|
| |
|
|
Strukturní a funkční analýza faktorů virulence mikroba Francisella tularensis.
Šenitková, Iva ; Hernychová, Lenka (oponent)
Předkládaná dizertační práce je zaměřena na studium vztahu struktury a funkce lipoproteinu FTS_1067 gram-negativní bakterie Francisella tularensis subsp. holarctica kmen FSC200. Tento protein s unikátní strukturou tvořenou dvěma funkčními doménami se významně podílí na virulenci bakterie, nicméně role obou domén nebyla dříve objasněna. Ačkoli je tento protein běžně nazýván virulenčním faktorem, z nejnovějších studií vyplývá, že pravými faktory virulence jsou substráty tohoto proteinu a protein FTS_1067 je nezbytný pro jejich správnou funkci. Pomocí metod molekulární biologie se podařilo připravit nový mutantní kmen s delecí DSBA-like domény a tento mutantní kmen charakterizovat na in vivo a in vitro úrovni. Dále byl připraven rekombinantní protein se shodnou delecí a s tímto proteinem bylo provedeno několik funkčních testů. Následnou analýzou získaných výsledků a jejich srovnáním s některými předchozími studiemi jsme vypracovali první komplexní zprávu ukazující role obou domén v rámci celého proteinu. Pro doplnění informací o zapojení proteinu FTS_1067 do mechanizmů virulence bakterie jsme se pokusili ověřit vytipované vazebné partnery a potenciální substráty pomocí analýz využívajících bakteriální dvouhybridový systém.
|
|
|
Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA
Šenitková, Iva ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Iva Šenitková Školitel: doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Školitel - konzultant: RNDr. Petra Špidlová, Ph.D. Název diplomové práce: Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA Konzervovaný hypotetický lipoprotein FTT1103 je virulenčním faktorem gramnegativní intracelulární bakterie F. tularensis. Tento protein je homologní k proteinům disulfid oxidoreduktázové rodiny DsbA. Proteiny této rodiny katalyzují tvorbu disulfidických vazeb, které jsou nezbytné pro utvoření správné konformace proteinů, pro jejich aktivitu a stabilitu. Cílem práce byla identifikace vazebných partnerů lipoproteinu FTT1103 běžně nazývaného DsbA, jejichž znalost by nám mohla pomoci v hlubším pochopení role lipoproteinu DsbA ve virulenci F. tularensis. Pomocí metod molekulární biologie jsme vytvořili fúzní gen ftt1103 se sekvencí kódující FLAG® kotvu a klonovali ho do plazmidového vektoru replikujícího se ve F. tularensis. Plazmidový vektor jsme elektroporací vnesli do in frame delečního mutanta F. tularensis subsp. holarctica kmen FSC200/∆1103, čímž došlo k jeho komplementaci in trans. Protein DsbA obsahující FLAG® epitop jsme spolu s jeho...
|
|
|
Strukturní a funkční analýza faktorů virulence mikroba Francisella tularensis.
Šenitková, Iva ; Hernychová, Lenka (oponent)
Předkládaná dizertační práce je zaměřena na studium vztahu struktury a funkce lipoproteinu FTS_1067 gram-negativní bakterie Francisella tularensis subsp. holarctica kmen FSC200. Tento protein s unikátní strukturou tvořenou dvěma funkčními doménami se významně podílí na virulenci bakterie, nicméně role obou domén nebyla dříve objasněna. Ačkoli je tento protein běžně nazýván virulenčním faktorem, z nejnovějších studií vyplývá, že pravými faktory virulence jsou substráty tohoto proteinu a protein FTS_1067 je nezbytný pro jejich správnou funkci. Pomocí metod molekulární biologie se podařilo připravit nový mutantní kmen s delecí DSBA-like domény a tento mutantní kmen charakterizovat na in vivo a in vitro úrovni. Dále byl připraven rekombinantní protein se shodnou delecí a s tímto proteinem bylo provedeno několik funkčních testů. Následnou analýzou získaných výsledků a jejich srovnáním s některými předchozími studiemi jsme vypracovali první komplexní zprávu ukazující role obou domén v rámci celého proteinu. Pro doplnění informací o zapojení proteinu FTS_1067 do mechanizmů virulence bakterie jsme se pokusili ověřit vytipované vazebné partnery a potenciální substráty pomocí analýz využívajících bakteriální dvouhybridový systém.
|
|
| |
|
|
Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA
Šenitková, Iva ; Červený, Lukáš (oponent) ; Šimůnek, Tomáš (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Iva Šenitková Školitel: doc. PharmDr. Tomáš Šimůnek, Ph.D. Školitel - konzultant: RNDr. Petra Špidlová, Ph.D. Název diplomové práce: Komplementace dsbA mutantního kmene Francisella tularensis a analýza potenciálních vazebných partnerů proteinu DsbA Konzervovaný hypotetický lipoprotein FTT1103 je virulenčním faktorem gramnegativní intracelulární bakterie F. tularensis. Tento protein je homologní k proteinům disulfid oxidoreduktázové rodiny DsbA. Proteiny této rodiny katalyzují tvorbu disulfidických vazeb, které jsou nezbytné pro utvoření správné konformace proteinů, pro jejich aktivitu a stabilitu. Cílem práce byla identifikace vazebných partnerů lipoproteinu FTT1103 běžně nazývaného DsbA, jejichž znalost by nám mohla pomoci v hlubším pochopení role lipoproteinu DsbA ve virulenci F. tularensis. Pomocí metod molekulární biologie jsme vytvořili fúzní gen ftt1103 se sekvencí kódující FLAG® kotvu a klonovali ho do plazmidového vektoru replikujícího se ve F. tularensis. Plazmidový vektor jsme elektroporací vnesli do in frame delečního mutanta F. tularensis subsp. holarctica kmen FSC200/∆1103, čímž došlo k jeho komplementaci in trans. Protein DsbA obsahující FLAG® epitop jsme spolu s jeho...
|
host ::
RSS.