|
| |
|
|
Stanovení spektra mastných kyselin ve vybraných ztužených tucích
JANEŠÍKOVÁ, Kristina
Cílem této práce je seznámit se s metodou stanovení spektra mastných kyselin ve ztužených tucích pomocí plynové chromatografie a hmotnostní spektrometrie. V teoretická části jsou uvedeny informace o druzích lipidů, jejich složení, vlastnostech mastných kyselin zejména v olejích a ve ztužených pokrmových tucích a o základních metodách ztužení olejů. Tato část je zaměřena na metodu stanovení mastných kyselin pomocí plynové chromatografie s využitím kvalitativní identifikace pomocí hmotnostní spektrometrie. Mastné kyseliny byly stanoveny v některých komerčních tucích (Albert, Ceres Soft, Iva, Lando, Lira, Omega, Varoma). Ve všech tucích byla nejvíce zastoupena kyselina palmitová (kyselina hexadekanová), zaujímala 36-45,5%, dále byla hojně zastoupena kyselina olejová (cis-oktadek-9-enová) z 32,2-39%. Poslední více zastoupenou kyselinou je kyselina linolová (cis, cis-oktadeka-9,12-dienová). Je zastoupena od 7,7% do 10,5%. Nižší množství kyseliny linolové obsahuje tuk Albert. Tato kyselina zaujímá pouze 4,5%. Zajímavý je obsah kyselin typických pro mléčný tuk přežvýkavců, jedná se o kyselinu kaprylovou (oktanová), kaprinovou (dekanová) a laurovou (dodekanová), a obsah trans-kyselin. Ztužený tuk Albert má nejvyšší obsah trans-kyselin, ve výrobku zaujímají tyto kyseliny 23,4%. Z tohoto výsledku je možné usoudit, že tento výrobek má pravděpodobně nižší kvalitu, než výrobky ostatní. Obsah kyselin typických pro mléčný tuk je v porovnání s ostatními tuky vyšší u tuku Lando a Iva. Výsledky tímto naznačují, že do těchto výrobků byl mléčný tuk při výrobě pravděpodobně přidán. V úseku jednoho roku nebyly zaznamenány výrazné změny ve složení vybraných ztužených tuků, ale z dlouhodobého hlediska je patrná výrazná změna ve složení u ztuženého tuku Ceres Soft a Omega, při čemž zásadní byl velký pokles trans-kyselin.
|
|
| |
|
| |
|
|
Analysis of lipids mobilized by adipokinetic hormones in the firebug Pyrrhocoris apterur (Heteroptera: Pyrrhocoridae)
BÁRTŮ, Iva
An effect of two adipokinetic hormones (Pyrap-AKH and Peram-CAH-II) on distribution of diacylglycerol (DG) molecular species and their fatty acid (FA) constituents were investigated by liquid chromatography (HPLC) - electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) in haemolymph of the firebug Pyrrhocoris apterus. The results show that DGs with characteristic FAs are preferentially mobilized from fat body (FB) by the action of both AKHs produced by P. apterus. Both the macropterous and brachypterous morphs show very close DG and FA profiles. A separate action of the Pyrap-AKH and the Peram-CAH-II, however, exerts distinct differences in FA distribution at the macropterous morph. It seems that partially C16 and mainly unsaturated C18 FAs play a dominant role in the AKH action with an exclusive position of linoleic acid (18:2) which represents 50 - 60% of the total DG mobilization. The metabolically active C16 and C18 FAs are preferentially absorbed from the linden seeds and accumulated in the FB.
|
|
|
LC-MS analysis based on probabilistic approach
URBAN, Jan
Kapalinová chromatogra e (LC) ve spojení s hmotnostním spektrometrem (MS) p{\o}edstavuje m\`{i}{\o}ící techniku, která umo{$^3\!/\!_4$}\`{o}uje získat informace o látkách ve zkoumaném extraktu. V minulosti ji{$^3\!/\!_4$} bylo vyvinuto mnoho metod, jak ke zpracov ání, tak k analýze nam\`{i}{\o}ených dat. Nicmén\`{i} byly {\o}e{$^1$}ena pouze \`{e}ást problematiky a to nezávisle na ostatních. Tudí{$^3\!/\!_4$} první \`{e}ást práce se zabývá popisem existujících metod a technik pou{$^3\!/\!_4$}í- vaných v sou\`{e}asné dob\`{i} k analýze a zpracování m\`{i}{\o}ení z LC-MS. Tato diserta\`{e}ní práce p{\o}edstavuje p{\o}ístup zalo{$^3\!/\!_4$}ený na teorii sytému, jím{$^3\!/\!_4$} popisuje abstraktní model nam\`{i}{\o}ených dat. Takto vytvo{\o}ený model uzavírá ve{$^1$}keré kroky ke zpracování i k analýzy na vhodné a odpovídající matematické místo. Tvorba modelu je ukázána b\`{i}hem popisu m\`{i}{\o}ícího za{\o}ízení a jeho výstup\`{u}. Abstraktní model LC-MS dat je pou{$^3\!/\!_4$}it k rozd\`{i}lení nam\`{i}{\o}ených dat na jeho t{\o}i \`{e}áste\`{e}né p{\o}ísp\`{i}vky, vlastní signál analytu, náhodný {$^1$}um a systémový {$^1$}um. Rozd\`{i}lení na jednotlivé p{\o}ísp\`{i}vky lze odhadnout pomocí pravd\`{i}podobnostních metod. Pravd\`{i}podobnostní p{\o}ístup k analýze LC-MS m\`{i}{\o}ení je implementován v software, který byl vyvinut a publikován v Bioinformatics Journal.
|
|
|
Analýza organických kyselin novým postupem extrakční derivatizace v krevní plasmě a séru technikou GC/MS
JAHODOVÁ, Lucie
Bakalářská práce byla zpracována na téma {\clqq}Analýza organických kyselin novým postupem extrakční derivatizace v krevní plasmě a séru technikou GC/MS{\clqq}. Cílem této práce bylo vypracování metody pro rychlé stanovení organických kyselin novým postupem extrakční derivatizace, identifikovat a stanovit organické kyseliny v tělních tekutinách, porovnat jejich zastoupení a vyhodnotit možnosti uplatnění metody v klinické diagnostice. Tělní tekutiny obsahují stovky organických kyselin, které spoluvytvářejí klinický obraz o zdravotním stavu pacienta. Současný výzkum se zaměřuje na zavedení metod umožňujících komplexní, metabolomickou analýzu těchto diagnosticky významných metabolitů. Pro separaci, stanovení a identifikaci organických kyselin ve složitých biologických matricích se v současné době analytikovi nabízí velký počet metod a několik účinných analytických separačních technik. V první, teoretické části bakalářské práce, jsou shrnuty poznatky o vlastnostech organických kyselin a možnostech jejich stanovení. V praktické části byla vypracována metoda pro rychlé stanovení organických kyselin v tělních tekutinách pomocí GC/MS. Pomocí této techniky lze analyzovat velké množství organických kyselin v minimálním objemu tělní tekutiny. Byla provedena derivatizace souboru několika desítek organických kyselin ethylchlormravenčanem ve vodném médiu. Reakce probíhá rychle a za laboratorní teploty. Použitelnost vypracované metody byla ověřena na analýze organických kyselin v biologických vzorcích. Ve vzorcích krevního séra a plasmy byly pomocí použité metody, retenčních dat a EI hmotnostních spekter identifikovány desítky organických kyselin. Pokusy provedené v této práci prokázaly, že derivatizace pomocí chlormravenčanů ve vodném prostředí je poměrně jednoduchou, rychlou a slibnou metodou pro analýzu organických kyselin. Pro možné uplatnění metodiky v klinické diagnostice je nezbytný další experimentální výzkum, aby bylo možno vymezit přednosti a omezení tohoto nového metodického přístupu.
|
|
|
Analýza glykoproteinů ze slinných žláz klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
BUČINSKÁ, Lenka
Charakterizovala jsem nekolik potencionálních glykoproteinů z extraktů slinných žláz nenasátých a částečně nasátých samic klíštěte Ixodes ricinus použitím afinitního značení s lektiny a pomocí enzymatické deglykosylační reakce. Izolovala jsem glykoprotein specifický k lektinu GNA. Tento glykoprotein obsahuje N{--}vázanou terminální manózu připojenou Man{$\alpha$}1,3Man. Tento protein byl hmotnostní spektrometrii určen jako Karboxypeptidáza M. Dále byly izolovány dva glykoproteiny obsahující GalNAc pomocí HPA{--}afinitní chromatografie. Výsledkem MS analýzy bylo určení morčecího proteinu Trappin 12. V SŽ nasáté samice klíštěte jsem detekovala fukózu vazanou vazbami {$\alpha$}1,2, {$\alpha$}1,3 a {$\alpha$}1,6. Také přítomnost O{--}vázané fukózy je možná. Přítomnost kyseliny sialové v glykoproteinech SŽ a slinách nasáté samice klíště byla nepřímo prokázána vazbou s MAA II lektinem. Analýzou hmotnostní spekrometrie byla zjištěna N{--}terminální sekvence peptidu podobná s myším sialoadhesinem (Siglec 1). Dosavadní výsledky z MS zatím nepřispěly k potvrzení či vyvrácení přítomnosti Siglec 1. Z nenasátých SŽ samic jsme izolovali dva proteiny specifické pro značení GNA lektinem. Byly předběžně identifikovány jako protein podobný arylsulfatáze B a Sojo protein cytoskeletu klíštěte Ixodes. Přítomnost proteinů s GNA specifitou byla prokázána v granulech acinů SŽ nenasáté a částečně nasáté samice klíštěte. Přítomnost fukózy byla prokázána v granulárních buňkách acinů II a III a ve střevních buňkách a obsahu střeva klíštěte pomocí afinitního značení a reakce byla pozorována florescenčním mikroskopem.
|
|
| |
|
|
Chromatografické metody pro stanovení metabolitů značených stabilními izotopy a jejich aplikace v klinickém výzkumu
ŽABOKRTSKÁ, Jana
V lékařské diagnostice jsou využívány látky značené radioaktivními nebo stabilními izotopy. V současné době se nejčastěji užívají substráty značené stabilními izotopy 13C nebo 2H k hodnocení metabolismu v patologických situacích. Moderní přístupem je kombinace mikrodialyzační metody a aplikace stabilních izotopů. V této práci jsou popsány analytické metody pro stanovení glukosy a laktátu v mikrodialyzátu. Vzhledem k užití látek, značených stabilními izotopy, byly tyto látky stanovovány metodou plynové chromatografie s detekcí hmotnostním spektrometrem (GC-MS). Cílem práce byl vývoj, stanovení parametrů, validace a optimalizace analytických metod se zaměřením na měření izotopového obohacení molekul vybraných analytů. Izotopové obohacení glukosy bylo stanovováno po její derivatizaci hydroxylamin hydrochloridem a acetanhydridem. Byl stanovován derivát aldonitril pentacetyl-D-glukosa. V práci popsaná metoda je výsledkem optimalizace času a teploty derivatizace vzorků mikrodialyzátů a chromatografických podmínek. Získaná data byla vyhodnocena softwarem Chemstation a statistickým softwarem SigmaStat. Správnost byla ověřena metodou standardního přídavku a byla stanovena 1,48%, přesnost byla stanovena opakovaným měřením reálného vzorku - variační koeficient byl 2,51%. Parametry lineární regrese pro koncentrace 0,5 {--} 15 mmol/l byly za daných podmínek s regresním koeficientem (R2) 0,9997 a rovnice regrese y = -0,0185 + 0,142x. Běžně je glukosa pro stanovení plynovou chromatografii derivatizována pouze acetanhydridem, který však při použití kapilární kolony CP-Sil 8 CB-MS (60 m x 0,32 mm) poskytuje interferenci v chromatografickém záznamu - dvojitý pík pravděpodobně vzniklých izomerů pentacetyl-glukosy, proto bylo nutno derivatizovat aldehydickou skupinu glukosy nejprve hydroxylamin hydrochloridem. Výsledná metoda vykazuje vhodné parametry pro užití v analýze mikrodialyzačních vzorků. Laktát byl stanovován derivatizací dimethoxypropanem, propylaminem a dále heptafluorobutyranhydridem za vzniku derivátu L-lactin-n-propylamidheptafluorobutyrátu. Byly stanoveny tyto parametry {--} správnost 3,25%, přesnost 3,15%, parametry lineární regrese pro koncentrace v rozmezí 0,5 {--} 10 mmol/l byly za daných podmínek R2 = 0,999 a rovnice regrese y = 0,215 + 1,039x. Tato poměrně složitá derivatizační metoda byla převzata ze spolupracujícího pracoviště na Univerzitě v Lausanne a její parametry byly porovnávány s jednodušší metodou derivatizace pomocí N-(butyl-dimethyl-silyl)-2,2,2-trifluoro-N-methyl-acetamidem. Vzniklý derivát di(tert-butyldimethylsilyl) laktátu byl stanovován metodou GC-MS. Přesnost byla 3,02%, správnost 3,8%, parametry lineární regrese R2 = 0,999, regresní rovnice y = -0,0809 + 0,792x. Prezentované metody byly využity v pilotní studii mikrodialýzy svalu a jater potkanů v různých metabolických situacích. V součastné době jsou metody využívány v klinické studii na pacientech trpících diabetem mellitem 1. typu a rozšířily spektrum metod prováděných laboratoří Kliniky gerontologické a metabolické FNHK.
|
host ::
RSS.