|
|
Příprava organelových markerů v kvasinkách Saccharomyces cerevisiae
Dekha, Daniella ; Vopálenská, Irena (vedoucí práce) ; Papoušková, Klára (oponent)
Cílem práce bylo připravit sadu kmenů s fluorescenčně značenými organelami. Použitým organismem je haploidní kmen s vysokou frekvencí homologní rekombinace Saccharomyces cerevisiae BY4742. Kvasinka S. cerevisiae je jednobuněčný organizmus a patří mezi nejstudovanější experimentální živé systémy. Její generační doba bývá 1,5-2 hodiny, což umožňuje rychle sledovat vývin kultury jak na pevném, tak i v tekutém médiu. Pro každou organelu byly vybrány specifické proteiny, a to proteiny lokalizované na membráně vakuol (Vph1, Vtc3), peroxisomů (Pex3), jádra (Nvj1), endoplazmatického retikula (Sec63), mitochondrií (Cox4) a v lumen vakuol (Prc1). Vybrané proteiny byly označené připojením fluorescenčních proteinů (yEGFP, yomCherry nebo yomRuby2) k jejich C-koncům. Připravené kmeny byly analyzované v tekutých a na pevných médiích. Byly sestrojené růstové křivky, porovnána fluorescence v různých fázích růstu a zjištěn vliv dvou různých zdrojů uhlíku na expresi vybraných genů. Celkem bylo připraveno a otestováno 12 kmenů s fluorescenčními organelovými markery pro membránu vakuol, peroxisomů, jádra, endoplazmatického retikula, mitochondrií a vakuolární lumen a dále 5 kmenů s dvojicí fluorescenčních markerů pro vakuolární membránu a vybranou další organelu (membránu peroxisomů, jádra, endoplazmatického retikula,...
|
host ::
RSS.