|
Buněčná terapie na zvířecích modelech- preklinické studie
Juhásová, Jana ; Motlík, Jan (vedoucí práce) ; Grim, Miloš (oponent) ; Jendelová, Pavla (oponent)
Pokrok v buněčné terapii se může rozvíjet jedině s použitím vhodných experimentálních modelů. Pro klinické využití nových léčebných postupů získaných ze studií na laboratorních zvířatech je nutné ověření na velkém zvířeti. Jedním z vhodných a lékařskou obcí uznaných preklinických zvířecích modelů je bezpochyby miniaturní prase, které je fyziologicky a rozměrově blízké člověku. Tato dizertační práce proto představuje přehled našich experimentálních studií týkajících se možného využití mezenchymových a nervových kmenových buněk pro léčbu onemocnění postihujících pohybový aparát a nervovou tkáň u lidí nebo zvířat. V první části dizertační práce je stručnou formou popsaná současná problematika buněčné terapie a zvířecích modelů, mezenchymových buněk případně jejich kombinace s novými typy nosičů, neurogeneze, nervové kmenové buňky a jejich potenciální použití v terapii poškozené míchy. Druhá část práce je zaměřena na přehled vytyčených cílů a metodik jakými jsme je chtěli dosáhnout. Třetí část byla věnována jednotlivým publikacím. Naše experimenty uskutečněné na králících s iatrogenním poškozením růstových plotének, které měly napodobit podmínky vzniku valgózních deformit u rostoucích kostí v klinické praxi, poukázaly na pozitivní preventivní a terapeutické účinky nových typů nosičů osazených...
|
|
Účinok vybraných seskviterpénov na antioxidačné enzýmy v diferencovanej bunkovej línii Caco-2
Verešová, Erika ; Svobodová, Hana (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Erika Verešová Konzultant: PharmDr. Hana Bártíková, Ph.D. Názov rigoróznej práce: Účinok vybraných seskviterpénov na antioxidačné enzýmy v diferencovanej bunkovej línii Caco-2 Onemocnenie s názvom rakovina sa neustále šíri naprieč populáciou. Je moderným trendom siahať čoraz častejšie po rôznych bylinných potravinových doplnkoch za účelom upevniť, či prinavrátiť si svoje zdravie. Rokmi užívaná rastlina, Myrica rubra, zaujíma pre svoje účinky aj mnohých vedcov. Seskviterpény z tejto rastliny sme využili aj my v našom výskume za účelom zistenia ich účinkov na hladinu antioxidačných enzýmov v diferencovanej bunkovej línii Caco-2. Caco-2 je línia nádorových buniek črevného epitelu so zachovanými vlastnosťami zdravých buniek., vďaka čomu sa používajú ako podklad pre testovanie látok a ich účinkov na nenádorové bunky. Bunky sme inkubovali po dobu 24 a 48 hodín so seskviterpénmi s koncentráciou 25µg/ml. Na výskum sme použili siličnú zmes z Myrica rubra a vybrané jednotlivé seskviterpény α-humulén, β-karyofylén a trans-nerolidol. Z antioxidačných enzýmov sme stanovili enzýmy glutation-S-transferázu, glutationreduktázu, glutationperoxidázu, katalázu a superoxiddismutázu. Výsledky našich pokusov potvrdili bezpečnosť...
|
|
Homeostáze kationtů alkalických kovů patogenních kvasinek rodu Candida
Elicharová, Hana ; Sychrová, Hana (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent) ; Půta, František (oponent)
Kvasinky rodu Candida jsou oportunní patogeny schopné vyvolat závažné systémové infekce u imunokompromitovaných pacientů. Virulence jednotlivých druhů kan- did závisí mimo jiné na jejich odolnosti vůči proměnlivosti vnějšího prostředí. Udržování homeostáze kationtů alkalických kovů, čili na jedné straně schopnost akumulovat dostatečné množství draselných iontů a na straně druhé úspěšně čelit jejich vysoké extracelulární koncentraci, je nezbytné pro růst a virulenci kandid. V rámci této práce jsme popsali souvislost mezi tolerancí k solím a rezistencí k flukonazolu u šesti druhů kandid a možný mechanismus této interakce. Flu- konazol hyperpolarizuje plasmatickou membránu buněk kandid a zvyšuje tak nespecifický vstup kationtů alkalických kovů do buňky, čímž výrazně narůstá citli- vost kandid k solím těchto kationtů. Popsaný mechanismus má obecnou platnost, nebot' flukonazol zvyšuje senzitivitu kandid i k dalším kladně nabitým látkám, které vstupují do buňky v závislosti na velikosti membránového potenciálu. Účinek flukonazolu na membránový potenciál a tedy i na vstup kationtů alkalických kovů do buňky obrátil naši pozornost k homeostázi draselných kationtů, jejichž relativně vysoká...
|
|
Studium vlivu selenu na proliferaci buněčných linií izolovaných z kolorektálního karcinomu
Žmolilová, Hana ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Šimůnek, Tomáš (oponent)
Selen je esenciální stopový prvek, který je součástí mnoha proteinů s funkcí katalytickou a strukturální. Antioxidační vlastnosti některých selenoproteinů, např. glutathion peroxidázy, mohou být zvláště důležité u ovlivnění karcinogeneze. Selen existuje v různých chemických formách - anorganických (seleničitany, selenany) a organických (selenoaminokyseliny, selenoproteiny). Biologická dostupnost a protirakovinná aktivita selenu závisí na koncentraci a chemické formě, ve které je aplikován. Ve své práci se zabývám vlivem L-Selenomethioninu a Se-methyl-L-selenocysteinu na proliferaci tří linií buněk kolorektálního karcinomu s různým nádorovým potenciálem (HT 29, SW 480, SW 620). K měření proliferace byla použita metoda BrdU - ELISA s chemiluminiscenční detekcí.
|
|
Addsessing On-Demand Assembly and Adaptation Using a Runtime Intentional Versioning Engine
Gergič, Jaroslav ; Tůma, Petr (vedoucí práce) ; Brada, Přemysl (oponent) ; Bešta, Miloslav (oponent)
The World Wide Web has been changing rapidly in the past few years due to the emergence and fast adoption of large variety of new internet-enabled devices: starting with web-enabled phones through converged appliances, combining a PDA and a cell phone, to specialized internet tablets and business productivity tools. This change is bringing many challenges into the process of designing and developing both the thin-client (web-based) and thick-client (device-hosted) applications and related services. The application and service providers are facing a trade-off between the number of platforms and devices they are able to support, representing the size of the potential market, and mounting costs tied to developing and supporting multiple variants of their applications. There are several ongoing efforts taking place at various standardization organizations and industry associations to address these issues. Some of the essential standards for specifying and transporting device capabilities have been available for several years now, but so far they have had only a limited impact on the way the actual applications and services are being designed and developed. This work is trying to identify and explain the shortcomings of the existing approaches and as a reaction proposes an application-centric framework designed...
|
|
Uplatnění imunohistochemických metod v diagnostice novotvarů
VELKOVÁ, Michala
Bakalářská práce se zabývala uplatněním imunohistochemických metod v diagnostice novotvarů. Jsou zde zmapovány indikace imunohistochemických metod podle jednotlivých oddělení Nemocnice Písek, a.s. V teoretické části popisuji poznatky o jednotlivých vyšetřovacích metodách. U imunohistochemie jsem se zaměřila na stanovení jednotlivých antigenů a použití vhodných primárních protilátek pro diagnostiku řady onemocnění, převážně novotvarů. Oddělení patologicko-anatomické má k dispozici 20 primárních protilátek. V praktické části porovnávám konvenčního barvení a imunohistochemické metody s konvenčním barvením a speciálními barvícími metodami v histologii pro stanovení diagnózy novotvarů. Hematoxylin eosin slouží k odlišení základních buněčných součástí. Selektivní barvení umožňuje barevné odlišení různých tkáňových komponent. Pomocí imunohistochemie se prokazuje přítomnost určitých tkáňových antigenů díky protilátkové reakci s navázanými chemickými sloučeninami. Toto porovnání jsem aplikovala při diferenciální diagnostice maligních melanomů a myogenních novotvarů na Oddělení patologicko-anatomickém, Nemocnice Písek, a.s. U stanovení maligních melanomů byl prvotně vzorek histologicky zpracován a obarven základním barvením Hematoxylin eosin. Druhotně jsem použila argentafinní reakce na průkaz pigmentu melaninu a imunohistochemické barvení antigenu HMB 45 pomocí monoklonální myší protilátky proti HMB 45 od firmy Dako a proteinu S 100 pomocí polyklonální králičí protilátky proti S100 od firmy Dako. Takto bylo vyšetřeno 14 vzorků od pacientů s maligním melanomem. HMB 45 se barvilo pozitivně u 12 vzorků z celkových 14. Monoklonální protilátka proti HMB 45 je pro maligní melanom dosti specifická. S 100 protein byl detekován ve všech tkáňových vzorcích. Polyklonální protilátka proti S 100 vykazuje vyšší senzitivitu, není však příliš specifická. Spíše se používá k odlišení neuroektodermálních a nonneuroektodermálních lézí. Melanin byl prokázán u 11 tkáňových vzorků. Průkaz melaninu je též nespecifický a komplikovaný. Argentafinní reakce vykazuje zbarvení i u jiných látek obsažených v cytoplazmě jako např. lipofuscin, proto je nutné k diagnostice melanomu použít i jiné metody např. imunohistochemii. V diagnostice myogenních novotvarů se použilo základní barevní Hematoxylin eosin a následně jsem imunohistochemicky stanovovala hladkosvalový aktin a desmin pomocí monoklonálních myších protilátek od firmy Dako a přehledné barvení Hematoxylin van Gieson, které se využívá v menší míře než v minulosti. Celkem se vyšetřilo 94 myogenních novotvarů. 72 novotvarů obarvených Hematoxylinem van Giesonem vykazovalo pozitivní barevnou reakci svaloviny a 22 novotvarů slabou barevnou reakci. Hladkosvalový aktin a desmin byl imunohistochemicky detekován u 92 vzorků. Hlavním problémem v barvení Hematoxylin van Gieson zůstává menší specificita a někdy i nejednoznačná diferencovatelnost barevných odstínů ve vlastním preparátu znesnadňující až znemožňující v některých případech spolehlivé stanovení diagnózy. Z tohoto důvodu je upřednostňován imunohistochemický průkaz hladkosvalového aktinu a desminu (mimo jiných) jako klíčových parametrů. S výhodou lze pak využít pozitivní protilátkové reakce s hladkosvalovým aktinem u myoepitelií při pátrání po eventuální invazivitě především k odlišení in situ a mikroinvazivních tumorů ve žlazových orgánech. V diferenciální diagnostice tumorů myogenního původu se v současné době upřednostňují před speciálním barvením imunohistochemické metody pro vysokou míru senzitivity i specificity, stejně jako v diferenciální diagnostice maligního melanomu. V kombinaci se pak oba přístupy dobře doplňují a poskytují již poměrně vysokou míru jistoty při určování původu buňky.
|
|
Posouzení diferenciálního rozpočtu leukocytů na automatickém analyzátoru a mikroskopicky
BAMBULOVÁ, Iva
Vyhodnocení krevního obrazu s diferenciálním rozpočtem leukocytů patří k základním hematologickým vyšetřením. Z diagnostického hlediska je informace o přesném počtu leukocytů a jejich procentuálním zastoupení v krvi pacienta velmi cenná, tak jako i pro řady informací o efektu léčby chorobných stavů. Ve své bakalářské práci se věnuji mikroskopickému a přístrojovému vyšetření diferenciálního rozpočtu leukocytů a jejich srovnání z hlediska náročnosti provedení a získání co nejpřesnějších výsledků. V dnešní době se spolu s rozvojem vědy a techniky využívají ke stanovení diferenciálního rozpočtu leukocytů moderní hematologické analyzátory, ovšem manuální stanovení pomocí mikroskopu zůstává i nadále základem dobré práce hematologické laboratoře. Cílem každého laboratorního stanovení je produkovat přesné výsledky pro klinické použití. Analýzy jsou většinou automatické a mezi jejich přednosti patří především rychlejší analýza, přesnost, spolehlivost a potřeba malého množství vzorku. Hlavními cíly mé bakalářské práce je vyhodnocení rozdílů za použití dvou různých metod, mikroskopické a přístrojové. Bakalářská práce je již tradičně rozdělena na část teoretickou a praktickou. V teoretické části bakalářské práce je vysvětlen význam diferenciální rozpočet leukocytů, podrobným způsobem je zde popsána morfologie jednotlivých typů leukocytů. Zmínila jsem se o nenádorových a nádorových změnách v počtu leukocytů. V neposlední řadě je zde uveden přehled laboratorních metod, které se používají pro vyšetření krevního obrazu v rutinní hematologické laboratoři. Ke stanovení diferenciálního rozpočtu leukocytů se využívá metoda optická, metoda elektrické impedance, cytochemický průkaz či digitální morfologie. V praktické části práce je popsán metodický postup vyšetření diferenciálního rozpočtu leukocytů, který jsem v rámci této práce použila. Při mikroskopickém stanovení jsem vytvořila krevní nátěr, který jsem obarvila dle návodu. Preparáty se prohlíží za použití imerzního oleje pod světelným mikroskopem. K záznamu jednotlivých typů leukocytů se používají záznamové přístroje ? leukomaty. Automatické stanovení diferenciálního rozpočtu leukocytů jsem prováděla na 5ti - populačním hematologickém analyzátoru Sysmex XE - 2100, založeném na principu průtokové cytometrie s možností měření vzorků z podavače uzavřeným způsobem nebo s otevřeným způsobem měření. Vyšetření diferenciálních rozpočtů leukocytů jsem realizovala v biochemicko - hematologické laboratoři synlab czech s.r.o v Českých Budějovicích. Zde jsem vyšetřila pod odborným dohledem 100 pacientských náhodně vybraných vzorků venózní krve, u kterých jsem porovnávala diferenciální rozpočty leukocytů a rozdíly mezi metodami. Vzorky jsem vyšetřila v měsících duben, květen roku 2012. Výsledky získané při mikroskopickém vyšetření a naměřené pomocí analyzátoru byly statisticky zpracovány do přehledných tabulek a grafů v počítačovém programu. V grafickém znázornění porovnávám počty buněk diferenciálního rozpočtu ve 100 vzorcích na analyzátoru a pod mikroskopem. Stanovila jsem hypotézu, zda budou počty mikroskopických diferenciálů stejné jako počty od automatického analyzátoru. Vlastním měřením byly získány laboratorní výsledky, které byly po konzultaci s vedoucím práce interpretovány. Na základě výsledků jsem hypotézu zamítla. Vlastním laboratorním vyšetřením bylo prokázáno, že klasické mikroskopické hodnocení má nepostradatelný význam při analýze patologických buněk. Záleží také na zkušenostech laboratorního pracovníka. K přednostem hematologického analyzátoru patří především rychlejší analýza, přesnost a potřeba malého množství biologického vzorku. Během praktické části bakalářské práce jsem získala praktické dovednosti při práci s biologickým materiálem a osvojila jsem si principy laboratorních metod. Výsledky mé práce lze využít obecně v klinických laboratořích při posuzování výhod, nevýhod a souvislostí mezi jednotlivými sledovanými analytickými metodami.
|
|
Diagnostika infekce cévní protézy pomocí hybridní metody FDG-PET/CT
Špaček, Miroslav ; Bělohlávek, Otakar (vedoucí práce) ; Vojáček, Jan (oponent) ; Gregor, Zdeněk (oponent)
Cíl práce: Infekce cévní protézy je jednou z nejzávažnějších komplikací v kardiovaskulární chirurgii. Standardně užívané diagnostické metody často selhávají zejména v případě nízce virulentní infekce cévní protézy a nalezení vhodné diagnostické modality je tedy stále výzvou. Cílem práce je vyhodnocení citlivosti nové hybridní diagnostické modality FDG-PET/CT v této indikaci. Materiál a metodika: Sedmdesát šest pacientů, z toho 52 mužů a 24 žen, nositelů 96 cévních protéz, podstoupilo kontrastní FDG-PET/CT vyšetření pro podezření na nízce virulentní infekci cévní protézy, 16 měsíců (1-33) po provedené tepenné rekonstrukci. Analyzované parametry PET byly: vizuálně posouzené fokální a difuzní uptake FDG (negativní-mírný- intenzivní) a poměrné hodnoty maximální intensity FDG uptake v oblasti cévní náhrady vztažené k referenční oblasti suprarenální aorty. K posuzovaným CT parametrům patří transaxiální plocha infiltrátu, iritace ohraničení ložiska předpokládané infekce a přítomnost pseudoaneurysmatu. Všechna data jsme porovnali se zlatým standardem. Za pozitivní byly považováni reoperovaní s nevhojenou protézou či její zjevnou makroskopickou infekcí bez ohledu na výsledek kultivace. Za negativní bylo u reoperovaných považováno vhojení protézy. U nereoperovaných považován klinicky stabilní follow-up >6 měsíců....
|
|
Zvýšení účinnosti elektrochemického generování těkavé formy kadmia pro stopovou analýzu metodou AAS
Růžková, Pavla ; Rychlovský, Petr (vedoucí práce) ; Červený, Václav (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo zvýšení účinnosti elektrochemického generování těkavé sloučeniny kadmia pro potřeby atomových spektrometrických metod. Zvýšením účinnosti elektrochemického generování těkavé sloučeniny vede k celkovému zvýšení citlivosti stanovení a je možné dosáhnout nižších hodnot meze detekce a meze stanovitelnosti. Jednou z možností zvýšení celkové účinnosti je minimalizování transportních ztrát těkavé sloučeniny. Další podstatnou možností je spojení techniky generování těkavé sloučeniny s "in-situ záchytem a (atomizací) v grafitové kyvetě atomového absorpčního spektrometru. Klíčová slova: atomová absorpční spektrometrie, elektrochemické generování těkavých sloučenin, účinnost generování, elektrolytická průtoková cela, křemenný atomizátor, elektrotermický atomizátor, záchyt "in-situ", kadmium
|
|
Prevence karcinomu hrdla děložního
Kafková, Simona ; Šafář, Petr (vedoucí práce)
Karcinom hrdla děložního vzniká v důsledku proliferace nádorově transformovaných buněk děložního hrdla. U více než 99 % se na etologii podílí vysoce rizikové typy lidského papillomaviru (HPV), který je nejčastějším virovým sexuálně přenosným agens. Většina HPV infekcí má pouze přechodný charakter a lidský organismus jej dokáže přirozenými imunitními mechanismy odstranit. Perzistující infekce však může vézt k maligní transformaci a nekontrolovatelné proliferaci buněk děložního hrdla. Interval od infikování epitelu papillomaviry ke vzniku maligního onemocnění bývá delší než 10 let. Prevence karcinomu hrdla děložního zahrnuje ochranu proti infekci lidským papillomavirem a včasnou diagnostiku a léčbu prekanceróz. Velký průlom v ochraně proti papillomavirové infekci znamenalo zavedení vakcinace proti nejčastějším onkogenním typům HPV. Přesto však základním opatřením zůstává včasná diagnostika prekanceróz formou celoplošného screeningu. Ten se musí i nadále vykonávat u žen nevakcinovaných, ale i u žen, které očkování podstoupily, neboť doposud vyrobené vakcíny chrání jen proti 80 % onkogenních genotypů HPV. Již léta používanou metodou screeningu je onkologická cytologie. Protože abnormality epitelu v počátečních stádiích nedoprovází žádné klinické ani anamnestické příznaky, cytodiagnostika je jedinou možností,...
|
host ::
