|
| |
|
|
Genová exprese v kuřecím embryu: mikromanipulační a vizualizační metody
Bendová, Michaela ; Dvořák, Michal (vedoucí práce) ; Hirsch, Ivan (oponent) ; Krylov, Vladimír (oponent)
Cílem této dizertační práce bylo získat lepší vhled do principů vývoje buněčných struktur a orgánů v kuřecím embryu. K tomuto účelu byly zavedeny a k daným procedurám upraveny různé pokročilé metody manipulace a vizualizace in vitro, ex vivo, ex ovo a in ovo. Tyto specializované metody byly využity zejména ke studiu genové exprese ve vývoji neurální lišty a vývoji oka. Během dlouhodobého výzkumu v naší laboratoři byl pozorován vliv onkoproteinu v-Myb na vývoj neurální lišty a jeho schopnost měnit přirozený buněčný osud. Studovali jsme vliv proteinu v-Myb na změny v diferenciaci buněk neurální lišty, zejména jejich vývoj do melanocytární linie, a jeho vliv na expresi genů v neurální liště. Středem našeho zájmu se stal protein Gremlin 2, označovaný také jako PRDC (protein related to Dan and Cerberus), jehož expresi v-Myb v neurální liště zvyšuje. Zavedené postupy elektroporace neurální lišty in ovo byly upraveny pro transfekci buněk vyvíjejícího se oka a využity ke studiu genové regulace při indukci čočky. Výsledky získané na kuřecím modelu podpořily studii provedenou na myších embryích. Technika elektroporace do embryonálního oka byla také upravena pro mikromanipulace s retinou in ovo, která byla dále zpracována metodami ex vivo a in vitro pro studii zabývající se lokalizací snRNP ve...
|
|
|
Synchronizace elektroporačních pulzů se srdečním rytmem
Nohel, Michal ; Mézl, Martin (oponent) ; Novotná, Veronika (vedoucí práce)
Bakalářská práce se zabývá principem buněčné elektroporace a jejími druhy. Dále popisuje termální a netermální ablační techniky se zaměřením na ireverzibilní elektroporaci. Její součástí je přehled oblastí, ve kterých se využívá synchronizace lékařských úkonů s EKG signálem, přehled technik a měření elektrokardiografického signálu. Dále je diskutována citlivost lidského těla na elektroporační pulzy. Při elektroporaci jsou do pacienta aplikovány krátké vysokonapěťové pulzy. Pokud by byly tyto pulzy aplikovány do vulnerabilní fáze srdečního rytmu, mohla by vzniknout fibrilace komor. Z důvodu bezpečnosti při klinickém využití je proto nezbytná synchronizace aplikace pulzů se srdeční aktivitou pacienta. Součástí praktické části je vytvoření programu v LabVIEW právě pro tento typ synchronizace. Vytvořený program byl testován a dosažené výsledky byly vyhodnoceny z hlediska možnosti praktického použití.
|
|
| |
|
| |
|
|
Regulace genové exprese u anaerobních parazitických protist a využití poznatků v praxi
Brzoň, Ondřej ; Zubáčová, Zuzana (vedoucí práce) ; Horváthová, Lenka (oponent)
Vzhledem ke svému významu pro každou buňku je dnes regulace genové exprese často studovaná na všech svých úrovních. Na druhou stranu, informace o regulaci genové exprese u protist jsou prozatím omezeny prakticky pouze na několik modelových organismů. Z anaerobních protist se jedná zejména o tři druhy parazitující u člověka: Trichomonas vaginalis, Entamoeba histolytica a Giardia intestinalis. Teprve v poslední době se výzkum rozšířil i na některé další organismy (např. Entamoeba invadens nebo některé druhy rodu Spironucleus). Tato práce se zabývá regulací genové exprese na úrovni struktury promotorových oblastí genů kódujících proteiny a využitím těchto poznatků při konstrukci transfekčních systémů, které jsou jedním z nejefektivnějších a nejsilnějších nástrojů studia molekulární a buněčné biologie.
|
|
|
Řízený zdroj vysokého napětí
Chloupek, Jiří ; Hanák, Pavel (oponent) ; Koton, Jaroslav (vedoucí práce)
Cílem této diplomové práce je návrh zdroje vysokého napětí určeného pro generování bipolárních impulzů, které jsou vhodné pro proces vratné a nevratné elektroporace. Dále navrhnout elektronické řízení zdroje. V první části práce jsou rozebrány teoretické poznatky o procesu elektroporace, ve druhé části jsou popsány principy realizace takových zdrojů, další část se zabývá návrhem zdroje a jeho řízením. Předposlední částí je popis uživatelského manuálu a poslední část je věnována měření.
|
|
|
Transformace zelené řasy \kur{Desmodesmus quadricauda}
ZAHRADNÍKOVÁ, Jana
Cílem této práce byla příprava transformantů zelené řasy Desmodesmus quadricauda s využitím metody elektroporace. Testovala jsem citlivost D. quadricauda k antibiotikům za účelem výběru vhodného selekčního markeru. Testovala jsem několik elektroporačních metod, pokoušela jsem se optimalizovat podmínky elektroporace. Pokusila jsem se o transformaci synchronní a asynchronní kultury řasy v různých stádiích buněčného cyklu. Testovala jsem vliv sonikace a skleněných kuliček na poškození buněčné stěny D. quadricauda za účelem uvolnění jednotlivých buněk cenobia a tím zvýšení účinnosti transformace.
|
|
|
Řízený zdroj pulzního elektrického pole
Burian, Josef ; Kubánek, David (oponent) ; Koton, Jaroslav (vedoucí práce)
Cílem diplomové práce je návrh výkonového zdroje určeného pro generování pulsního elektrického pole pro potřeby technologického procesu elektroporace ovocných moštů a rmutů. Na základě požadovaných impulsů dále navrhnout síť přepínaných kapacitorů a induktorů. Navrhnout a realizovat základní řídicí jednotku spolu se spínacími tranzistory. Práce bude obsahovat výpočty a simulace využité při samotném návrhu doplněné o konstrukční řešení a naměřené hodnoty. Tato diplomová práce je rozdělena do několika základních částí. V první části jsou detailně rozebrány teoretické poznatky o procesu elektroporace, podle kterých jsou pak vybrány požadované vlastnosti generovaných pulsů. V druhé části jsou dopodrobna popsány jednotlivé části elektroporačního pracoviště, od zdroje přes kontrolní systém až po elektrodovou komoru. U každé z těchto částí jsou uvedeny různé, možné varianty řešení. V další části je již přistoupeno k samotnému návrhu zdroje. Jsou zde vypsány jednotlivé, požadované parametry pulsů a podle nich jsou postupně prováděny výpočty a návrh. Další část se zabývá simulacemi, které slouží pro ověření vypočtených hodnot a poměrů v elektroporovaném vzorku. Předposlední část se zabývá samotnou mechanickou konstrukcí pracoviště. Jsou zde popsány dílčí problémy konstrukce a oživování výrobku. Poslední část je věnována měření na samotném pracovišti a rozboru naměřených výsledků.
|
|
|
Transformace ptDNA \kur{Chlamydomonas reinhardtii}
HUSÁKOVÁ, Jana
Cílem této magisterské práce bylo vyzkoušet a porovnat dvě dostupné metody genetické transformace (biolistika, elektroporace) u plastidového genomu zelené řasy Chlamydomonas reinhardtii. Při biolistické transformaci byla optimalizována celá škála experimentálních parametrů, které obecně transformační účinnost ptDNA ovlivňují: fyziologický stav akceptorových buněk, typ a velikost použitých mikročástic, tlak hnacího plynu (hélia), délka dráhy letu mikročástic, transformace buněk přímo na selekčním médiu (obsahující spektinomycin 150 ?g/ml) či na médiu neselekčním(bez spektinomycinu) a forma vnášené DNA. Na rozdíl od jaderné transformace nebyla dosud transformace ptDNA pokusného organismu Ch. reinhardtii prostřednictvím elektroporace popsána. Právě proto zde bylo testováno široké spektrum hodnot různých fyzikálních veličin, které mohou podstatným způsobem účinnost transformace ovlivnit.
|
host ::
RSS.