|
|
Harnessing soluble forms of NK cell receptors and their ligands for cancer immunotherapy
Kalousková, Barbora ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Obšil, Tomáš (referee) ; Maloy Řezáčová, Pavlína (referee)
Natural killer cells (NK cells) are a family of lymphocytes with a natural ability to kill infected, harmed, or malignantly transformed cells. As these cells are part of the innate immunity, the cytotoxic mechanisms are activated upon recognizing specific patterns without prior antigen sensitization. This recognition is crucial for NK cell function in the maintenance of homeostasis and immunosurveillance. NK cells not only act directly towards malignant cells but also participate in the complex immune response by producing cytokines or crosstalk with other immune cells. Cancer may be seen as a break of all immune defenses when malignant cells escape the immunity and invade surrounding tissues creating a microenvironment supporting tumor progression. This process may be reverted by interventions into immune response shaping with immunotherapy, which may lead to restoration of immune recognition. NK cells are also effector cells important for immunotherapy, may be used for adoptive transfer, genetically modified with chimeric antigen receptors, or triggered with appropriate antibodies. NK cell receptors, responsible for target recognition and activation of cytotoxic machinery, may also be targeted in immunotherapy. However, this kind of immunoactive therapeutics may be designed only with the deep...
|
|
|
Preparation of human NK cell activation receptor NKp80 and its ligand AICL
Kalousková, Barbora ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Ingr, Marek (referee)
NK buňky (z angl. natural killer cells, přirozeně zabíječské buňky) hrají klíčovou roli při rozpoznávání a ničení nádorových, infikovaných nebo jinak pozměněných buněk. Na svém povrchu nemají antigenně specifické receptory, proto je řadíme mezi složky přirozené imunity. K rozpoznání cílových buněk slouží řada jiných povrchových receptorů. Inhibiční receptory zajišťují buněčnou toleranci, naopak aktivační receptory spouští cytotoxické mechanismy vedoucí k apoptóze a tedy lýzi buňky. Díky této vlastnosti jsou NK buňky intenzivně studovány v souvislosti s imunoterapií nádorových onemocnění. Jedním z aktivačních receptorů je NKp80 rozpoznávající svůj ligand AICL. Oba proteiny patří do rodiny receptorů podobných lektinům C-typu. Tento komplex se účastní nejenom přímé lýze maligních buněk myeloidního charakteru, ale má také důležitou roli v imunomodulaci zánětu. Předmětem této diplomové práce je příprava receptoru NKp80 a jeho ligandu AICL. Receptor NKp80 byl připraven v linii lidských embryonálních ledvinných buněk (HEK 293S GnTI- ). Byly připraveny stabilně transfekované linie produkující protein NKp80 konstitutivně nebo indukovatelně. Zapojení disulfidických můstků a obsazení N-glykosylačních míst proteinu NKp80 bylo ověřeno hmotnostní spektrometrií. Dále byl optimalizován postup Mgr. Jiřího Nového na...
|
|
|
Preparation of glycosylated form of human immunoreceptor NKp30
Kalousková, Barbora ; Vaněk, Ondřej (advisor) ; Moserová, Michaela (referee)
NK cells (natural killer cells) play a key role in innate immunity. Their function is to recognize and kill infected, stressed or malignantly transformed cells. A range of surface receptors promotes this recognition. Cytotoxic mechanisms, lead to induction of apoptosis in the target cell. Receptor NKp30 is one of cytotoxic reaction triggers. It belongs, with NKp46 and NKp44, to NCR (natural cytotoxicity receptors) family. This work describes preparation of NKp30 receptor with natural and simple glycosylation in expression system of human embryonic kidney cell line 293 (HEK293). It was found that glycosylated receptor NKp30 forms noncovalent oligomers. Equilibrium is formed in solution between oligomers and monomers. Oligomerization depends on glycosylation, deglycosylated protein doesn't form oligomers. A recombinant endoglycosidase ENDO F1 was prepared for purposes of deglycosylation.
|
guest ::
