|
|
Biotransformace fenolických látek enzymovými systémy kvasinky Candida tropicalis a bakterie Comamonas testosteroni
Vilímková, Lenka ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Entlicher, Gustav (oponent) ; Mareš, Jaroslav (oponent)
Kvasinka Candida tropicalis a bakterie Comamonas testosteroni se vyznačují schopností využívat fenol jako jediný zdroj uhlíku a energie. V naší laboratoři se zabýváme zejména studiem cytoplasmatických enzymů zodpovědných za první a druhý krok odbourání fenolu: NADPH-dependentní fenolhydroxylasy C. tropicalis i C. testosteroni a katechol 1,2- dioxygenasy C. tropicalis. Cílem naší práce je izolovat a částečně charakterizovat tyto enzymy. Fenolhydroxylasa C. tropicalis byla purifikována použitím následující kombinace metod: chromatografie a rechromatografie cytosolárních proteinů na DEAE Sepharose, frakční precipitace polyethylenglykolem 6000 a gelové permeační chromatografie na Sephacrylu S-300. Extracelulární fenolhydroxylasa C. testosteroni byla získána frakční precipitací kultivačního média polyethylenglykolem 6000 a gelovou permeační chromatografií na 4B Sepharose a Sephacrylu S-300. Katecholdioxygenasa byla z cytosolu C. tropicalis izolována za použití metod: chromatografie a rechromatografie cytosolárních proteinů na DEAE Sepharose, lyofilizace enzymového preparátu a gelové permeační chromatografie na Sephadexu G-100 Enzymová aktivita byla měřena buď pomocí HPLC nebo spektrofotometricky. Čistota enzymů byla sledována elektroforézou SDS-PAGE. Molekulová hmotnost enzymů byla určena pomocí...
|
|
|
Asymetrická biotransformace beta-tetralonů na příslušné alkoholy
Andrejch, Jan ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Martínek, Václav (oponent)
Příprava čistých enantiomerů je v současnosti klíčovou součástí chemické syntézy mnoha průmyslově a farmaceuticky významných látek a trendem posledních let je postupný odklon od tradiční chemické syntézy k využívání biotransformací. Biotransformace znamená využívání izolovaných enzymů, celých enzymových systémů nebo celých buněk ke katalyzování chemických reakcí a oproti chemické syntéze přináší řadu výhod. V této práci byla prověřována biotransformační aktivita kvasinkových kmenů Saccharomyces uvarum K8, Saccharomyces cerevisiae K12, Torulopsis azyma K43, Torulopsis sphaerica K46 a Candida tropicalis K49, K51 a K52 při katalýze redukce 6-bromo-2-tetralonu, 7-hydroxy-2-tetralonu a 7-methoxy-2-tetralonu na příslušné alkoholy, což je významný reakční krok při syntéze některých léčiv. Byly nalezeny vhodné reakční podmínky pro biotransformaci a zjištěno, že kmeny Saccharomyces uvarum K8 a Candida tropicalis K52 jsou schopny poskytovat 2-tetraloly s ee vyšším než 90% při současné 100% konverzi substrátu při čtyřhodinové biotransformaci.
|
|
|
Metabolismus Se přijímaného savčím organismem ve formě Se-obohacené Brassica napus
Žíla, Ondřej ; Čadková, Zuzana (vedoucí práce) ; Václav, Václav (oponent)
Cílem diplomové práce bylo zjistit, zda jsou jednotlivé Se-speciace v savčím organismu ovlivněné formou přijatého selenu. Selen je významný esenciální mikronutrient pro člověka i zvířata. Hraje významnou roli v antioxidační ochraně organismu a také při přeměně hormonů štítné žlázy. Při našem experimentu byli laboratorní potkani kmene Wistar rozděleni do tří skupin a bylo jim podáváno krmivo se zdrojem selenu v podobě sóji, seleničitanu sodného a extrahovaného řepkového šrotu. Během čtyřtýdenního experimentu byla pokusným zvířatům odebírána moč a po skončení pokusu také krevní sérum. Celkové obsahy selenu se měřily pomocí ICP-MS, zatímco jednotlivé Se-speciace v moči a séru pomocí HPLC spřažené s ICP-MS. Ve vyloučené moči byly identifikovány speciace methylselenocystein (MeSeCys), trimethylselenium (TMSe) a selenocukry 1 a 3. V krevním séru byly naměřeny speciace TMSe, seleničitan, selenan a selenocukr 1. U skupiny krmené seleničitanem sodným byly naměřeny obecně vyšší hodnoty ve vyloučené moči, což může být způsobeno celkově vyšším příjmem a také anorganickou formou selenu s nižší vstřebatelností. Skupiny, které obdržely selen z rostlinných zdrojů, přijaly hned několik Se-sloučenin a u nich naměřené celkové obsahy Se-speciací, ani dynamika vylučování, se příliš nelišily. Navíc u skupiny s řepkou byla naměřena speciace selenocukr 2, která se u ostatních skupin neobjevila. Při přijímání selenu z rostlinných zdrojů tedy probíhá v savčím organismu odlišná biotransformace než při příjmu minerální soli. Původní hypotézu, že zastoupení Se-speciací je ovlivněné formou selenu podávaného v krmivu, jsme našimi výsledky potvrdili. Jelikož skupina krmená řepkou vykazovala podobné výsledky jako skupina krmená standartním krmivem se sójou, mohl by extrahovaný řepkový šrot sloužit jako dobrý zdroj při výživě hospodářských zvířat.
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.