|
Comparison of TEM sample preparation methods for immunogold labeling
GRECHHAMER, Christian
The tracking of antigens in biological samples can be achieved by labeling them with gold-gonjugated antibodies (immunogold labeling). This thesis gives an overview of several sample preparation methods for TEM and investigates their effects on the binding efficiency of antibodies to certain antigens. For this reason, protein samples were processed according to four different protocols, cut into ultra-thin sections and labeled with primary and secondary antibodies. The micrographs, taken during observation with a TEM, were analysed quantitatively and the obtained data was statistically evaluated.
|
|
Příprava a charakterizace nanočástic pro in vitro buňečné studie
Hladík, Martin ; Černoch, Peter (vedoucí práce) ; Pilař, Jan (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá přípravou, metodami charakterizace a in vitro zobrazováním nanočástic s velký potenciál pro lékařskou diagnostiku. Klíčovou roli v této práci zaujímají nanočástice tvořené jádrem z wolframanu vápenatého, CaWO4, pokryté přírodním polysacharidem dohromady sloužící jako vhodný model kontrastní látky pro buněčné zobrazovací techniky. Přirozené vlastnosti CaWO4, jako je pohlcování rentgenové záření, přirozené fluorescenční schopnosti a možnosti dopování fluorescenčně aktivními lanthanoidy, vytváří z nanočástic vhodné kandidáty na pozici kontrastních činidel pro zobrazovací metody v diagnostice onkologických onemocnění. Navíc pokrytím anorganického jádra přírodním polysacharidem dosahují nanočástice požadované velikosti a možnosti aktivního cílení se specifickými nebo nespecifickými interakcemi s buněčnou membránou, které jsou rozhodujícími faktory při in vitro buněčných studiích. Byla nalezena nejvhodnější syntéza jak dopovaného tak i nedopovaného jádra tohoto modelu dosahující tvorby sférických částic koloidních rozměrů. Dopování bylo realizováno červeně fluoreskujícím trojmocným europiem, Eu3+ , a zeleně fluoreskujícím trojmocným terbiem, Tb3+ , a ani jeden z těchto dopantů neovlivnil původní krystalickou strukturu CaWO4. V další etapě byly tyto fluorescenční jádra...
|
|
Electron microscopy study of nanostructured thin film catalysts for micro-fuel cell application
Lavková, Jaroslava ; Matolínová, Iva (vedoucí práce) ; Ruterana, Pierre (oponent) ; Šubrt, Jan (oponent)
Předložená dizertační práce se zabývá studiem nových katalyzátorů na bázi kov-oxid vhodných pro použití v palivových článcích na straně anody. Platinou dopovaný oxid ceru připravený magnetronovým naprašováním ve formě tenkých vrstev na uhlíkových mezivrstvách nesených křemíkovým substrátem byl zkoumán prostřednictvím mikroskopických a spektroskopických metod. Vliv složení uhlíkového nosiče (a-C a CNx filmy), depozičního času CeOx vrstvy a dalších depozičních parametrů, např. depoziční rychlosti, složení pracovní atmosféry a Pt koncentrace na morfologii Pt-CeOx vrstev byl studován převážně pomocí transmisní elektronové mikroskopie (TEM). Získané výsledky ukazují, že vhodnou kombinací depozičních podmínek jsme schopni vyladit výslednou morfologii a kompozici katalyzátoru. Složení uhlíkových filmů a Pt-CeOx vrstev bylo studováno spektroskopickými technikami - energiově-disperzní spektroskopií (EDX), spektroskopií charakteristických ztrát elektronů (EELS) a rentgenovou fotoelektronovou spektroskopií (XPS). Takto připravené porézní struktury vrstev Pt-CeOx jsou slibným katalytickým materiálem na straně anody pro reálné aplikace v palivových článcích. Klíčové slova: cer oxid, platina, palivové články, magnetronové naprašování, transmisní elektronový mikroskop
|
|
Electron cryo-microscopy techniques in biological research and nanotechnologies
Mistríková, Veronika ; Bednár, Jan (vedoucí práce) ; Nebesářová, Jana (oponent) ; Benada, Oldřich (oponent)
Příprava biologických vzorků pro transmisní elektronovou mikroskopii není triviální úkol. Vzorky musí odolat vakuu přítomném v mikroskopu, a proto je často nutné uplatnit nefyziologické postupy při jejich zpracování. Tyto postupy obvykle zahrnují fixaci na bázi aldehydů, nahrazení vody alkoholem (t.j. dehydrataci/substituci), a zalití do pryskyřice, která vytváří podporu pro následnou přípravu tenkých řezů, které pak mohou být vloženy do mikroskopu. V posledním desetiletí získala dominantní postavení v oblasti výzkumu buněčné biologie metoda kryo-fixace (vitrifikace) za pomoci ultrarychlého vysokotlakého zmrazování a následná kryo-substituce a zalití vzorků do pryskyřice při nízkých teplotách. Tímto způsobem byli úspěšně vitrifikovány různé biologické vzorky s tloušťkou až několik stovek mikrometrů do stavu, který byl srovnatelný s jejich in vivo strukturou. Kryo-fixace izolovaných biologických objektů (s omezenou tloušťkou do několika mikrometrů) je možná i v tenké vrstvě vitrifikované vody za pomoci imerzní kryo-fixace při normálním tlaku. V kombinaci s kryo-elektronovou mikroskopií se tato metoda stala nejefektivnejším a základním principem pro tvorbu elektron kryo-mikroskopických obrázků plně hydratovaných vzorků s velmi vysokým rozlišením na úrovni několika desetin nanometrů. Obě tyto metody...
|
|
Contributions to Volatile Compound Generation of Arsenic, Silver and Gold by Tetrahydroborate Reaction for Atomic Absorption Spectrometry
Musil, Stanislav ; Rychlovský, Petr (vedoucí práce) ; Kanický, Viktor (oponent) ; Spěváčková, Věra (oponent)
(CZ) Předložená disertační práce shrnuje výsledky obsažené v pěti původních vědeckých článcích, které byly publikovány v prestižních mezinárodních časopisech v oboru analytické chemie a atomové spektrometrie. Konkrétně se práce věnuje rozvoji metody generování těkavých sloučenin reakcí s tetrahydroboratem a detekcí atomovou absorpční spektrometrií v křemenném multiatomizátoru. Práce může být tematicky rozdělena do dvou částí - speciační analýza arsenu založená na generování hydridů s kolekcí a separací v kryogenní pasti a generování těkavých forem přechodných kovů. V prvním tematickém okruhu byla studována předredukce pětimocných anorganických a methylovaných sloučenin arsenu. Bylo vyvinuto jednoduché uspořádání on-line předredukce pomocí kyseliny thioglykolové, které bylo spojeno se stávajícím hydridovým generátorem, a tento systém byl ověřen pro použití na speciační analýzu arsenu ve vzorcích lidské moče. Dále byla ve stejné metodě testována možnost sušení plynné fáze od vodní páry z důvodu možného ucpávání kryogenní pasti či snížení vlivu vodní páry na stabilitu přístrojové základní linie. U nafionové sušicí trubice, která se dosud běžně používá v analytické atomové spektrometrii, byly pozorovány významné ztráty těkavých methylovaných arsanů. Takové chování může vést při stanovení metodami,...
|
|
Komicelizace polystyren-b-polyakrylové kyseliny s nízkomolekulárními surfaktanty
Paloncýová, Markéta ; Matějíček, Pavel (oponent) ; Štěpánek, Miroslav (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá studiem vlivu nízkomolekulárních iontových surfaktantů dodecylsulfátu sodného (SDS) a hexadecyltrimethylammonium bromidu (HTAB) na asociační chování blokového kopolymeru polystyren-b-polyakrylové kyseliny (PS-b-PAA) v alkalických vodných roztocích. Připravené polymerní nanočástice byly charakterizovány pomocí statického a dynamického rozptylu světla, transmisní elektronové mikroskopie a 1 H NMR spektroskopie. Bylo zjištěno, že oba surfaktanty interagují pouze s polyakrylátovými bloky a jejich přítomnost v systému vede ke zhoršení rozpustnosti kopolymeru, která se projevuje tvorbou velkých micelárních agregátů a srážením komplexu polymer-surfaktant.
|
|
Segmentace karbonových nanokuželů v TEM obrazech pomocí zobecněné Houghovy transformace
Sladký, Vladimír ; Odstrčilík, Jan (oponent) ; Walek, Petr (vedoucí práce)
Bakalářská práce se zabývá problematikou automatické detekce karbonových nanostruktur v TEM obrazech pomocí zobecněné Houghovy transformace. Je zde popsána teorie Houghovy transformace obrazu za účelem detekce analyticky popsatelných i obecných struktur. Dle charakteristiky TEM obrazů karbonových nanostruktur jsou vytvořeny syntetické testovací obrazy, které jsou předzpracovány kombinací morfologických operací a prahování s globálním prahem. Je navržen algoritmus Houghovy transformace, který detekuje nanokužely v umělých obrazech. Úspěšnost a přesnost detekce je testována v závislosti na parametrech použitých při vytváření umělých obrazů nebo úrovni předzpracování.
|
|
Porovnání mikroskopických diagnostických metod
Veselý, Jakub ; Tihlaříková, Eva (oponent) ; Čudek, Pavel (vedoucí práce)
Tato práce se zabývá popisem a porovnáním diagnostických metod transmisní elektronové mikroskopie, rastrovací elektronové mikroskopie a mikroskopie atomárních sil. V úvodu práce je uveden popis jednotlivých diagnostických metod. Následuje experimentální část zabývající se diagnostikou vzorku feritické chromové oceli metodami rastrovací elektronové mikroskopie, mikroskopie atomárních sil, transmisní elektronové mikroskopie a vyhodnocením a interpretací naměřených výsledků. V závěru práce je uvedeno srovnání, výhody a nevýhody použitých diagnostických metod.
|
|
Changes in dislocation substructure of S235JR steel during fatigue loading
Jandová, D. ; Gajdoš, Lubomír ; Šperl, Martin ; Kaiser, J.
Changes in dislocation substructure were studied in normalized and annealed S235JR steel in relation to the number of symmetrical reversed stress cycles with the amplitude σa = 242 MPa and corresponding mean life Nf = 17,950 cycles. The microstructure of the steel consisted of ferrite with a small amount of pearlite. The substructure was observed in as received condition and after application of various relative numbers of cycles n/Nf, these being 0.25, 0.50 and 0.75. An irregular dislocation net occurred in the virgin specimen, however, during cyclic loading the dislocations started to accumulate gradually in slip bands and to form a cell substructure in grains of favourable crystallographic orientations. Total dislocation density, dislocation density in slip bands and inter-band distance were measured using transmission electron microscopy (TEM). The total dislocation density was found to slightly decrease and the density in slip bands to increase with increasing number of cycles. The results concerning the dislocation density were compared with changes in the microplastic limit (MPL) which were determined by the measurement of the inductance of the “specimen - coil” system. They consisted in a rapid initial decrease at the first stage of the fatigue process and in a gradual increase during the major part of the life. These changes can be interpreted on the basis of changes in dislocation density as was verified independently by X-ray diffraction and nanoindentation tests. On the basis of the measurement of dislocation density by TEM it appears that changes in MPL can be connected with the dislocation density in slip bands rather than with the total dislocation density.
|
| |