátorů
Blahová, Kamila
Diplomová práce se zabývala optimalizací postupu detekce fytoplazmy Candidatus Phytoplasma mali pomocí dřevinného indikátoru Golden Delicious ve skleníkových podmínkách jako alternativy testování přítomnosti fytoplazmy biologickým indexingem v podmínkách polních. Ke kontrole přítomnosti fytoplazmy v pokusných rostlinách byla během práce využita molekulární metoda real-time PCR. Pokus byl založen na demonstrační ploše Ústavu šlechtění a množení zahradnických rostlin v areálu Mendelovy univerzity v Brně. Byly porovnány 3 metody přenosu fytoplazmy: metoda podvojného roubování testované odrůdy a indikátoru na semenáč v období vegetačního klidu, metoda letního očkování testované odrůdy na indikátor roubovaný v období vegetačního klidu na semenáč a metoda dvojitého letního očkování indikátoru a testované odrůdy na semenáč. Na dřevinném indikátoru Golden Delicious byly testovány odrůdy Panenské české, Kanadská reneta, Gascoigneho, Ribstonské a Boskoopské od každé odrůdy 10 rostlin. Experiment trval 10 měsíců. Vizuální kontrolou přítomnosti symptomů bylo hodnoceno celkem 150 testovaných rostlin. Během hodnocení testů nebyly ani na jedné testované rostlině monitorovány specifické symptomy fytoplazmové proliferace jabloně. Přítomnost Candidatus Phytoplasma mali byla ověřena metodou real-time PCR na 60 testovaných (indikátorových) rostlinách. Infekce patogenem byla potvrzena ve 12 indikátorových rostlinách. Zjištěné kvantity fytoplazmy v pletivech však dosahovaly velmi nízké hodnoty. Nejvyšší počet infikovaných rostlin vykazovaly testy odrůdy Gascoigneho, založené metodou dvojitého letního očkování indikátoru a testované odrůdy na semenáč. Tato metoda zajistila nejúspěšnější inokulaci indikátoru fytoplazmou. Na základě výsledků získaných během prováděné studie lze tvrdit, že biologické testování přítomnosti fytoplazmy pomocí krátkodobých skleníkových testů není spolehlivé. Zároveň je doporučeno testování pomocí indikátoru Golden Delicious realizovat po dobu minimálně dvou vegetačních období, jak je tomu u polních testů. Vzhledem k tomu, že během časově omezeného období realizace experimentu v této diplomové práci bylo zjištěno, že nedošlo k dostatečnému namnožení fytoplazmy v rostlinách, budou vypovídající výsledky porovnání metod inokulace indikátorových rostlin k dispozici na konci podzimu 2017.
|
|
|
Proliferace jabloně (Candidatus Phytoplasma mali)
Blahová, Kamila
Cílem předkládané bakalářské práce bylo vypracovat literární rešerši na téma proliferace jabloně. Pro dosažení tohoto cíle byl zpracován základní přehled o historii fytoplazem a stanovení jejich názvosloví. V práci bylo zmíněno taxonomické zařazení fytopazmy Candidatus Phytoplasma mali, její bionomie, hostitelské rostliny, geografické rozšíření a ekonomický význam. Dále byly popsány symptomy na infikovaných jabloních, faktory, jež ovlivňují šíření patogenu a jeho následnou detekci dostupnými diagnostickými metodami. Byly představeny také možné způsoby přenosu, bionomie hmyzích vektorů, ochranná opatření a legislativní normy. V části určené vlastnímu komentáři byla zmíněna historie výskytu Ca. P. mali, velikost produkčních sadů jabloní a aktuální situace rozšíření fytoplazmy na území České republiky s doporučením preventivních opatření k zamezení dalšího šíření patogenu.
|
host ::
RSS.