|
|
Příprava afinitních nosičů pro klinickou diagnostiku
Kalaninová, Zuzana ; Pompach, Petr (vedoucí práce) ; Žáček, Petr (oponent)
Botulotoxiny jsou skupinou proteinových jedů produkovaných bakteriemi rodu Clostridium. Tyto toxiny patří mezi vysoce toxické látky způsobující paralytické onemocnění známé jako botulismus. Na základě své endopeptidasové aktivity toxiny blokují uvolnění neurotransmiteru v spojích nervových buněk. Jelikož se účinky intoxikace dostaví již do 48 hodin a toxin je schopen ve své aktivní formě setrvat až po dobu několika měsíců, byly kategorizovány jako potenciální zbraň bio-terorismu. Z hlediska účinné léčby je tedy důležité nalézt rychlou metodu, která bude schopna nejenom stanovit přítomnost botulotoxinu, ale i jeho konkrétní typ. Tato práce je dokumentací nové metody potenciálně využitelné ke stanovení přítomnosti botulotoxinů v různých matricích. Metoda je založena na detekci produktů proteasové aktivity botulotoxinu A (BoNT/A) pomocí afinitních nosičů a MALDI hmotnostní spektrometrie. V rámci této práce byly k detekci a stanovení limitu detekce produktů aktivity BoNT/A využity afinitní nosiče připravené metodou měkkého přistávání iontů. Pro imobilizaci byly zvoleny proteiny s vysokou afinitou k biotinu - avidin, neutravidin a streptavidin - pro účely nabohacení biotinylovaných peptidových produktů BoNT/A reakce. Metoda využívající kombinaci afinitních nosičů a MALDI hmotnostní spektrometrie se jeví...
|
|
|
Příprava afinitních povrchů pro hmotnostní spektrometrii
Kalaninová, Zuzana ; Pompach, Petr (vedoucí práce) ; Kučera, Lukáš (oponent)
Jednou z nejvíce účinných toxických substancí biologického původu známých lidstvu jsou botulotoxiny, nervové jedy produkované bakteriemi rodu Clostridium. Místem jejich účinku jsou nervosvalová zapojení, ve kterých štěpí proteiny SNARE komplexu, čímž zamezí uvolnění neurotransmiteru a přenosu nervového vzruchu. Výsledkem je ochablá paralýza, hlavní symptom onemocnění zvaného botulismus. Kvůli nízké smrtelné dávce a vysoké toxicitě mají BoNTs své místo na seznamu činitelů bioterorismu. I když je dnes k dispozici mnoho metod jejich detekce, "zlatým standardem" jsou dosud biologické testy na myších. Nehledě na etickou stránku těchto experimentů, značnou nevýhodou je i jejich časová náročnost. V této práci je představeno unikátní spojení proteinových povrchů s metodou využívající k detekci aktivních BoNTs jejich endopeptidasovou aktivitu a hmotnostní spektrometrii, EndoPep-MS. Funkcionalizované povrchy byly připraveny metodou měkkého přistávání iontů za atmosférického tlaku, která využívá proud hypertermálních iontů (rozsah energie 1-100 eV), čím umožňuje kontrolovanou modifikaci. Botulotoxin A1 byl detekován dvěma způsoby. První byl založen na interakci avidin-biotin, kdy byly na neutravidinem modifikovaném povrchu nabohaceny biotinem značené peptidy (substrátový peptid pro BoNT/A i peptidové produkty...
|
|
|
Příprava afinitních nosičů pro klinickou diagnostiku
Kalaninová, Zuzana ; Pompach, Petr (vedoucí práce) ; Žáček, Petr (oponent)
Botulotoxiny jsou skupinou proteinových jedů produkovaných bakteriemi rodu Clostridium. Tyto toxiny patří mezi vysoce toxické látky způsobující paralytické onemocnění známé jako botulismus. Na základě své endopeptidasové aktivity toxiny blokují uvolnění neurotransmiteru v spojích nervových buněk. Jelikož se účinky intoxikace dostaví již do 48 hodin a toxin je schopen ve své aktivní formě setrvat až po dobu několika měsíců, byly kategorizovány jako potenciální zbraň bio-terorismu. Z hlediska účinné léčby je tedy důležité nalézt rychlou metodu, která bude schopna nejenom stanovit přítomnost botulotoxinu, ale i jeho konkrétní typ. Tato práce je dokumentací nové metody potenciálně využitelné ke stanovení přítomnosti botulotoxinů v různých matricích. Metoda je založena na detekci produktů proteasové aktivity botulotoxinu A (BoNT/A) pomocí afinitních nosičů a MALDI hmotnostní spektrometrie. V rámci této práce byly k detekci a stanovení limitu detekce produktů aktivity BoNT/A využity afinitní nosiče připravené metodou měkkého přistávání iontů. Pro imobilizaci byly zvoleny proteiny s vysokou afinitou k biotinu - avidin, neutravidin a streptavidin - pro účely nabohacení biotinylovaných peptidových produktů BoNT/A reakce. Metoda využívající kombinaci afinitních nosičů a MALDI hmotnostní spektrometrie se jeví...
|
host ::
RSS.