|
|
Odpověď na poškození DNA u Huntingtonovy choroby
Vachová, Veronika ; Šolc, Petr (vedoucí práce) ; Roth, Jan (oponent)
Huntingtonova choroba (HD) je autozomálně dominantní neurodegenerativní onemocnění, které vede ke ztrátě striatálních neuronů v bazálních gangliích. HD se projevuje nekoordinovanými pohyby a progresivním narušením kognitivních funkcí. HD je poměrně vzácné onemocnění a vyskytuje se přibližně u 0,01 % západoevropské populace. Je způsobena expanzí CAG repetice v genu pro huntingtin (HTT). Tato mutace vede k prodloužení polyglutaminového řetězce. Během exprese mutantního huntingtinu (mHTT) dochází v buňce k akumulaci dvouřetězcových zlomů (DSB) kvůli snížené schopnosti je opravit, což přispívá k patogenezi HD. Tento mechanismus však není zcela objasněn. Je několik úhlů pohledu, jak mHTT narušuje odpověď na DNA poškození (DDR). Některé studie tvrdí, že při expresi mHTT dochází k nadměrné aktivaci DDR včetně p53 signální dráhy vedoucí k apoptóze. Další výsledky poukazují na neschopnost buňky efektivně dokončit opravu pomocí nehomologního spojování konců (NHEJ) nebo neschopnost buňky tyto DSB dokonce rozeznat. Všechny tyto teorie mohou vysvětlit buněčnou smrt v důsledku vysokého počtu neopravených DNA poškození. Pochopení těchto mechanismů je důležité pro vývoj terapeutických strategií. Klíčová slova: Huntingtonova choroba, huntingtin, dvouřetězcové zlomy DNA, DNA poškození, homologní rekombinace,...
|
|
|
Kinázová signalizace v meióze I savčích oocytů
Brzáková, Adéla ; Šolc, Petr (vedoucí práce) ; Dráber, Pavel (oponent)
Polo-like kináza 1 (PLK1) patří do rodiny serin-threonin kináz řídících buněčný cyklus, podílí se na kontrole mitózy a přispívá rovněž k regulaci meiotického dělení. S použitím akutní farmakologické inhibice a metody Live Cell Imaging (LCI) se nám podařilo charakterizovat roli PLK1 v meióze I myších oocytů. Jaderná membrána oocytů s inhibovanou PLK1 se začíná rozpadat výrazně později než jaderná membrána kontrolních oocytů. Po inhibice PLK1 je také opožděno zahájení kondenzace chromatinu. Zároveň se, na rozdíl od kontrolních oocytů, jaderná membrána po inhibice PLK1 nezačíná rozpadat společně se zahájením kondenzace chromatinu - v oocytech s inhibovanou PLK1 se jaderná membrána rozpadá až ve chvíli, kdy je chromatin téměř úplně zkondenzován. Také trvání rozpadu jaderné membrány a kondenzace chromatinu je inhibicí PLK1 prodlouženo. Je známo, že v somatických buňkách zabraňuje inhibice PLK1 výstavbě dělícího vřeténka se dvěma póly. V myších oocytech to ale neplatí, tam se i po inhibici PLK1 bipolární dělící vřeténko vytváří, ačkoli jeho výsledný objem je menší než u kontrolních oocytů. I přes to, že jsou myší oocyty i po inhibici PLK1 schopny sestavit bipolární dělící vřeténko, zůstávají zastaveny před zahájením anafáze a nedochází u nich k segregaci chromosomů. Také somatické buňky s inhibovanou PLK1...
|
|
|
Úloha mitotických kináz AURKA a PLK1 v meiotickém zrání oocytů
Brzáková, Adéla ; Šolc, Petr (vedoucí práce) ; Šebková, Nataša (oponent)
Aurora A i Polo-like kináza 1 patří do rozvětvené rodiny serin/treonin kináz řídících průběh buněčného cyklu. Obě se podílí na kontrole mitózy a přispívají i k regulaci meiotického dělení. Ačkoli se role Aurory A ve znovuzahájení meiózy po prvním meiotickém bloku zdá být otázkou, na kterou současné studie přináší spíše rozporuplné odpovědi, je prakticky jisté, že hraje nezastupitelnou úlohu ve výstavbě dělícího vřeténka. V oocytech s inhibovanou (pomocí RNAi či inhibitorů) nebo overexprimovanou Aurorou A se vytváří abnormální dělící vřeténka bez pólů, s aberantním počtem pólů či s nezvyklou morfologií. Stejně tak narušení funkčnosti Plk1 vede v oocytech k výskytu poškozených dělících vřetének. Plk1 navíc, téměř jistě, hraje roli i v načasování rozpadu jaderné membrány neboli v GVBD.
|
|
|
Cell signaling pathways controlling meiotic maturation of mammalian oocytes
Šolc, Petr
5 3 Summary in Czech (Abstrakt v českém jazyce) Samičí zárodečné buňky, oocyty, vznikají již během embryonálního vývoje z primordiálních zárodečných buněk. Jsou nezbytným předpokladem pro reprodukci. Již během embryonálního vývoje oocyty vstupují do meiózy, ale krátce poté se jejich vývoj zastaví ve stádiu profáze I. Po nástupu pohlavní dospělosti spouští luteinizační hormon proces znovuzahájení meiózy oocytů in vivo v prostředí folikulu. Vyjmutí oocytů z folikulu a jejich kultivace ve vhodném médiu umožňuje tento proces úspěšně rekapitulovat v podmínkách in vitro. Rozpad jaderné membrány (GVBD) je první jasně viditelnou známkou znovuzahájení meiózy. Po GVBD se vytváří dělící vřeténko metafáze I. Pokud jsou chromozómy vyrovnány v metafázní rovině a mikrotubuly korektně připojeny na chromozomy, dojde ke vstupu do anafáze I. Po dokončení meiózy I vstupují oocyty přímo do meiózy II a opětovně zastavují svůj vývoj, tentokráte v metafázi II (MII). Tyto oocyty jsou schopné oplození, přičemž průnik spermie iniciuje dokončení meiózy. Vývoj z GV stádia do stádia MII je pod striktní kontrolou tzv. MPF faktoru, který se skládá z cyklin dependentní kinázy 1 (CDK1) a cyklinu B (CCNB). Pomocí funkčních studií (RNA interference, mikroinjekce mRNA) jsme na myších oocytech ukázali, že fosfatázy CDC25 A a B spolupracují na...
|
|
|
Regulace PKB/Akt fosforylace během znovuzahájení meiosy
Böhmová, Tereza ; Krylov, Vladimír (oponent) ; Šolc, Petr (vedoucí práce)
PI3K-PKB signal pathway participates in the CDK1 activation, which is necessary for meiosis resumption of mouse oocytes. That's why we wanted to examine the role of PKB in this process more in the details. The activity of PKB is associated with its phosphorylation at Thr308 and Ser473. These phosphorylations are probably independent and influence PKB function. Thr308 phosphorylated PKB is implicated in resumption of meiosis (GVBD), whereas Ser473 phosporylation is not - as oocytes with reduced phosphorylation on Thr308 have delayed GVBD kinetics and oocytes with inhibited phosphorylation of Ser473 reinitiate meiosis comparably to control oocytes. Conversely, oocyte treatment with synthetic biologically active PtdIns(3,4,5)P3 leads to stronger phosphorylation at Thr308 and accelerated GVBD kinetics. It was also found, that the kinase responsible for Ser473 phosphorylation in mouse oocytes is ATM. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
|
|
|
Využití simulace pro predikci vad a hodnocení odlitků z Al slitin
Šolc, Petr ; Bařinová, Dagmar (oponent) ; Čech, Jaroslav (vedoucí práce)
Cílem práce je srovnání použití tří slévárenských simulačních programů pro predikci vzniku porezity a parametru DAS v tlakově litém hliníkovém odlitku. Vzájemným porovnáním výsledků simulací a experimentálně naměřených hodnot ze vzorků odebraných z odlitku byla zjištěna dobrá schopnost programů v odhadu parametru DAS. Simulační softwary se shodují i v polohách míst s předpokládaným výskytem porezity, avšak velikost této porezity nebyla experimentálně ověřena, protože by bylo nutné mít vzorky přesně z míst dle simulací.
|
|
|
CDC25A je schopna indukovat znovuzahájení meiosy, ale inhibuje metafase I – metafase II přechod
Šolc, Petr ; Šašková, Adéla ; Baran, V. ; Kubelka, Michal ; Motlík, Jan
Práce se zabývá expresí a funkcí CDC25A v myších oocytech. Bylo zjištěno, že CDC25A protein se exprimuje v GV-oocytech, avšak jeho hladina při meiotickém zrání klesá, přičemž na konci meiosy je v metafase II oocytech pouze velmi nízká hladina CDC25A proteinu. Tento CDC25A proteinový pokles je závislý na CDK1 aktivitě, nesouvisí však se změnami hladiny Cdc25A mRNA, která zůstává konstantní. Pomocí funkčních studií (RNA interference, mikroinjekce mRNA) jsme jasně prokázali, že CDC25A je nezbytná pro znovuzahájení meiosy a tvorbu metafase I spindelu. Pokles CDC25A aktivity po znovuzahájení meiosy je klíčový pro korektní metafase I – metafase II přechod.
|
|
|
Aurora-A je zhrnuta v znovuzahájení meiosy a formaci metafáze I spindlu
Šašková, Adéla ; Šolc, Petr ; Baran, V. ; Kubelka, Michal ; Motlík, Jan
Práce se zabývá úlohou Aurora-A kinázy během meiotického zrání in vitro. Pomocí farmakologické inhibice PI3K, PKB a CDK1 bylo prokázáno, že Aurora-A, se aktivuje velmi časně při znovuzahájení meiosy, a toto aktivace je nezávislá na PI3K-PKB a CDK1 signalizaci. Dále bylo prokázáno (RNA interference, mikroinjekce mRNA), že Aurora-A je nutná pro korektní výstavbu metafáze I spindelu a pro metafase I – metafase II přechod.
|
|
|
Aurora-A je zhrnuta v znovuzahájení meiosy a formaci metafáze I spindlu
Šašková, Adéla ; Šolc, Petr ; Baran, V. ; Kubelka, Michal ; Motlík, Jan
Práce se zabývá úlohou Aurora-A kinázy během meiotického zrání in vitro. Pomocí farmakologické inhibice PI3K, PKB a CDK1 bylo prokázáno, že Aurora-A, se aktivuje velmi časně při znovuzahájení meiosy, a toto aktivace je nezávislá na PI3K-PKB a CDK1 signalizaci. Dále bylo prokázáno (RNA interference, mikroinjekce mRNA), že Aurora-A je nutná pro korektní výstavbu metafáze I spindelu a pro metafase I – metafase II přechod.
|
|
|
CDC25A je schopna indukovat znovuzahájení meiosy, ale inhibuje metafase I – metafase II přechod
Šolc, Petr ; Šašková, Adéla ; Baran, V. ; Kubelka, Michal ; Motlík, Jan
Práce se zabývá expresí a funkcí CDC25A v myších oocytech. Bylo zjištěno, že CDC25A protein se exprimuje v GV-oocytech, avšak jeho hladina při meiotickém zrání klesá, přičemž na konci meiosy je v metafase II oocytech pouze velmi nízká hladina CDC25A proteinu. Tento CDC25A proteinový pokles je závislý na CDK1 aktivitě, nesouvisí však se změnami hladiny Cdc25A mRNA, která zůstává konstantní. Pomocí funkčních studií (RNA interference, mikroinjekce mRNA) jsme jasně prokázali, že CDC25A je nezbytná pro znovuzahájení meiosy a tvorbu metafase I spindelu. Pokles CDC25A aktivity po znovuzahájení meiosy je klíčový pro korektní metafase I – metafase II přechod.
|
host ::
RSS.