|
|
Oprava oxidativního poškození DNA u buněk čínského křečíka deficientních v nukleotidové excizní reparaci DNA
Strejčková, Lada ; Trejtnar, František (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Oprava oxidativního poškození DNA u buněk čínského křečíka deficientních v nukleotidové excizní reparaci DNA Abstrakt V této rigorózní práci jsme se pokusili charakterizovat opravu oxidativního poškození u ovariálních buněk křečíka čínského. K experimentům jsme využili metodu kometového testu, ke zvýšení citlivosti měření jsme použili specifické endonukleázy a specifické inhibitory excizní reparace - inhibitor poly(ADP-ribóza)polymerázy (PARP) 3- aminobenzamid (3-AB) a cytosinarabinosid s hydroxymočovinou (AraC /HU). PARP-1 je faktorem důležitým pro opravu poškození pomocí bázové excizní reparace (BER). Buňky deficientní v PARP-1 vykazují zhoršení pravděpodobně jak long- patch LP-BER, tak short-patch SP-BER. O AraC/HU je známo, že inhibuje long-patch excizní reparaci. V našich pokusech jsme při opravě poškození způsobeného peroxidem vodíku (H2O2) pozorovali vliv 3-AB, účinek AraC/HU se neprojevil. Pro srovnání jsme provedli též pokusy s metylmetansulfonátem (MMS). U buněk ovlivněných tímto monofunkčním alkylačním činitelem jsme zaznamenali zpomalení reparace v přítomnosti jak 3-AB, tak i AraC/HU. Na základě těchto zjištění se domníváme, že oprava poškození způsobeného vlivem MMS i vlivem H2O2 probíhá u buněk křečíka čínského formou BER, ovšem odlišným mechanismem - u poškození zůsobeného MMS pravděpodobně...
|
|
|
Oprava oxidativního poškození DNA u vybraných buněčných linií lidského a křeččího původu
Strejčková, Lada ; Hochmann, Jiří (vedoucí práce) ; Polívková, Zdeňka (oponent)
1. SOUHRN Jedním z mechanismů oprav DNA poškozené vlivem vnějších činitelů je nukleoti- dová excizní reparace (NER). Ta hraje roli především při odstraňování následků způsobených UV zářením. Poškozené báze se ve formě pyrimidinových dimerů enzymaticky vyštěpují z DNA jako součást oligonukleotidů. Působení UV světla na DNA se však projevuje též nepřímo, a to oxidací bází. V našem experimentu jsme se snažili zjistit, zda buňky deficientní v nukleotidové excizní reparaci jsou schopny opravovat poškození indukované pouze oxidativním činitelem. Stanovovali jsme velikost poškození DNA v buňkách in vitro a schopnost jejich re- parace po ovlivnění roztokem peroxidu vodíku o různé koncentraci. K experimentům jsme použili buněčné linie křečíka čínského, a to rodičovské buňky AA8 a od nich odvozené buňky UV-20, které jsou defektní v genu ERCC1. Tento gen se podílí na tvorbě nukleáz účastnících se nukleotidové excizní reparace. Ke stanovení jsme použili metodu alkalického kometového testu, jejíž základem je alkalická gelová elektroforéza. Princip této metody spočívá v detekci zlomů, které vznikají v poškozených alkalilabilních místech. Hodnotili jsme počet jednořetězcových zlomů DNA. Detekovali jsme buď zlomy indukované samotným peroxidem vodíku (SSB), nebo zlomy vzniklé po působení enzymu, který v DNA specificky...
|
|
|
Oprava oxidativního poškození DNA u vybraných buněčných linií lidského a křeččího původu
Strejčková, Lada ; Hochmann, Jiří (vedoucí práce) ; Polívková, Zdeňka (oponent)
1. SOUHRN Jedním z mechanismů oprav DNA poškozené vlivem vnějších činitelů je nukleoti- dová excizní reparace (NER). Ta hraje roli především při odstraňování následků způsobených UV zářením. Poškozené báze se ve formě pyrimidinových dimerů enzymaticky vyštěpují z DNA jako součást oligonukleotidů. Působení UV světla na DNA se však projevuje též nepřímo, a to oxidací bází. V našem experimentu jsme se snažili zjistit, zda buňky deficientní v nukleotidové excizní reparaci jsou schopny opravovat poškození indukované pouze oxidativním činitelem. Stanovovali jsme velikost poškození DNA v buňkách in vitro a schopnost jejich re- parace po ovlivnění roztokem peroxidu vodíku o různé koncentraci. K experimentům jsme použili buněčné linie křečíka čínského, a to rodičovské buňky AA8 a od nich odvozené buňky UV-20, které jsou defektní v genu ERCC1. Tento gen se podílí na tvorbě nukleáz účastnících se nukleotidové excizní reparace. Ke stanovení jsme použili metodu alkalického kometového testu, jejíž základem je alkalická gelová elektroforéza. Princip této metody spočívá v detekci zlomů, které vznikají v poškozených alkalilabilních místech. Hodnotili jsme počet jednořetězcových zlomů DNA. Detekovali jsme buď zlomy indukované samotným peroxidem vodíku (SSB), nebo zlomy vzniklé po působení enzymu, který v DNA specificky...
|
|
|
Oprava oxidativního poškození DNA u buněk čínského křečíka deficientních v nukleotidové excizní reparaci DNA
Strejčková, Lada ; Trejtnar, František (vedoucí práce) ; Pávek, Petr (oponent)
Oprava oxidativního poškození DNA u buněk čínského křečíka deficientních v nukleotidové excizní reparaci DNA Abstrakt V této rigorózní práci jsme se pokusili charakterizovat opravu oxidativního poškození u ovariálních buněk křečíka čínského. K experimentům jsme využili metodu kometového testu, ke zvýšení citlivosti měření jsme použili specifické endonukleázy a specifické inhibitory excizní reparace - inhibitor poly(ADP-ribóza)polymerázy (PARP) 3- aminobenzamid (3-AB) a cytosinarabinosid s hydroxymočovinou (AraC /HU). PARP-1 je faktorem důležitým pro opravu poškození pomocí bázové excizní reparace (BER). Buňky deficientní v PARP-1 vykazují zhoršení pravděpodobně jak long- patch LP-BER, tak short-patch SP-BER. O AraC/HU je známo, že inhibuje long-patch excizní reparaci. V našich pokusech jsme při opravě poškození způsobeného peroxidem vodíku (H2O2) pozorovali vliv 3-AB, účinek AraC/HU se neprojevil. Pro srovnání jsme provedli též pokusy s metylmetansulfonátem (MMS). U buněk ovlivněných tímto monofunkčním alkylačním činitelem jsme zaznamenali zpomalení reparace v přítomnosti jak 3-AB, tak i AraC/HU. Na základě těchto zjištění se domníváme, že oprava poškození způsobeného vlivem MMS i vlivem H2O2 probíhá u buněk křečíka čínského formou BER, ovšem odlišným mechanismem - u poškození zůsobeného MMS pravděpodobně...
|
host ::
RSS.