|
|
Chemoenzymová synthesa antivirálních profarmak
Tupec, Michal ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Indra, Radek (oponent)
Lipasy našly široké uplatnění při výrobě potravin a v některých odvětvích průmyslu, později i v syntetické organické chemii, kde za velmi mírných podmínek katalyzují hydrolytické a esterifikační reakce v rámci chemie chránicích skupin či za účelem rozlišení enantiomerů. V této práci byla komerčně dostupná lipasa z bakterie Pseudomonas fluorescens imobilizována pomocí sol gelového procesu do organokřemičitých materiálů s propylovým, oktylovým nebo fenylovým substituentem. Nejvyšší hydrolytická aktivita byla zjištěna u enzymu na oktylovém nosiči. Imobilizované enzymy se mezi sebou lišily v hydrolytické aktivitě stanovené na různě dlouhých 4-nitrofenylesterech. Další experimenty ukázaly na poměrně dobrou pH stabilitu enzymů při inkubacích (pH 3 až 11) a dále také dobrou teplotní stabilitu v isooktanu (teploty až 100 řC). Většina organických rozpouštědel nemá výrazný vliv na aktivitu lipasy. Za použití modelové látky ze skupiny acyklických analogů nukleosidů - 9 (2',3' dihydroxypropyl)adeninu (DHPA) - byla provedena řada biokatalytických pokusů. Bylo např. zjištěno, že jako donory acylu jsou nejvhodnější vinylestery, že lipasa vykazuje preferenci k vinylesterům s delším acylem, že esterifikace DHPA nejrychleji probíhá v nepolárních rozpouštědlech a že je možná i v rozpouštědlech, v nichž je tato látka zcela...
|
|
|
Preparation of pharmaceutical formulations based on polymeric and lipid carriers
Kubačková, Jana ; Zbytovská, Jarmila (vedoucí práce) ; Panáček, Aleš (oponent) ; Štěpánek, František (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Jana Kubačková Školiteľ Assoc. Prof. Jarmila Zbytovská, Mgr., Dr. rer. nat. Konzultant PharmDr. Ondřej Holas, PhD. Názov dizertačnej práce Příprava farmaceutických formulací na bázi polymerních a lipidických nosičů Nanomedicína umožňuje aplikáciu nanonosičov, ktorých úlohou je podávanie liečiv s cieľom dosiahnutia na mieru prispôsobenej terapie. Úlohou nanonosičou je medzi inými aj umožniť riadené uvoľňovanie liečiva, miestne špecifickú distribúciu a ochranu účinnej látky. Z viacerých nanoplatforiem dostupných na distribúciu liečiva sa táto práca zameriava na biokompatibilné a biologicky odbúrateľné polyméry a lipidy. Tieto materiály boli formulované tak, aby bolo umožnené cielené intracelulárne dodanie, dodanie liečiva málo rozpustného vo vode a dodanie senzitívnej makromolekuly. V štúdii s biologicky odbúrateľným polymérnym nanomateriálom sme pracovali s experimentálnymi polymérmi kysliny poly(mliečnej-ko-glykolovej) (PLGA). Formulácie boli optimalizované na zacielenie do fagocytujúcich makrofágov, t.j. nanočastice s veľkosťou do 300 nm a negatívnym povrchovým nábojom. Na tento účel sa testovali dva lineárne a jeden rozvetvený PLGA polymér v kombinácii s jednou zo štyroch povrchovo...
|
|
|
Preparation of pharmaceutical formulations based on polymeric and lipid carriers
Kubačková, Jana ; Zbytovská, Jarmila (vedoucí práce) ; Panáček, Aleš (oponent) ; Štěpánek, František (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Katedra farmaceutické technologie Kandidát Mgr. Jana Kubačková Školiteľ Assoc. Prof. Jarmila Zbytovská, Mgr., Dr. rer. nat. Konzultant PharmDr. Ondřej Holas, PhD. Názov dizertačnej práce Příprava farmaceutických formulací na bázi polymerních a lipidických nosičů Nanomedicína umožňuje aplikáciu nanonosičov, ktorých úlohou je podávanie liečiv s cieľom dosiahnutia na mieru prispôsobenej terapie. Úlohou nanonosičou je medzi inými aj umožniť riadené uvoľňovanie liečiva, miestne špecifickú distribúciu a ochranu účinnej látky. Z viacerých nanoplatforiem dostupných na distribúciu liečiva sa táto práca zameriava na biokompatibilné a biologicky odbúrateľné polyméry a lipidy. Tieto materiály boli formulované tak, aby bolo umožnené cielené intracelulárne dodanie, dodanie liečiva málo rozpustného vo vode a dodanie senzitívnej makromolekuly. V štúdii s biologicky odbúrateľným polymérnym nanomateriálom sme pracovali s experimentálnymi polymérmi kysliny poly(mliečnej-ko-glykolovej) (PLGA). Formulácie boli optimalizované na zacielenie do fagocytujúcich makrofágov, t.j. nanočastice s veľkosťou do 300 nm a negatívnym povrchovým nábojom. Na tento účel sa testovali dva lineárne a jeden rozvetvený PLGA polymér v kombinácii s jednou zo štyroch povrchovo...
|
|
|
Tandemová hmotnostní spektrometrie sfingolipidů s aplikací pro metabolické studie a diagnostiku sfingolipidos
Kuchař, Ladislav
V posledních letech se hmotnostní spektrometrie (MS) stala dominantní technologií používanou při lipidomické analýze a silně ovlivnila výzkum a diagnostiku onemocnění lipidního metabolismu jako např. lysosomální střádavá onemocnění (LSD) charakterisovaná poruchami funkcí lysosomů. Soubor poruch lysosomální degradace sfingolipidů (SFL) přísluší ke skupině sfingolipidos. Tento stav má vážné až fatální klinické důsledky. Prvotním cílem práce bylo zavedení kvantitativní a kvalitativní analýzy SFL pro výzkum a diagnostiku LSD. Na jejím počátku bylo třeba připravit semisynthesou lipidní hmotnostně značené standardy pomocí imobilizované sfingolipid ceramid N-deacylasy. Zavedené metody kvantitativní analysy byly posléze použity k průkazu zvýšené exkrece močových SFL u LSD s charakteristickým střádáním v ledvinách. Vyhodnocení SFL vylučovaných močí prokázalo svůj význam při diferenciální diagnostice deficitu prosaposinu a saposinu B kdy rutinní enzymologie selhává. MS navíc umožňuje sledování jednotlivých molekulárních druhů SFL (isoforem), jenž vedlo ke zjištění, že u některých LSD se jejich profil v moči mění. To následně vedlo k vývoji nové screeningové metody v suchém vzorku moče založeném na vyhodnocování profilu isoforem. Další aplikací MS byla analýza pitevních vzorků tkání nebo buněk u nevyjasněných...
|
|
|
Vliv alkalického aktivátoru na imobilizaci kovů v alkalicky aktivované strusce
Bystrianska, Emília ; Kalina, Lukáš (oponent) ; Koplík, Jan (vedoucí práce)
V této práci byl zkoumán vliv alkalického aktivátoru na imobilizaci olova a mědi v alkalicky aktivované vysokopecní strusce. Bylo použito celkem pět aktivátorů, a to sodné vodní sklo, draselné vodní sklo, hydroxid sodný, hydroxid draselný a uhličitan sodný. Schopnost imobilizace Pb2+ a Cu2+ v matricích byla zjištěna na základě vyluhovacích testů podle ČSN EN 12457-4, přičemž koncentrace kovů ve výluzích byly stanoveny pomocí ICP-OES. Pro lepší pochopení způsobu imobilizace byly vybrané vzorky podrobeny analytickým metodám (FTIR, XRD, SEM, XPS). Bylo zjištěno, že míra imobilizace 1 hm.% Pb2+ a Cu2+ v AAS je velmi vysoká nezávisle na použitém typu alkalického aktivátoru.
|
|
|
Primer Extension Reaction at the Gold Electrode Surface
Vidláková, Pavlína ; Havran, Luděk ; Fojta, Miroslav
One option of covalent DNA labeling is incorporation of chemically modified nucleotides using corresponding deoxynucleotide triphosphates into DNA molecules using polymerase-catalyzed primer extension. Primer extension is usually performed in solution and then the product is analyzed, often after a suitable separation. In our study we tested the possibility to prepare oligonucleotides with enzymatically incorporated anthraquinone labeled nucleotides using primer extension on templates immobilize at a gold electrode surface.
|
|
|
Electrochemical Analysis of Chemically Modified DNA at Gold Electrodes
Vidláková, Pavlína ; Havran, Luděk ; Fojta, Miroslav
DNA labeling is used to increase sensitivity of its electrochemical detection. Covalently bound markers based on a complex of osmium tetroxide with 22-bipyridine(Os,bipy) is one of those frequently applied. Os bipy reacts with pyrimidines (mainly thymines) in single stranded regions of DNA, therefore it represents a useful marker for the analysis of DNA structure or labeling of hybridization probes . Another possibility of DNA labeling is the incorporation of chemically modified dNTPs into DNA molecules with using primer extension. DNA labeling in connection with voltammetry at gold electrodes has application potential in development of sensors for studying of DNA structure and interaction.
|
|
|
Přehled technik imobilizace proteinových makromolekul na polymerní nosiče
Badalcová, Helena ; Holas, Ondřej (vedoucí práce) ; Svačinová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické technologie Školitel: PharmDr. Ondřej Holas, Ph.D. Posluchač: Helena Badalcová Název diplomové práce: Přehled technik imobilizace proteinových makromolekul na polymerní nosiče Již od 70. let získávají imobilizované enzymy zájem a pozornost nejen vědeckých a laboratorních pracovníků, ale také průmyslových společností. Enzymy, jedinečné biokatalyzátory vynikající svou specifitou, šetrností k přírodě a schopností reagovat za mírných podmínek, totiž velmi snadno podléhají denaturaci či inhibici. S ohledem na mnohdy vysokou pořizovací cenu by jejich využití mohlo být často nevýhodné. Imobilizační techniky nabízí efektivní řešení tohoto problému a výrazně zjednodušují využití enzymů v průmyslu i výzkumu. Oproti volným formám vykazují imobilizované enzymy mimo jiné vyšší aktivitu, stabilitu a umožňují opakované použití i snadnější oddělení od produktů. V této práci je uveden přehled základních imobilizačních metod - prosté fyzikální adsorpce a kovalentní vazby na nosič, entrapmentu, enkapsulace a beznosičových technik využívajících cross-linking. Na závěr jsou nastíněny možné biomedicínské aplikace a také využití imobilizovaných enzymů v biosenzorech.
|
|
|
Vliv různých anionů na fixaci Cu v alkalicky aktivované strusce
Böhm, Petr ; Kotrla, Jan (oponent) ; Koplík, Jan (vedoucí práce)
Práce se zabývá fixací mědi ve vysokopecní strusce aktivované sodným vodním sklem a tím, jaký vliv mají na imobilizaci různé anionty (síran, dusičnan, chlorid a oxid). To je ověřeno na základě vyluhovacích testů, podle ČSN EN – 12457-4. Koncentrace mědi ve výluzích byla stanovena pomocí optické emisní spektrometrie s buzením v plazmatu. Cílem práce je ověřit vliv přídavku (mědi) na výsledné mechanické vlastnosti materiálu a také specifikovat, jakým způsobem je těžký kov v matrici vázán, přičemž struktura byla zkoumána za použití rastrovací elektronové mikroskopie.
|
|
|
Imobilizace proteinových makromolekul na polymerní nosiče
Šitnerová, Michaela ; Holas, Ondřej (vedoucí práce) ; Ondrejček, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické technologie Školitel: PharmDr. Ondřej Holas, Ph.D. Posluchač: Michaela Šitnerová Název diplomové práce: Imobilizace proteinových makromolekul na polymerní nosiče Enzymy jsou pro své vlastnosti unikátními biokatalyzátory. Jsou vysoce specifické, selektivní a funkční i při mírných reakčních podmínkách. Ke zvýšení jejich operační stability, aktivity a možnosti opětovného užití je využívána metoda imobilizace. Tento proces umožňuje široké uplatnění enzymů v průmyslu. Například v oblasti potravinářství, zemědělství, analytické chemie, chemické syntézy či ve farmaceutickém průmyslu. Cílem mé práce byla imobilizace enzymu acetylcholinesterasy (AChE) na pelety z mikrokrystalické celulosy (MCC). Využívána byla metoda prosté sorpce, imobilizace pomocí glutaraldehydu a oxidace MCC pomocí TEMPO. K měření aktivity AChE sloužila dobře známá Ellmanova metoda. Absorbance roztoku s imobilizovanou AChE byla měřena spektrofotometricky při vlnové délce 412 nm.
|
host ::
RSS.