|
|
Aplikace solvatačního modelu k popisu retence vybraných látek v kapalinové a plynové chromatografii
Jirkal, Štěpán ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Feltl, Ladislav (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
(CZ) Solvatační model (LSER) byl použit ke studiu retenčního chování látek v kapalinové a plynové chromatografii. V první kapitole byl studován popis retence 21 látek solvatačním modelem na reverzní stacionární fázi, v širokém rozmezí složení mobilní fáze methanol- voda a acetonitril-voda. Retence aromatických sloučenin byla obecně lépe popsána solvatačním modelem, než alifatických sloučenin. Byl sledován vliv jednotlivých analytů, použitých pro formulaci LSER modelu, na celkovou schopnost popisu retence modelem. Odlišných výsledků v odhadu retence bylo dosaženo použitím regresního souboru látek obsahujícím pouze sloučeniny aromatické, nebo naopak jen alifatické. Rozdílné výsledky také poskytoval solvatační model formulovaný pouze z kyslíkatých derivátů, nebo naopak dusíkatých derivátů organických látek. Druhá kapitola práce, tematicky zaměřená na plynovou chromatografii, se zabývala popisem retence 152 izomerů C5-C8 alkenů LSER modelem. Solvatační deskriptor L alkenů byl získán odhadovými metodami Havelec-Ševčík (HS) a Platts-Butina (PB), deskriptor E byl přímo vypočten podle jeho definice. Na základě použitých metod k odhadu deskriptorů byly sestaveny dva modely k popisu retence alkenů, model HS a model PB. Byla zjištěna vyšší chyba odhadu retence pro cis izomery alkenů, počítané modelem HS. Po...
|
|
|
VÝVOJ METOD VYSOKOÚČINNÉ KAPALINOVÉ CHROMATOGRAFIE KE STANOVENÍ VÝZNAMNÝCH SLOŽEK TABÁKU
Rozkovcová, Lucie ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
Záměrem této práce bylo vytvoření metody kapalinové chromatografie s DAD detekcí pro stanovení nikotinu v tabáku. Jako kontrolní metoda byla zvolena plynová chromatografie s upraveným pracovním postupem podle Světové zdravotnické organizace. Kapalinová chromatografie s optimalizovanými podmínkami je vhodnou metodou pro stanovení nikotinu v tabáku. Bylo dosaženo limitu detekce 0,0003 mg/ml a limitu stanovitelnosti 0,0010 mg/ml. Významnou částí práce byla optimalizace přípravy vzorku tabáku pro stanovení nikotinu. Oproti používaným postupům byl vytvořen relativně nenáročný pracovní postup přípravy vzorku. Stanovení nikotinu probíhalo z reálných vzorků tabáku, metoda byla také vyzkoušena na nikotinové náplni do elektronických cigaret, cigaretovém tabáku a na hrubém dýmkovém tabáku. U všech typů vzorků bylo dosaženo uspokojivých relativních směrodatných odchylek stanovení. Dále byla studována metoda stanovení polyfenolických látek vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s detektorem diodového pole. Z vybraných pěti analytů kyseliny chlorogenové, kyseliny kávové, rutinu, skopoletinu a quercitrinu metoda vykazovala největší citlivost pro kyselinu chlorogenovou a kyselinu kávovou. Pro všechny analyty bylo dosaženo nízkých limitů detekce a stanovitelnosti. Klíčová slova Kapalinová chromatografie, tabák,...
|
|
|
Aplikace solvatačního modelu k popisu retence vybraných látek v kapalinové a plynové chromatografii
Jirkal, Štěpán
(CZ) Solvatační model (LSER) byl použit ke studiu retenčního chování látek v kapalinové a plynové chromatografii. V první kapitole byl studován popis retence 21 látek solvatačním modelem na reverzní stacionární fázi, v širokém rozmezí složení mobilní fáze methanol- voda a acetonitril-voda. Retence aromatických sloučenin byla obecně lépe popsána solvatačním modelem, než alifatických sloučenin. Byl sledován vliv jednotlivých analytů, použitých pro formulaci LSER modelu, na celkovou schopnost popisu retence modelem. Odlišných výsledků v odhadu retence bylo dosaženo použitím regresního souboru látek obsahujícím pouze sloučeniny aromatické, nebo naopak jen alifatické. Rozdílné výsledky také poskytoval solvatační model formulovaný pouze z kyslíkatých derivátů, nebo naopak dusíkatých derivátů organických látek. Druhá kapitola práce, tematicky zaměřená na plynovou chromatografii, se zabývala popisem retence 152 izomerů C5-C8 alkenů LSER modelem. Solvatační deskriptor L alkenů byl získán odhadovými metodami Havelec-Ševčík (HS) a Platts-Butina (PB), deskriptor E byl přímo vypočten podle jeho definice. Na základě použitých metod k odhadu deskriptorů byly sestaveny dva modely k popisu retence alkenů, model HS a model PB. Byla zjištěna vyšší chyba odhadu retence pro cis izomery alkenů, počítané modelem HS. Po...
|
|
|
Analýza mozkomíšního moku u pacientů s hydrocefalem
Chlupáčová, Tereza ; Kolátorová, Lucie (vedoucí práce) ; Dušková, Michaela (oponent)
Normotenzní hydrocefalus (NPH) je neurodegenerativní onemocnění, které postihuje převážně starší věkové skupiny. Dochází při něm k hromadění mozkomíšního moku (CSF), což vede ke zvětšení mozkových komor a následnému utlačování mozkových struktur. Klinické projevy (poruchy chůze, rozvoj demence, inkontinence) mohou být snadno zaměněny s projevy jiných neurodegenerativních onemocnění. Na rozdíl od dalších onemocnění tohoto typu, lze NPH operativně léčit, pokud je včas rozpoznán. Pacienti jsou k operaci indikováni na základě lumbálního drenážního testu. V současné době nejsou známy spolehlivé laboratorní biomarkery, o které by se mohla diagnostika NPH opřít. V minulosti se u neurodegenerativních onemocnění ukázaly být steroidy spřažené s neuronální aktivitou vhodnými diagnostickými markery. V rámci diplomové práce byla vyvinuta instrumentální metoda, kterou byly u pacientů s NPH a zdravého kontrolního souboru změřeny hladiny vybraných steroidů v CSF. Významný rozdíl byl zjištěn v koncentracích aldosteronu a kortizonu. Aldosteron byl vyšší u skupiny s NPH a kortizon u kontrol. V rámci diagnostiky je důležité rozlišit pacienty s NPH a pacienty, kteří mají podobné klinické příznaky. Spektrum stanovovaných analytů bylo rozšířeno o další steroidy, jejichž hladiny byly měřeny u obou zmíněných skupin...
|
|
| |
|
|
HPLC-MS stanovení biologicky aktivních látek v Labi
Ďuráčová, Miloslava ; Vytlačilová, Jitka (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické botaniky a ekologie Autor diplomové práce: Miloslava Ďuráčová Vedoucí diplomové práce: RNDr. Jitka Vytlačilová, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC-MS stanovení biologicky aktivních látek v Labi Biologicky aktivní látky vstupují do životního prostředí různými cestami. Ve formě pesticidů, kosmetických přípravků a v neposlední řadě jako léčiva a jejich metabolity. Tyto sloučeniny se klasifikují jako nově vznikající kontaminanty. Se zvyšující se spotřebou biologicky aktivních látek stoupá jejich koncentrace v prostředí. Je nutné sledovat jejich vliv na jednotlivé složky ekosystému a sledovat jejich koncentrační hladiny. Tato práce byla vypracována ve spolupráci se státním podnikem Povodí Labe. V experimentální části je popsána nově vyvinutá metoda, aplikovaná na stanovení vybraných biologicky aktivních látek systémem UPLC-MS/MS ve vzorcích povrchových vod. Tato metoda byla zařazena do rutinního provozu laboratoře. Z celkového počtu 19 sloučenin se u 10 z nich pohybovaly koncentrace nad limity detekce. Biologicky aktivní látky nalezené v nejvyšších koncentracích acetaminofen (559 ng/l, Králický potok), gabapentin (457 ng/l Labe LB Schmilka), kotinin (139 ng/l, Králický potok). Klíčová slova: HPLC-MS analýza, Labe,...
|
|
|
Příprava a studium vlastností kyanidhydratasy z Aspergillus niger a nitrilasy z Arthroderma benhamiae
Hradilová, Iveta ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Martínek, Václav (oponent)
Nitrilasy jsou dobře známé pro svou jedinečnou schopnost účinně katalyzovat nitrilové sloučeniny na odpovídající karboxylové kyseliny za uvolnění amoniaku. V některých případech mohou vznikat i amidy jako vedlejší produkty. Během chemické reakce nitrilasy nevyžadují přítomnost kofaktorů ani prostetických skupin na rozdíl od nitrilhydratas. Tato práce je zaměřena na nitrilasu z vláknité houby Arthroderma benhamiae a kyanidhydratasu z organismu Aspergillus niger K10. Geny těchto vláknitých hub byly exprimovány pomocí plasmidu pET-30a(+) v bakteriích Escherichia coli BL21-Gold (DE3). Získané produkty byly purifikovány sérií iontově výměnných chromatochrafií a gelové filtrace a následně charakterizovány zejména se zřetelem na jejich oligomerní stav a využití pro proteinovou krystalografii. K získání informací ohledně strukturního uspořádání jednotlivých proteinů byla použita elektroforetická separace v polyakrylamidovém gelu, gelová filtrace, analytická ultracentrifugace, hmotnostní spektrometrie, dynamický rozptyl světla a Ramanova spektroskopie kapkově nanášených povlaků. Klíčová slova: nitrilasa, kyanidhydratasa, Aspergillus niger, Arthroderma benhamiae, kapalinová chromatografie
|
|
|
Využití HPLC a LC-MS/MS metod v diagnostice dědičných metabolických poruch
Bártl, Josef
V rámci této disertační práce byly vyvinuty a optimalizovány metody kapalinové chromatografie (HPLC) a tandemové hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS) a následně využity pro diagnostiku dědičných metabolických poruch. První tematický okruh popisuje zavedení komplexního laboratorního postupu pro diagnostiku pacientů s dědičnou xanthinurií využívající kvantifikaci klíčových biochemických markerů a stanovení aktivity enzymu v plazmě. Pro tyto účely byla zavedena HPLC metoda s detekcí diodového pole pro kvantifikaci hypoxanthinu, xanthinu, allopurinolu a oxypurinolu v moči a plazmě a metoda pro stanovení pterinu a isoxanthopterinu v plazmě využívající HPLC separaci a detekci látek fluorimetrickým detektorem. Tyto metody byly úspěšně aplikovány v klinické praxi při diagnostice dvou pacientů s xanthinurií I. typu. Druhý tematický okruh je věnován vývoji a klinické aplikaci LC-MS/MS metody pro kvantitativní stanovení celkového homocysteinu (tHcy), methioninu (Met) a cystathioninu (Cysta) v suché krevní kapce a plazmě. Bylo prokázáno, že tato metoda dokáže detekovat pacienty s homocystinurií a zároveň rozlišit na základě koncentračních poměrů jednotlivých analytů, zda je porucha v transsulfurační či remethylační části metabolismu homocysteinu. Díky jednoduchému odběru a transportu vzorku suché krevní kapky...
|
|
|
Secondary metabolites, allelopathy and their significance in the invasion of Heracleum mantegazzianum
Jandová, Kateřina ; Dostál, Petr (vedoucí práce) ; Frouz, Jan (oponent) ; Valterová, Irena (oponent)
Jedna z teorií vysvětlujících invaze nepůvodních druhů rostlin předpokládá, že tyto rostliny uvolňují alelopatické látky, které dosud nebyly v invadovaných oblastech přítomné. V předkládané disertační práci jsem v sérii pokusů prováděných in vitro a v zahradních experimentech zkoumala alelopatii kořenových exudátů invazní rostliny Heracleum mantegazzianum (bolševník velkolepý) a srovnávala ji s alelopatií domácího příbuzného H. spondylium a dvou nepříbuzných domácích druhů. Dále jsem zkoumala vnitrodruhovou variabilitu alelopatie porovnáním 41 různých mateřských linií druhu H. mantegazzianum, které byly nasbírány v několika oblastech a populacích v České republice. Vedle alelopatických efektů jsem zkoumala i chemickou identitu látek za ně zodpovědných. Za účelem zjištění možné interakce alelopatických látek s půdními mikroorganismy jsem určila složení mikrobiálního společenstva pomocí mastných kyselin fosfolipidů (PLFA) a neutrálních lipidů (NLFA) na invadovaných lokalitách v České republice. Současně jsem na těchto lokalitách stanovovala abiotické půdní vlastnosti a dostupnost světla. Výsledky ukázaly, že H. mantegazzianum je schopné alelopaticky působit jak in vitro, tak v zahradních experimentech, nicméně inhibice tímto druhem způsobená je srovnatelná s efektem domácích druhů. Rozklad...
|
|
|
Využití HPLC a LC-MS/MS metod v diagnostice dědičných metabolických poruch
Bártl, Josef ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
V rámci této disertační práce byly vyvinuty a optimalizovány metody kapalinové chromatografie (HPLC) a tandemové hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS) a následně využity pro diagnostiku dědičných metabolických poruch. První tematický okruh popisuje zavedení komplexního laboratorního postupu pro diagnostiku pacientů s dědičnou xanthinurií využívající kvantifikaci klíčových biochemických markerů a stanovení aktivity enzymu v plazmě. Pro tyto účely byla zavedena HPLC metoda s detekcí diodového pole pro kvantifikaci hypoxanthinu, xanthinu, allopurinolu a oxypurinolu v moči a plazmě a metoda pro stanovení pterinu a isoxanthopterinu v plazmě využívající HPLC separaci a detekci látek fluorimetrickým detektorem. Tyto metody byly úspěšně aplikovány v klinické praxi při diagnostice dvou pacientů s xanthinurií I. typu. Druhý tematický okruh je věnován vývoji a klinické aplikaci LC-MS/MS metody pro kvantitativní stanovení celkového homocysteinu (tHcy), methioninu (Met) a cystathioninu (Cysta) v suché krevní kapce a plazmě. Bylo prokázáno, že tato metoda dokáže detekovat pacienty s homocystinurií a zároveň rozlišit na základě koncentračních poměrů jednotlivých analytů, zda je porucha v transsulfurační či remethylační části metabolismu homocysteinu. Díky jednoduchému odběru a transportu vzorku suché krevní kapky...
|
host ::
RSS.