|
|
Vnitřní pH kvasinek a vliv transportu draselných iontů na jeho regulaci
Hošková, Barbora ; Urbánková, Eva (vedoucí práce) ; Holoubek, Aleš (oponent)
Cytosolické pH kvasinek je regulováno a udržováno na stálé hodnotě součinností mnoha transportních proteinů. V této diplomové práci bylo využito fluorescenčního proteinu pHluorinu citlivého k pH okolí pro studium cytosolického pH v Saccharomyces cerevisiae. Většina měření byla prováděna na spektrofluorimetru, ale pro možné budoucí měření byla optimalizována i metoda měření na readeru (možnost měřit více vzorků zároveň) a bylo využito arginin-fosfátového kultivačního média. Zprostředkovaně byl sledován vliv konkrétních delecí proteinů na regulaci a stabilitu pH cytosolu. Některé proteiny s regulací cytosolického pH souvisí přímo, jako např. Pma1 - H+-ATPáza, jiné nepřímo - např. Ypt6. Bylo prokázáno, že samotná hodnota pHcyt závisí nejen na použitém kmeni kvasinek, ale i na kultivačních a experimentálních podmínkách. Žádná ze studovaných delecí neovlivnila regulaci pH výrazně, buňky si zachovaly schopnost regulace i v případě okyselení vnějšího prostředí kyselinou sírovou. Pufrační kapacita, měřená metodou přidání slabé zásady k suspenzi buněk, se pohybovala v rozmezí 30 - 60 mM v případě kultivace buněk v YNB médiu. Při kultivaci v AP médiu byla pufrační kapacita větší.
|
host ::
RSS.