|
|
Preparation of cDNA of selected gene and cloning.
Bogdanovič, Igor ; Miletín, Miroslav (vedoucí práce) ; Bunček, Martin (oponent)
Abstrakt
ABC jsou velká skupina transmembránových proteinů, o kterých je známo že hrají klíčovou roli v rozvoji lékové rezistence. Schopnost těchto proteinů aktivně transportovat širokou škálu látek ven z buňky je hlavním principem - schopnosti řady nádorových buněk odolávat působení chemoterapeutik. Pro studium aktivity lékových transportérů a jejich substrátů či inhibitorů bylo vyvinuto množství in vitro modelů. Tyto modely jsou založeny na využití savčích buněk, které jsou geneticky manipulovány tak, aby v plazmatické membráně exprimovaly vybraný efluxní transportér. Pro genetické modifikace těchto buněk se využívá řada produkčních plazmidů. V naší práci jsme se zaměřili na vývoj univerzálního produkčního plazmidu obsahujícího krátkou V5 tag sekvenci a umožňujícího následné vklonování kódující sekvence vybraného lékového transportéru tak, aby byl V5 tag lokalizován na jeho 3' konci. Výsledný produkční plazmid tak může být dále použit k transfekci vhodné savčí buněčné linie, která bude sloužit jako model pro studium aktivity efluxního transportéru in vitro. Vybraný transportér je v buněčné linii produkován jako fúzní protein s V5 tagem lokalizovaným na jeho C-konci. Tak může tento tag sloužit jako univerzální marker proteinové exprese detekovatelný s pomocí imunohistochemických metod. Pro konstrukci V5...
|
|
| |
|
|
Farmakologický přístup k výsledkům vyšetření estrogenových a progesteronových receptorů v nádorech prsu
Bařinková, Vlasta ; Hochmann, Jiří (vedoucí práce) ; Bunček, Martin (oponent)
Souhrn V částech věnovaných diskuzi různých autorů o významu progesteronových receptorů (PR) jsme se zaměřili především na práce zahraničních autorů publikované v odborných časopisech. Názory těchto odborníků jsme rozdělili na ty, které uvádí, že testování PR je zbytečné a na část o výhodnosti tohoto testování. V kapitole o důležitosti vyšetření PR někteří autoři kritizují, že některé pacientky negativní na estrogenové receptory (ER) - a to takové, které jsou zároveň PRpozitivní - by mohly být ochuzeny o hormonální terapii, protože by jim vyšetření PR nebylo provedeno. A navíc by jim byla přednostně podána jiná - v tomto případě méně efektivní léčba. Vyšetření PR je důležité také proto, aby se rozlišila skupina ERpozitivních nádorů s negativním PR u níž je malá pravděpodobnost, že nádory budou reagovat na hormonální léčbu (na rozdíl od ER+/PR+). V části věnované genové terapii jsme nejprve popsali poznatky z učebnicové literatury. Dále jsme popsali různé metody genové terapie karcinomu prsu publikované v zahraniční časopisové literatuře. Třídění, v nich uvedené, jsme pak dále modifikovali dle naší potřeby na tyto podkapitoly: (1) mutační kompenzace diferenciačních genů, (2) vložení genu regulujícího apoptózu, (3) vložení genu způsobujícího nekrózu nebo inhibici růstu buňky v netoxických podmínkách, (4)...
|
|
|
Geny β-tubulinových paralogů u rodu Aspergillus: taxonomický význam a markery použitelné v jejich rozlišení
Hubka, Vít ; Kolařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Bunček, Martin (oponent)
Gen pro beta-tubulin (benA) patří k nejvíce využívaným genům v taxonomii a identifikaci druhů u rodu Aspergillusi u ostatních hub. Napříč druhy rodu Aspergillus se v genomech gen pro beta-tubulin vyskytuje buď v podobějediného genu (benA), nebo může být přítomen ještě paralogní gen tubC. Jak bylo zjištěno, oba paralogy bylyv taxonomii rodu Aspergillus opakovaně použity v kombinovaném datasetu společně. Tato práce charakterizujeoba geny u řady druhů Aspergillus, reviduje v současnosti používané primery pro beta-tubulin a předkládá nové primery pro použití u rodu Aspergillus, které jsou více specifické pro gen benA. Navíc se snaží řešitnepřehlednou situaci kolem paralogů navržením řady markerů, které více či méně specificky odliší oba paralogy- parametry hodnotící "codon usage", složení bazí, délka intronů, sekvenční motivy. Součástí práce je i rozsáhlástudie molekulární diversity 349 izolátů Aspergillus (PCR-fingerprint, sekvenace - ITS, benA, rpb2, caM)pocházejících z českých sbírek a klinického materiálu mezi nimiž bylo nalezeno celkem 82 druhů. Na jejím základě bude navrženo devět nových taxonů, které byly odhaleny i v ekonomicky velmi významných sekcíchjako jsou sekce Nigri, Fumigati nebo Aspergillus (Eurotium spp.). Pět druhů v sekci Aspergillus budesynonymizováno s již popsanými druhy. Studie...
|
|
|
Geny β-tubulinových paralogů u rodu Aspergillus: taxonomický význam a markery použitelné v jejich rozlišení
Hubka, Vít ; Kolařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Bunček, Martin (oponent)
Gen pro beta-tubulin (benA) patří k nejvíce využívaným genům v taxonomii a identifikaci druhů u rodu Aspergillusi u ostatních hub. Napříč druhy rodu Aspergillus se v genomech gen pro beta-tubulin vyskytuje buď v podobějediného genu (benA), nebo může být přítomen ještě paralogní gen tubC. Jak bylo zjištěno, oba paralogy bylyv taxonomii rodu Aspergillus opakovaně použity v kombinovaném datasetu společně. Tato práce charakterizujeoba geny u řady druhů Aspergillus, reviduje v současnosti používané primery pro beta-tubulin a předkládá nové primery pro použití u rodu Aspergillus, které jsou více specifické pro gen benA. Navíc se snaží řešitnepřehlednou situaci kolem paralogů navržením řady markerů, které více či méně specificky odliší oba paralogy- parametry hodnotící "codon usage", složení bazí, délka intronů, sekvenční motivy. Součástí práce je i rozsáhlástudie molekulární diversity 349 izolátů Aspergillus (PCR-fingerprint, sekvenace - ITS, benA, rpb2, caM)pocházejících z českých sbírek a klinického materiálu mezi nimiž bylo nalezeno celkem 82 druhů. Na jejím základě bude navrženo devět nových taxonů, které byly odhaleny i v ekonomicky velmi významných sekcíchjako jsou sekce Nigri, Fumigati nebo Aspergillus (Eurotium spp.). Pět druhů v sekci Aspergillus budesynonymizováno s již popsanými druhy. Studie...
|
|
|
Preparation of cDNA of selected gene and cloning.
Bogdanovič, Igor ; Miletín, Miroslav (vedoucí práce) ; Bunček, Martin (oponent)
Abstrakt
ABC jsou velká skupina transmembránových proteinů, o kterých je známo že hrají klíčovou roli v rozvoji lékové rezistence. Schopnost těchto proteinů aktivně transportovat širokou škálu látek ven z buňky je hlavním principem - schopnosti řady nádorových buněk odolávat působení chemoterapeutik. Pro studium aktivity lékových transportérů a jejich substrátů či inhibitorů bylo vyvinuto množství in vitro modelů. Tyto modely jsou založeny na využití savčích buněk, které jsou geneticky manipulovány tak, aby v plazmatické membráně exprimovaly vybraný efluxní transportér. Pro genetické modifikace těchto buněk se využívá řada produkčních plazmidů. V naší práci jsme se zaměřili na vývoj univerzálního produkčního plazmidu obsahujícího krátkou V5 tag sekvenci a umožňujícího následné vklonování kódující sekvence vybraného lékového transportéru tak, aby byl V5 tag lokalizován na jeho 3' konci. Výsledný produkční plazmid tak může být dále použit k transfekci vhodné savčí buněčné linie, která bude sloužit jako model pro studium aktivity efluxního transportéru in vitro. Vybraný transportér je v buněčné linii produkován jako fúzní protein s V5 tagem lokalizovaným na jeho C-konci. Tak může tento tag sloužit jako univerzální marker proteinové exprese detekovatelný s pomocí imunohistochemických metod. Pro konstrukci V5...
|
|
| |
|
|
Farmakologický přístup k výsledkům vyšetření estrogenových a progesteronových receptorů v nádorech prsu
Bařinková, Vlasta ; Hochmann, Jiří (vedoucí práce) ; Bunček, Martin (oponent)
Souhrn V částech věnovaných diskuzi různých autorů o významu progesteronových receptorů (PR) jsme se zaměřili především na práce zahraničních autorů publikované v odborných časopisech. Názory těchto odborníků jsme rozdělili na ty, které uvádí, že testování PR je zbytečné a na část o výhodnosti tohoto testování. V kapitole o důležitosti vyšetření PR někteří autoři kritizují, že některé pacientky negativní na estrogenové receptory (ER) - a to takové, které jsou zároveň PRpozitivní - by mohly být ochuzeny o hormonální terapii, protože by jim vyšetření PR nebylo provedeno. A navíc by jim byla přednostně podána jiná - v tomto případě méně efektivní léčba. Vyšetření PR je důležité také proto, aby se rozlišila skupina ERpozitivních nádorů s negativním PR u níž je malá pravděpodobnost, že nádory budou reagovat na hormonální léčbu (na rozdíl od ER+/PR+). V části věnované genové terapii jsme nejprve popsali poznatky z učebnicové literatury. Dále jsme popsali různé metody genové terapie karcinomu prsu publikované v zahraniční časopisové literatuře. Třídění, v nich uvedené, jsme pak dále modifikovali dle naší potřeby na tyto podkapitoly: (1) mutační kompenzace diferenciačních genů, (2) vložení genu regulujícího apoptózu, (3) vložení genu způsobujícího nekrózu nebo inhibici růstu buňky v netoxických podmínkách, (4)...
|
|
| |
host ::
RSS.