|
|
Regulace PKB/Akt fosforylace během znovuzahájení meiosy
Böhmová, Tereza ; Krylov, Vladimír (oponent) ; Šolc, Petr (vedoucí práce)
PI3K-PKB signal pathway participates in the CDK1 activation, which is necessary for meiosis resumption of mouse oocytes. That's why we wanted to examine the role of PKB in this process more in the details. The activity of PKB is associated with its phosphorylation at Thr308 and Ser473. These phosphorylations are probably independent and influence PKB function. Thr308 phosphorylated PKB is implicated in resumption of meiosis (GVBD), whereas Ser473 phosporylation is not - as oocytes with reduced phosphorylation on Thr308 have delayed GVBD kinetics and oocytes with inhibited phosphorylation of Ser473 reinitiate meiosis comparably to control oocytes. Conversely, oocyte treatment with synthetic biologically active PtdIns(3,4,5)P3 leads to stronger phosphorylation at Thr308 and accelerated GVBD kinetics. It was also found, that the kinase responsible for Ser473 phosphorylation in mouse oocytes is ATM. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
| |
|
|
Chemická enukleace u savčích oocytů
Černá, Martina ; Krylov, Vladimír (vedoucí práce) ; Petr, Jaroslav (oponent)
Předchozi techniky enukleace byly nepřesne a časově naročne. Často se využiva barveni jaderne DNA pomoci Hoechstu, přičemž je barvivo pro oocyt jedovate a ma vliv na jeho dalši vyvoj.Chemicka enukleace je metoda, ktera usnadni vznik cytoplastů ve většim množstvi a v kratšim čase. Budoucnost chemicke enukleace se nachazi na poli biotechnologickem, a to zejmena v oblasti jaderneho přenosu (terapeuticke, reprodukčni klonovani). Chemicka enukleace byla uspěšně provedena u několika modelovych zviřat:myš, ovce, skot. Avšak u prasat je tato technika stale vylepšovana, vzhledem k podobnosti s člověkem, kde by se měla později uplatnit. Bylo zjištěno, že u každeho druhu působi stejne chemikalie jinym způsobem na oocyt a tudiž je nutne zkoumat každy druh zvlašť.Proto byly hledany chemicke latky působici na praseči oocyty, tak aby došlo k vytvořeni vystupku obsahujiciho chromozomy (protrusion). Jako nejvhodnějši pro chemickou enukleaci jsme stanovili demekolcin v koncentraci 0,4 Ug/ml a doba působeni 30 minut (ktery zastavuje polymeraci tubulinu). Dale cytochalasin B v koncentraci 7,5 Ug/ml a doba působeni 10 minut. Uspěšny vznik vystupku obsahujiciho chromozomy (protrusion) koreluje s kvalitou oocytů. Dale jsme se zaměřili na distribuci mitochondrii po fuzi enukleovaneho a neenukleovaneho oocytu. Rovnoměrnou...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
|
Fyzické mapování centromerických a koncových markerů u vazebných skupin Xenopus tropicalis.
Tůmová, Lucie ; Krylov, Vladimír (vedoucí práce) ; Nedvídek, Josef (oponent)
Xenopus tropicalis patrí spolu s príbuzným druhem Xenopus laevis mezi významné modelové organismy z pohledu studia vývojových procesu. Nedostatkem Xenopus tropicalis oproti dlouho zavedeným modelum (Melanogaster, Mus apod.) je absence úplné vazebné a fyzické mapy, které jsou predpokladem pro identifikaci vývojove významných genu, vcetne jejich zarazení do syntenních skupin v rámci lidského genomu. V soucasné dobe existuje provizorní vazebná mapa, vytvorená skupinou patrící pod Oddelení biologie a biochemie University of Huston v Texasu, USA. Tvorí ji 10 vazebných skupin (LG1- LG10) a šest vazebných clusteru (A-F) složených z 1713 Simple Sequence Repeat (SSR) polymorfních markeru. Laborator vývojové biologie University Karlovy v Praze se na finalizaci vazebné mapy podílí fyzickým mapováním vybraných polymorfních markeru na chromozómech Xenopus tropicalis, díky kterému se již podarilo priradit všechny vazebné skupiny a clustery k jednotlivým chromozómum a urcit orientaci vetšiny z nich. Fyzické mapování terminálních markeru prokáže, nakolik vazebné skupiny pokrývají chromozómy po celé délce a které oblasti jsou zatím vazebne nezmapované. Spolupracující laborator National Institute for Medical Research v Londýne, UK, pomocí metody gynogenetického krížení sestavila na základe vybraných markeru z provizorní...
|
|
| |
|
|
Studium intronových polymorfizmů pro identifikaci pohlavních chromozómů u Xenopus Tropicalis
Seifertová, Eva ; Krylov, Vladimír (vedoucí práce) ; Nedvídek, Josef (oponent)
10 1.1. ABSTRACT STUDY OF INTRONIC POLYMORPHISMS FOR THE IDENTIFICATION OF SEX CHROMOSOMES IN XENOPUS TROPICALIS Xenopus tropicalis is a significant model organism of developmental biology. Its genom was sequenced. Linkage map based on SSR (Single Sequence Repeat) polymorphic markers was established. The map is still incomplete and contains a lot of inaccuracies. Currently used genetics markers based on repetitive sequences are not spread equally, hence some parts of chromosomes are not genetically mapped. This problem could be solved by polymorphism of intron sequences. To prove its possibly application it is necessary to determine its frequency in genome and confirm its utilization in crossbreeding and consequently in linkage mapping. Beyond its great importance any sex linkage genes are not known in Xenopus tropicalis species, and even a sex type determination is not clear. Gynogenetic studies leading to the determination of sex type produce different accomplishment. Therefore, it is important to create different system enabling sex type determination and, most importantly, to determinate the sex chromosomes. Intronic polymorphisms could serve even this purpose. Keywords: Intron polymorphisms/ Linkage mapping/ Genetic marker/ Sex determination/ Sex gene /Xenopus tropicalis
|
|
|
Vliv ubiquitinace spermií v rámci časného embryonálního vývoje u prasete
Petelák, Aleš ; Krylov, Vladimír (vedoucí práce) ; Petr, Jaroslav (oponent)
Metoda intracelulární injekce spermie je velmi efektivním nástrojem pro výzkum oplození. Po vytvoření nové laboratoře na půdě PřF UK bylo nutné nejdříve tuto metodu zavést a charakterizovat časný embryonální vývoj oplozených oocytů. Oocyty byly po oplození kultivovány do stadia blastocysty s úspěšností srovnatelnou s jinými laboratořemi (17%). Ubiquitin-proteazomální systém, který v buňce zajišťuje degradaci proteinů, se účastní regulace maturace a selekce spermií a je nezbytný pro penetraci vitelinní membrány. V těchto dějích je jeho funkce lokalizována extracelulárně. U spermií míra ubiquitinace koreluje s jejich kvalitou. Hypoteticky lze tedy předpokládat, že ubiquitinace nekvalitních spermií slouží jako negativní marker pro jejich rozpoznání a degradaci oocytárním 26S proteazomálním komplexem. Experimenty byly plánovány na základě předpokladu, že výkonnou částí selekčního mechanismu je 26S proteazom a z tohoto důvodu byl sledován vliv inhibice 20S proteazomu, pomocí peptidu MG132, na formování prvojader a následný časný embryonální vývoj po ICSI. Z pohledu zahájení dekondenzace spermie se neprojevil žádný účinek inhibice. Signifikantní rozdíl byl pozorován ve formování prvojader. U skupiny s MG132 docházelo k tvorbě prvojader jen v malém počtu případů (17%, 9%), oproti skupině bez inhibitoru...
|
host ::
RSS.