|
|
Development of electrophoretic method for determination of ethanolamines in antifreeze mixtures
Hamráková, Katarína ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Táto práca sa zaoberá vývojom, optimalizáciou a testovaním použiteľnosti elektroforetickej metódy pre stanovenie etanolamínov v nemrznúcich zmesiach. Metóda bola testovaná s reálnou matricou chladiacej kvapaliny. Pre stanovenie bola využitá kapilárna elektroforéza s nepriamou UV detekciou. Etanolamíny - monoetanolamín, dietanolamín a trietanolamín - sú organické látky, ktoré sa v nemrznúcich zmesiach používajú ako inhibítory korózie, pretože sa glykoly, ktoré sa do týchto zmesí pridávajú, môžu vplyvom vysokej teploty či kyslíka zo vzduchu premeniť na kyseliny, ktoré spôsobujú koróziu kovov. Metóda bola optimalizovaná výberom vhodného zloženia základného elektrolytu, jeho pH, vhodným pomerom jednotlivých zložiek tlmivého roztoku a výberom vhodného vnútorného štandardu. Základným elektrolytom bol tlmivý roztok zložený z 60 mM kyseliny octovej a 30 mM histidínu, pH 4,59 a ako vnútorný štandard bol použitý lyzín. K meraniam sa používala kremenná kapilára s vnútorným priemerom 50 µm, celkovou dĺžkou 50,0 cm a efektívnou dĺžkou 41,5 cm. Bolo otestované meranie z krátkeho konca a skrátenie kapiláry na 35,0 cm s efektívnou dĺžkou 26,5 cm, ktoré bolo ďalej využívané. Vzorka bola dávkovaná hydrodynamicky tlakom 5 kPa po dobu troch sekúnd. Detekcia prebieha pri vlnovej dĺžke 214 nm. Metódou je možné stanoviť...
|
|
|
Studium konjugátů metalothioneinu pomocí elektromigračních metod
Johaníková, Klára ; Zemánková, Kristýna (oponent) ; Vaculovičová, Markéta (vedoucí práce)
Bakalářská práce se zabývá studiem konjugátů metallothioneinu (MT) s fluorescenčními nanočásticemi pomocí elektromigračních metod. Pozornost je věnována především přípravě a charakterizaci kvantových teček (QDs) a jejich biokonjugátů s proteinem metallothioneinem, jehož separační podmínky (koncentrace a vhodné pH elektrolytu) byly pečlivě optimalizovány. Pro přípravu QDs bylo využitopůsobení UV záření pro jeden typ kvantových teček a termického působení vysoké teploty pro typ druhý. Konjugace QDs s proteinem byla provedena přes karbodiimidovýzero-lengthcrooss-linker (EDC/sulfo-NHS), který slouží k aktivaci karboxylových skupin a umožňuje biokonjugaci ligandu kovalentní vazbou. Výsledné biokonjugáty byly studovány pomocí kapilární elektroforézy s absorpční detekcí ( 214).
|
|
|
Separation of triazoles from real samples with capillary electrophoresis
Kovač, Ishak ; Jakl, M. ; Šolínová, Veronika ; Jaklová Dytrtová, Jana
The CE has become one of the advantageous tools in fungicides analysis in complex matrices due to its simplicity and separation efficiency. The separation of a group of thee triazole (i.e. penconazole, tebuconazole, and cyproconazole) fungicides was achieved with CD-MEKC with anionic Sg-CD as a selector at pH=4,8. The background electrolyte consisted of TRIS phosphate buffer (50 mmol/L) and 15 mmol/L SDS. The separation was performed on uncoated fused silica capillary with 500/425 mm (total/effective) length under -15 kV separation voltage. Achieved LOD values with this method were: 0,73, 1,88, 0,60, 1,18 (umol/L) for penconazole, tebuconazole, cyproconazole A and B respectively.
|
|
|
Využití kapilární elektroforézy při analýze sacharidové složky glykopeptidů
Šimonová, Alice ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Cílem této diplomové práce byl vývoj metody pro stanovení osmi monosacharidů nejčastěji se vyskytujících v glykoproteinech pomocí kapilární elektroforézy. Konkrétně se jednalo o stanovení glukosy, galaktosy, manosy, N-acetylglukosaminu, N-acetylgalaktosaminu, fukosy, N-acetylneuraminové kyseliny a xylosy. Celková délka křemenné kapiláry s vnitřním průměrem 10 m byla 50,0 cm a efektivní délka 35,0 cm. Základním elektrolytem byla směs hydroxidu sodného o koncentraci 50 mmol/l, hydrogenfosforečnanu sodného o koncentraci 22,5 mmol/l a cetyltrimethylamoniumbromidu o koncentraci 0,2 mmol/l. Vzorky byly dávkovány hydrodynamicky tlakem 5 kPa po dobu 70 s, separace probíhala při napětí -30 kV a tlaku 270 kPa vkládaném na výstupní vialku a detekce analytů probíhala pomocí bezkontaktního vodivostního detektoru. Meze detekce se pohybovaly v rozmezí od 5 do 7 mg/l a meze stanovitelnosti od 16 do 22 mg/l. Opakovatelnost ploch píků a jejich migračních časů vztažených na vnitřní standard kyseliny 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethansulfonové poskytla hodnoty relativních směrodatných odchylek menších než 4 %. Nakonec byly určeny vhodné podmínky pro hydrolýzu oligosacharidů na monosacharidy před jejich separací. Hydrolýza probíhala v 4M kyselině chlorovodíkové při 100 řC v blokové lázni, hydrolýza netrvala déle než...
|
|
|
New technique on a chip for rapid detection of biological materials
Pejović Simeunović, Jelena ; Foret,, František (oponent) ; Táborský,, Petr (oponent) ; Hubálek, Jaromír (vedoucí práce)
This work proposes a technique for on-chip separation and detection of quantum dots (QDs) conjugated with various proteins in order to study the inuence of the coupling agent on a quenching of QD uorescence intensity caused by conjugation to a protein and to perform multi-analyte immunoassay to identify small amounts of the protein. Under optimal conditions, bioconjugated QDs were successfully separated from free QDs within 10 minutes. Particles and target solutions were mixed, and on-chip detection was performed using a device developed in our laboratory. Only one excitation light source was used in combination with several filters for different emission wavelengths. Fluorescence emitted by the two types of conjugated QDs could then be recorded simultaneously since the QDs emitted light at different wavelengths while being excited at the same wavelength. By mixing two types of QDs bioconjugated with two kinds of proteins and antibodies we were able to detect immunocomplex peaks with varying areas. The peak area depended on concentration of QDs and antigens, on the progress of antibody-antigen reaction and proved to be linearly correlated with the antigen concentration. We showed that on-chip capillary electrophoresis of QDs can be used as a sensitive technique for detection of biological molecules. The main benefits of this method are simplicity, small sample and reagent volume requirements, and high efciency of separation.
|
|
|
Coupling of micro-electromembrane extraction to transient capillary isotachophoresis for the analysis of drugs in biological samples
Lučaj, Martin ; Pospíchal,, Jan (oponent) ; Dvořák, Miloš (vedoucí práce)
The diploma thesis is focused on the development of in-line micro-electromembrane extraction (EME) coupled to capillary electrophoresis (CE) for the analysis of selected drugs in body fluids. Up to now, direct coupling of EME to CE has been demonstrated on diluted river samples only [1]. Although the published set-up has been implemented within a commercial CE it suffers from several drawbacks that can have a negative impact on the analysis of samples with higher complexity. The instrumental arrangement presented in this thesis eliminates these deficiencies. The experimental part is based on the optimization of fundamental extraction and separation conditions for the analysis of model basic drugs (nortriptyline, haloperidol, loperamide) with the use of transient isotachophoresis (tITP) principle. The extraction conditions were optimized for electro-driven transport of basic analytes from complex matrices (urine) through free liquid membrane followed by injection step utilized by electrokinetic supercharging (EKS), which focused target analytes into the CE capillary. Optimized conditions have been applied on blood in the form of dry blood spots, which are highly attractive samples in the current clinical analysis. The repeatability of the measurements was
|
|
|
Využití vysokoúčinných separačních metod pro chirální i achirální separace
Šubová, Martina
V první části disertační práce byla na sadě analytů pomocí kapilární elektroforézy otestována schopnost chirální separace nejprve dvou permanentně kladně nabitých cyklodextrinových derivátů, a to PEMEDA- a PEMPDA-β-cyklodextrinu. Výborné enantioseparační vlastnosti vykazovaly oba selektory v přítomnosti N-boc-D,L-tryptofanu, u kterého docházelo k úplnému oddělení enantiomerů již při 0,5 mmol·l-1 koncentraci cyklodextrinového derivátu v základním elektrolytu. Rozdíly mezi enantiodiskriminačními vlastnostmi jednotlivých derivátů však byly minimální. Druhou testovanou skupinu tvořily dva deriváty cyklodextrinu, a to 2-O- a 3-O-cinnamyl- α-cyklodextrin. Tyto deriváty jsou schopné tvořit supramolekulární polymery ve vodných roztocích, které se při zvýšené teplotě rozpadají. Tvorba těchto polymerů byla otestována pomocí NMR a DLS experimentů. Při testování chirálních separační schopností na skupině vybraných analytů ani jeden z uvedených cyklodextrinových derivátů nevykazoval enantiodiskriminační vlastnosti. V rámci antipredační studie byla pro separaci deseti derivátů pterinu a riboflavinu, které se mohou ve formě pigmentů vyskytovat u hmyzu, plazů nebo obojživelníků jako součást jejich výstražného zbarvení, použita HPLC-MS/MS metoda pracující v HILIC módu. Vyvinutá metodika byla aplikována při analýze...
|
|
|
Determination of proteinogenic amino acids by high-performance separation techniques
Hodek, Ondřej
(CZ) Proteinogenní aminokyseliny patří mezi základní stavební jednotky živých organismů. Proto byl v poslední době výzkum v metabolomice zaměřen na vývoj rychlých a citlivých analytických metod pro stanovení aminokyselin. Tato práce obsahuje dvě studie popisující vývoj vysoce účinných separačních metod pro kvantifikaci aminokyselin. V první studii byla vyvinuta metoda kapilární elektroforézy pro stanovení aminokyselin v rostlinách tabáku. Nedílnou součástí této studie byla optimalizace extrakce aminokyselin z rostlinného materiálu. Extrakce byla optimalizována postupem "design of experiments" (DoE), pomocí kterého byly vyhodnoceny faktory ovlivňující výtěžek extrakce aminokyselin. Nejdůležitějšími faktory byly objem a koncentrace extrakčního činidla (kyselina chlorovodíková), jejichž optimální hodnoty byly určeny pomocí "response surface methodology" (RSM). Poté byly aminokyseliny separovány pomocí kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí a stanoveny za použití kalibrace s vnitřním standardem, což přispělo ke zlepšení přesnosti metody. Druhá studie byla zaměřena na vývoj metody pro stanovení aminokyselin v lidské plasmě pomocí superkritické fluidní chromatografie. Jedním z cílů této studie bylo zvýšit rozpustnost aminokyselin v mobilní fázi bohaté na CO2. Nejdříve byla zvýšena...
|
|
|
Method optimization for simultaneous separation of six triazole fungicides in HPLC
Kovač, Ishak ; Martín Miján, P. ; Del Sol Vega Alegre, M. ; Dejmková, H. ; Jaklová Dytrtová, Jana ; Schwarzová, K.
Triazole pesticides are widely used in agriculture against fungi pathogens. Their application is not restricted on just one member of the group, more importantly, the application is usually carried out in the mixture of two or more triazoles. Hence, this work focuses on simultaneous separation and detection of six triazole fungicides: penconazole, tebuconazole, propiconazole, cyproconazole, fenbuconazole, and difenoconazole. Two different columns were tested with different parameters for isocratic and gradient elution in HPLC with UV detector. On Purospher Reverse Phase-18 column with gradient elution isomers of triazoles cyproconazole and propiconazole were successfully separated. However, on this column, there was an overlap of some triazoles. In contrast, the isocratic elution on Kromasil Eternity-5-PhenylHexyl column showed sufficient separation capabilities. In further research, chiral separation of triazoles will be considered using capillary electrophoresis.
|
|
|
Nelineární jevy v elektrokinetické chromatografii
Dovhunová, Magda ; Dubský, Pavel (vedoucí práce) ; Koval, Dušan (oponent) ; Ševčík, Juraj (oponent)
V kapilární elektroforéze se často využívají komplexující činidla, protože interakce mezi analytem a komplexující látkou může vést k dosažení či zlepšení separace. Mezi metody, které komplexaci využívají, se řadí i elektrokinetická chromatografie a afinitní kapilární elektroforéza (ACE). ACE se využívá ke stanovování komplexačních konstant mezi analytem a komplexujícím činidlem. To se komplikuje v případě chirální separace, kdy na sobě parametry dvou analytů (enantiomerů) nejsou zcela nezávislé. V rámci práce byl proto navržen postup, který by při vyhodnocování komplexačních parametrů dvou enantiomerů měl být vždy používán. Současně bylo posouzeno i statistické vyhodnocení stanovených parametrů. Práce se dále zabývá stanovením metody, která umožňuje určit relativní migrační pořadí dvou enantiomerů ve dvou odlišných separačních systémech s komplexujícími činidly. Matematický popis elektroforézy je založený na rovnicích kontinuity, které jsou z definice nelineární. Rovnice je však možné linearizovat a získat tak aproximativní analytické řešení. Z tohoto přístupu vychází i nový generalizovaný model elektromigrace, který umožňuje zahrnout kompletní komplexační rovnováhy do teoretického popisu elektroforézy. Tak je možné predikovat různé jevy, včetně nelineárních, spojené s komplexací. Práce se zaměřuje...
|
host ::
RSS.