|
|
Využití separačních a hmotnostně-spektrometrických technik v diagnostice Alzheimerovy choroby
Lebertová, Lucie ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu kovalentně zesítěných oligomerních forem amyloidu beta a jejich analýzu pomocí SDS-PAGE a MALDI-TOF. Kovalentně zesítěné oligomerní formy Aβ(1-42) byly tvořeny pomocí chemické a enzymatické reakce. Prokřížení řetězců amyloidu beta vzniká přes aminokyselinový zbytek tyrosinu za vzniku kovalentní vazby, přičemž takovéto kovalentní zesítění vede ke stabilizaci oligomerní struktury, což umožňuje zlepšení analýzy oligomerů amyloidu beta. Vývoj metod pro detekci a kvantifikaci oligomerů amyloidu beta může být značným přínosem pro diagnostiku Alzheimerovy choroby, protože právě oligomerní formy amyloidu beta jsou nejvíce spojovány s patologií Alzheimerovy choroby. V teoretické části je popsána Alzheimerova choroba s uvedenými problémy v časné diagnostice a terapii. Dále jsou uvedeny základní informace o amyloidu beta a popsány analytické metody separace a detekce amyloidu beta používané ve výzkumu. Experimentální část se zabývá optimalizací analytických metod MALDI-TOF a SDS-PAGE. V metodě MALDI-TOF byly pro stanovení Aβ(1-42), jako vhodné matrice, vybrány matrice kyselina 2,5-dihydroxybenzoová a kyselina sinapová. Nejvhodnější metoda nanášení vzorku na MALDI desku pro analýzu Aβ(1-42) byla metoda vyschlé kapky. Optimalizací metody SDS-PAGE bylo zjištěno, že...
|
|
|
Analýza tetrachlorozlatitanu draselného kapilární elektroforézou
Lebertová, Lucie ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Křížek, Tomáš (oponent)
V této bakalářské práci je popsána optimalizace podmínek analýzy tetrachlorozlatitanu draselného metodou kapilární zónové elektroforézy se spektrofotometrickou detekcí. V teoretické části je nejdříve uveden princip kapilární elektroforézy. Dále jsou uvedeny základní informace o zlatu a jeho sloučenině tetrachlorozlatitanu. V experimentální části je popsán postup optimalizace složení základního elektrolytu a problémy s nestabilitou základní linie. Jako nejvhodnější podmínky pro analýzu tetrachlorozlatitanu byly zvoleny tyto experimentální podmínky: křemenná kapilára o celkové délce 80 cm, efektivní délce 71,6 cm a průměru 50 µm, vložené separační napětí -20 kV se současně aplikovaným tlakem 20 mbar, dávkování tlakem 20 mbar po dobu 20 sec, základní elektrolyt, který obsahoval 0,01 mol dm-3 HCl a 0,04 mol dm-3 NaCl a detekce, která byla prováděna při 230 nm. Následně byla za optimalizovaných podmínek ověřena opakovatelnost měření, stabilita zásobního roztoku tetrachlorozlatitanu, změřena kalibrační závislost a určeny mez detekce a mez stanovitelnosti pro zvolené experimentální podmínky. Určená hodnota LOD byla 7,49 ∙ 10-6 mol dm-3 a určená hodnota LOQ byla 2,49 ∙ 10-5 mol dm-3 . Klíčová slova: Kapilární zónová elektroforéza, tetrachlorozlatitan draselný
|
host ::
RSS.