|
|
Role of the WIP1 phosphatase in the nucleolus
Palková, Natálie ; Macůrek, Libor (vedoucí práce) ; Sztacho, Martin (oponent)
Protein fosfatáza 2C delta (známá jako WIP1) je důležitým negativním regulátorem signalizace odpovědi buňky na poškození DNA (DDR). Jako protein vázaný na chromatin defosforyluje, a tedy inaktivuje ATM kinázu a transkripční faktor p53. Zvýšená exprese WIP1 potlačuje funkci tumour supresoru p53 a přispívá k rozvoji řady nádorových onemocnění včetně nádorů prsu a mozku. V posledních letech bylo ukázáno, že WIP1 může regulovat rovněž buněčné procesy, které nejsou přímo spojeny s DDR, jako je například zajištění stability telomer. Alternativní funkce proteinu WIP1 však nebyly dosud plně pochopeny. V této práci jsme popsali novou roli proteinu WIP1 v jadérku, organele zodpovědné za produkci ribozomů. Zjistili jsme, že WIP1 asociuje s mnoha jadérkovými proteiny, a pomocí delečních mutant jsme identifikovali jadérkovou lokalizační sekvenci (NoLS) na C-konci proteinu. Pomocí super-rezoluční mikroskopie jsme identifikovali lokalizaci WIP1 fosfatázy ve fibrilárních centrech jadérka . Za použití inducibilního Cas9 systému pro generování dvouřetězcových zlomů v rDNA jsme dále zjistili, že WIP1 ovlivňuje akumulaci faktorů zajišťujících opravu poškození DNA. Analýza založená na kvantitativní mikroskopii ukázala, že aktivita WIP1 má vliv také morfologii jadérka. Na základě našich výsledků usuzujeme, že WIP1...
|
|
|
Role of the MRN complex in the nucleolar DNA damage response
Palková, Natálie ; Macůrek, Libor (vedoucí práce) ; Hanzlíková, Hana (oponent)
Zachování integrity genomu je zásadní pro správné fungování a přežití všech organismů, a to zejména, je-li buňka konstantně vystavena nejrůznějším genotoxickým vlivům. Z tohoto důvodu existují mechanismy, které detekují poškození DNA, zajišťují signalizaci a podporují opravu postiženého místa. Tyto mechanismy se souhrnně označují jako odpověď na poškození DNA (DDR). Nezbytnou součástí těchto procesů je také MRE11-RAD50-NBS1 komplex (MRN) složený z proteinů, jako je nukleáza MRE11, ATPáza RAD50 a regulační adaptérový protein NBS1. MRN komplex má nezastupitelnou roli v detekci a časné resekci dvouřetězcových zlomů (DSBs), přenosu signálu, aktivaci ataxia telangiectasia mutated (ATM) kinázy a následných efektorů potřebných pro DDR. Složky MRN komplexu jsou zapojeny v procesech stěžejních pro přesnou opravu poškození DNA, přežití buňky a zachování stability genomu. Hlavním cílem této práce je popsat méně známou úlohu MRN komplexu v jadérku, jaderné organele bez membránového obalu, která se zakládá kolem kopií genů kódujících rRNA. V této práci je rozebráno, jakým způsobem je MRN komplex transportován do jadérka, jak figuruje v opravě dvouřetězcových zlomů rDNA, dočasném zastavení transkripce rRNA nebo v segregaci jadérka. Práce dává do souvislostí nejnovější poznatky v oblasti jadérkové odpovědi na...
|
host ::
RSS.