|
|
Asymetrická biotransformace beta-tetralonů na příslušné alkoholy
Andrejch, Jan ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Martínek, Václav (oponent)
Příprava čistých enantiomerů je v současnosti klíčovou součástí chemické syntézy mnoha průmyslově a farmaceuticky významných látek a trendem posledních let je postupný odklon od tradiční chemické syntézy k využívání biotransformací. Biotransformace znamená využívání izolovaných enzymů, celých enzymových systémů nebo celých buněk ke katalyzování chemických reakcí a oproti chemické syntéze přináší řadu výhod. V této práci byla prověřována biotransformační aktivita kvasinkových kmenů Saccharomyces uvarum K8, Saccharomyces cerevisiae K12, Torulopsis azyma K43, Torulopsis sphaerica K46 a Candida tropicalis K49, K51 a K52 při katalýze redukce 6-bromo-2-tetralonu, 7-hydroxy-2-tetralonu a 7-methoxy-2-tetralonu na příslušné alkoholy, což je významný reakční krok při syntéze některých léčiv. Byly nalezeny vhodné reakční podmínky pro biotransformaci a zjištěno, že kmeny Saccharomyces uvarum K8 a Candida tropicalis K52 jsou schopny poskytovat 2-tetraloly s ee vyšším než 90% při současné 100% konverzi substrátu při čtyřhodinové biotransformaci.
|
|
|
Značení T buněk bimodální kontrastní látkou pro studium mrtvice in vivo
Krijt, Matyáš ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Kříž, Jan (oponent)
Mrtvice je závažné mozkové poranění, které může mít za následek náhlou smrt nebo trvalé neurologické poškození. V současnosti je k dispozici jediná účinná léčba pomocí tkáňového aktivátoru plasminogenu. Jedním z nových potenciálních cílů léčby jsou T buňky. Ačkoliv mnohé studie přisuzují úlohou T buněk v patogenezi ischemické mozkové příhody, množství i časový průběh infiltrace všech podtypů T buněk do místa mozkové léze není zcela znám. Výzkum v této oblasti je limitován nedostatkem metod vhodných pro in vivo sledování buněk. Z tohoto důvodu bylo cílem této práce vytvořit metodu pro značení T buněk MRI kontrastní látkou za účelem sledování distribuce T buněk pomocí in vivo MRI u myší s indukovanou ischemií. T buňky byly izolovány z C57/BL6 myšího kmene ve dvoukrokovém izolačním protokolu pomocí gradientové centrifugace a magnetické separace s 97% výtěžkem. Izolované buňky byly značeny kontrastní látkou Molday ION Rhodamine B o koncentraci 100 μg Fe/mL. Úspěšnost značení po 17-ti hodinách inkubace byla vyšší než 99 %. Značené buňky byly kultivovány s CD3 a CD28 protilátkami. Viabilita značených T buněk byla 74 % v porovnání s 83 % viabilitou neznačených buněk. Označené T buňky byly zobrazeny pomocí fluorescenční mikroskopie a magnetické rezonance. Mrtvice u myší byla indukována okluzí střední...
|
|
|
Rozdíly v acetylaci histonů v normoxii a hypoxii
Čepek, Pavel ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
Histony a jejich N a C konce podléhají kovalentním modifikacím, které regulují transkripci genů. Mezi histonové modifikace patří methylace, ubikvitinylace, SUMOylace, ADP- ribosylace, fosforylace, prolinová izomerace, deiminace a acetylace. Acetylace histonů je regulována histonacetyltransferasami (HATs) a histondeacetylasami (HDACs). Rovnováha mezi acetylací/deacetylací histonů ovlivňuje kompaktnost chromatinu a podílí se na regulaci genové exprese. U řady lidských nádorů je acetylační rovnováha porušena a může přispívat k rozvoji maligních onemocnění. Inhibitory histondeacetylas (HDACi) umožňují tuto porušenou acetylační rovnováhu vyrovnávat. Jeden z těchto inhibitorů je kyselina valproová (VPA), již používaná k léčbě epilepsie. V několika studiích bylo prokázáno, že VPA vykazuje protinádorové účinky. U nádorových neuroblastomových linií byla zaznamenána např. snížená exprese n-myc onkoproteinu, inhibice buněčného růstu či angiogeneze. Ačkoliv je přesný mechanizmus účinku VPA na nádorové buněčné linie stále nejasný, za jeden z důležitých protinádorových účinků je povážována hyperacetylace histonů H3 a H4. V této práci je ukázáno, že kyselina valproová zvyšuje acetylaci histonů H3 a H4 v lidských neuroblastomových buněčných liniích UKF-NB-3 a SK-N-AS. Nejvyšší acetylace histonu H3 byla v hypoxii...
|
|
| |
|
| |
|
|
Fylogenetická analýza genů pro velké podjednotky dioxygenas Rieskeho typu v půdách kontaminovaných leteckým palivem
Ptáček, Jakub ; Bořek Dohalská, Lucie (vedoucí práce) ; Poljaková, Jitka (oponent)
Lokalita bývalého vojenského letiště Hradčany je jedním z míst s vysokou koncentrací organických polutantů v půdě v rámci České republiky. Hlavním nástrojem sanací probíhajících v této lokalitě v současné době je bioremediace. Jsou při ní využívány organismy přítomné v kontaminované půdě disponující degradačními metabolickými drahami pro dekontaminaci lokality in situ. Na rozmanitosti a hojnosti těchto drah, resp. na specifitě a aktivitě enzymů podílejících se na těchto drahách závisí účinnost bioremediace. Proto je hlavním cílem této práce analýza diversity bakterií v půdách kontaminovaných leteckým palivem na základě katabolických genů kódujících toluen/bifenylové dioxygenasy Rieskeho typu. Z půdní DNA byly selektivně získány sekvence kódující tyto geny pomocí hybridizace s oligonukleotidy vázanými na magnetické mikrokuličky. podjednotky těchto dioxygenas byly amplifikovány, analyzovány klonováním, restrikční analýzou a sekvenovány. Evoluční historie byla odvozena pomocí metod neighbor-joining a maximum likelihood. Diversita katabolických genů v půdě HRB z kontaminované a sanované lokality byla porovnána s diversitou ve stejné půdě použité v mesokosmu se simulovanou fytoremediací. Přes 98% sekvencí ze vzorku HRB patří do genové podrodiny toluen dioxygenas, jejíž nejbližší příbuzný gen kóduje enzym TodC1 z...
|
|
|
Antioxidační vlastnosti léčivých rostlin
Tupec, Michal ; Hýsková, Veronika (vedoucí práce) ; Poljaková, Jitka (oponent)
U rostlin se během evoluce vyvinuly velmi účinné mechanizmy likvidace škodlivých sloučenin, mezi něž se řádí např. reaktivní formy kyslíku (ROS). Tyto mechanizmy jsou založeny převážně na antioxidačních účincích kyseliny askorbové a glutathionu v úzké kooperaci se superoxiddismutasou, katalasou a rozličnými peroxidasami - velkou roli při eliminaci ROS rovněž hrají redukované koenzymy NADH a NADPH. V poslední době se však pozornost obrací od těchto klíčových sloučenin primárního metabolizmu k sekundárním metabolitům. Fenolické sloučeniny společně s některými terpeny a alkaloidy podle všeho také vykazují antioxidační účinky a zřejmě hrají v ži- votě rostliny nezastupitelnou úlohu - kromě antioxidačního působení jsou důležité také v boji proti patogenům a býložravcům, při lákání opylovačů nebo zmírňování účinků UV záření. Přírodní látky jsou zkoumány také ve vztahu k člověku - je známa celá řada účinků a mezi ty nejčastější patří antioxidační, protizánětlivé a protirakovinné. V rámci této práce byly získány extrakty převážně nízkomolekulárních látek ze 32 rostlin pomocí horké vody, 80%w vodného roztoku methanolu či prostým odšťav- něním. Extrakty byly podrobeny třem standardním testům antioxidační aktivity: dvěma stanovením antioxidační kapacity vztažené na ekvivalenty troloxu (TEAC) a stanovení...
|
|
|
Studium drah zodpovědných za rezistenci leukemických buněk na L-asparaginasu
Šimčíková, Markéta ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Poljaková, Jitka (oponent)
Akutní lymfoblastická leukemie (ALL) je nejčastější maligní onemocnění u dětí. Přesto- že je terapie ALL velmi úspěšná, relaps onemocnění postihuje 20-25 % dětí. Jedna z možných příčin relapsu je rezistence k léčivům. Léčba leukemie spočívá v kombino- vané chemoterapii, jejíž důležitou součástí je L-asparaginasa. Tento enzym přeměňu- je extracelulární asparagin na asparát a glutamin na glutamát. Jeho antagonistou je enzym asparagin synthetasa, který syntetizuje intracelulární asparagin. Specifický an- tileukemický účinek L-asparaginasy je vysvětlován nižší aktivitou asparagin syntheta- sy v leukemických buňkách v porovnání s buňkami zdravými. Nedostatek asparaginu a glutaminu vede k poškození proteosyntézy a navození apoptózy. Detailní mechanis- mus působení L-asparaginasy a příčiny vzniku rezistence však nebyly dosud objasněny. Tato bakalářská práce je součástí studia příčin rezistence leukemických buněk vůči L-asparaginase. Na modelu leukemické buněčné linie REH byla objevena delece del(5)(q34), která není přítomna u rezistentního klonu této linie. Předkládaná bakalář- ská práce je zaměřena na potvrzení rozdílné citlivosti leukemických buněk s delecí a bez ní k L-asparaginase. Metodou limitního ředění byly získány klony linie REH po- zitivní či negativní na studovanou deleci. U těchto klonů byla...
|
|
|
Srovnání vlastností buněčných linií rezistentních k ellipticinu, doxorubicinu a cisplatině
Černá, Tereza ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
6 Abstrakt Neuroblastom je nejčastější solidní extrakraniální nádor dětského věku. I přes veškeré pokroky v onkologické diagnostice a terapii je léčba některých forem neuroblastomu stále obtížná. Jednou z největších komplikací chemoterapie je vznik lékové rezistence. Tato práce se zabývá vlivem cytostatik na expresi vybraných proteinů, které se mohou podílet na chemorezistenci lidské neuroblastomové buněčné linie UKF-NB-4 na proteinové úrovni i na úrovni genové exprese. Senzitivní linie UKF-NB-4 a od ní odvozené rezistentní linie UKF-NB-4CDDP , UKF-NB-4DOXO a UKF-NB-4ELLI byly vystaveny působení cisplatiny, doxorubicinu nebo ellipticinu po dobu 24, 48 a 72 hodin. Metodou Western blot bylo prokázáno, že cytostatika cisplatina, doxorubicin nebo ellipticin podaná senzitivní neuroblastomové buněčné linii UKF-NB-4 v množstvích, která jsou přidávána do kultivačního média rezistentních neuroblastomových linií pro udržování rezistence, indukují po 72 hodinové kultivaci v této buněčné linii expresi proteinu p53 a zároveň snižují množství retinoblastomového proteinu pRb. Rozdíly v expresi proteinu RAS, cytochromů P450 1A1, 3A4 a cytochromu b5 nebyly prokázány. Změny v expresi studovaných proteinů u rezistentních linií UKF-NB-4CDDP , UKF-NB-4DOXO a UKF-NB-4ELLI kultivovaných s a bez přídavku daného cytostatika nejsou...
|
|
|
Účinky přírodních látek na viabilitu nádorových buněčných linií
Boleslavská, Barbora ; Poljaková, Jitka (vedoucí práce) ; Bořek Dohalská, Lucie (oponent)
Nádorová onemocnění jsou jedním z nejzávažnějších problémů současné medicíny a jejich incidence neustále stoupá. Navzdory výraznému rozvoji terapeutických metod v posledních letech jsou tato onemocnění stále velmi obtížně léčitelná. Předkládaná práce se zabývá sledováním účinků přírodních látek - epigalokatechin galátu, kofeinu, etanolového extraktu z Cannabis sativa, vodného extraktu z Origanum acutidens a vodného extraktu z Mentha piperita na lidskou neuroblastomovou buněčnou linii UKF-NB-4. První část práce se zabývá určením viability lidské neuroblastomové buněčné linie UKF-NB-4 vystavené působení testovaných látek. Dále je studován vliv těchto látek na buněčný cyklus, aktivitu kaspáz a schopnost vyvolat apoptosu. Detekce výše zmíněných charakteristik byla prováděna na buněčném analyzátoru MUSETM a na průtokovém cytometru. Následně byla pomocí metody Western blot sledována hladina proteinu p53 a retinoblastomového proteinu v buněčné linii UKF-NB-4 vystavené působení testovaných látek. Největší vliv měl na viabilitu a buněčný cyklus lidské neuroblastomové buněčné linie epigalokatechin galát. Jeho působením dochází ke snížení viability UKF-NB-4, ke snížení exprese retinoblastomového proteinu a k zadržení přechodu buněk z G0/G1 do S fáze buněčného cyklu. Z výsledků nevyplývá, že by epigalokatechin...
|
host ::
RSS.