|
|
Vliv derivátů benzoxazindionu na vybrané mykobakteriální enzymy
Švidrnochová, Michaela ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Krátký, Martin (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Michaela Švidrnochová Školitel: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Název rigorózní práce: Vliv derivátů benzoxazindionu na vybrané mykobakteriální enzymy Tuberkulóza je zákeřné infekční onemocnění se stále se zvyšujícím výskytem v určitých oblastech. Je obtížně léčitelná dostupnými prostředky díky narůstajícím případům multirezistence, která je definována jako necitlivost M. tuberculosis alespoň k dvěma základním antituberkulotikům - rifampicinu a isoniazidu. Proto je nutné hledat nové látky, které zasahují do metabolických cest Mycobakterium tuberculosis. Inhibice enzymů na různých úrovních těchto drah představují cílová místa nových potenciálních antituberkulotik. V této práci byl zkoumán vliv monosirných a disirných derivátů 3-(4-alkylfenyl)-2H-1,3- benzoxazin-2,4(3H)-dionu na enoyl-ACP-reduktasu, dihydrofolátreduktasu, isocitrátlyasu a enzym FtsZ za využití diferenční skenovací fluorimetrie, spektrofotometrické metody a metody rozptylu světla. Výsledky měření ukázaly, že dihydrofolátreduktasa není cílovým místem vybraných inhibitorů. Isocitrátlyasa byla nejvíce inhibována sirným derivátem 3-(4- terc-butylfenyl)-7-methyl-4-thioxo-2H-1,3-benzoxazin-2(3H)-onem a slabý stabilizační vliv na enzym...
|
|
|
Klonování, exprese a purifikace vybraného mykobakteriálního enzymu
Švidrnochová, Michaela ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Řešitel: Michaela Švidrnochová Školitel: Mgr. Eva Novotná, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování, exprese a purifikace vybraného mykobakteriálního enzymu Mycobacterium tuberculosis produkuje řadu enzymů, které jsou pro její růst a přežití nezbytnou součástí. Inhibice enzymů, účastnících se biosyntéz řady významných molekul bakterie, se stává potenciálním cílovým místem nových látek v léčbě tuberkulózy. Naftoátsyntasa je mykobakteriální enzym účastnící se biosyntézy menachinonu, který má zásadní význam pro elektronový transportní řetězec v anaerobním prostředí. Naftoátsyntasa (menB) patří do krotonové nadrodiny proteinů, katalyzuje přeměnu o-sukcinylbenzoyl-CoA (OSB-CoA) na 1,4-dihydroxy-2-naftoyl-CoA (DHNA-CoA). K přípravě rekombinantního proteinu menB byl použit plazmid pET-28b(+) a úsek DNA, kódující sekvenci menB, namnožený polymerázovou řetězovou reakcí. Zaligovaný plazmid byl transformován do buněk E.coli HB101 metodou tepelného šoku. Pro expresi byly použity expresní buňky E.coli BL21 a vlastní exprese byla indukována přidaním IPTG. Připravený protein byl izolován a přečištěn přístrojem Äkta, který vyžívá metod afinitní chromatografie.
|
|
|
Vliv derivátů benzoxazindionu na vybrané mykobakteriální enzymy
Švidrnochová, Michaela ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Krátký, Martin (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Michaela Švidrnochová Školitel: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Název rigorózní práce: Vliv derivátů benzoxazindionu na vybrané mykobakteriální enzymy Tuberkulóza je zákeřné infekční onemocnění se stále se zvyšujícím výskytem v určitých oblastech. Je obtížně léčitelná dostupnými prostředky díky narůstajícím případům multirezistence, která je definována jako necitlivost M. tuberculosis alespoň k dvěma základním antituberkulotikům - rifampicinu a isoniazidu. Proto je nutné hledat nové látky, které zasahují do metabolických cest Mycobakterium tuberculosis. Inhibice enzymů na různých úrovních těchto drah představují cílová místa nových potenciálních antituberkulotik. V této práci byl zkoumán vliv monosirných a disirných derivátů 3-(4-alkylfenyl)-2H-1,3- benzoxazin-2,4(3H)-dionu na enoyl-ACP-reduktasu, dihydrofolátreduktasu, isocitrátlyasu a enzym FtsZ za využití diferenční skenovací fluorimetrie, spektrofotometrické metody a metody rozptylu světla. Výsledky měření ukázaly, že dihydrofolátreduktasa není cílovým místem vybraných inhibitorů. Isocitrátlyasa byla nejvíce inhibována sirným derivátem 3-(4- terc-butylfenyl)-7-methyl-4-thioxo-2H-1,3-benzoxazin-2(3H)-onem a slabý stabilizační vliv na enzym...
|
host ::
RSS.