| |
| |
|
Large Extracellular Vesicles in Cell Culture and Blood: Role in Prion Transmission and Detection by Flow Cytometry
Soukup, Jakub
Priony (PrP) jsou hlavní příčinou neurodegenerativních onemocnění jako je ovčí klusavka, bovinní spongiformní encefalopatie, chronické strádání jelenovité zvěře a lidská Creutzdfeld- Jacobova choroba. Přestože se buněčný PrP (PrPC ) účastní mnoha buněčných procesů, jeho přesná funkce není dosud známá. Onemocnění vzniká akumulací patologické formy PrP (PrPTSE ), která vzniká přímým kontaktem PrPTSE a PrPC . PrP je ukotvený v membráně pomocní GPI a může být přenášen mezi buňkami kontaktem, tzv. "tunnelling nanotubes" nebo extracelulárními vezikuly (EV). Frakce EV se dělí na exosomy, mikrovezikuly a apoptotická tělíska rozdílnou biogenezí. PrPTSE se nachází v exosomech a mikrovezikulech, ale tyto frakce EV nikdy nebyly mezi sebou porovnány. Prvním cílem dizertační práce je porovnat obsah PrP, prion konvertující aktivitu a infektivitu v těchto frakcích EV na CAD5 a N2a-PK1 buněčných modelech infekce. Centrifugací jsme izolovali frakci velkých EV (20 000× g) a malých EV (110 000× g) z kondiciovaného média. EV jsme charakterizovali pomocí kryo-elektronové mikroskopie a western blotem s markery Alix, TSG-101, CD63, CD9 a HSP70. Kontaminace z jiných buněčných kompartmentů byla ověřena kalnexinem. Frakce EV se mezi sebou lišili obsahem β-1 integrinu. Malé EV mají sníženou a velké EV mají zvýšenou hladinu...
|
|
Large Extracellular Vesicles in Cell Culture and Blood: Role in Prion Transmission and Detection by Flow Cytometry
Soukup, Jakub ; Holada, Karel (vedoucí práce) ; Šebestová Janoušková, Olga (oponent) ; Živný, Jan (oponent)
Priony (PrP) jsou hlavní příčinou neurodegenerativních onemocnění jako je ovčí klusavka, bovinní spongiformní encefalopatie, chronické strádání jelenovité zvěře a lidská Creutzdfeld- Jacobova choroba. Přestože se buněčný PrP (PrPC ) účastní mnoha buněčných procesů, jeho přesná funkce není dosud známá. Onemocnění vzniká akumulací patologické formy PrP (PrPTSE ), která vzniká přímým kontaktem PrPTSE a PrPC . PrP je ukotvený v membráně pomocní GPI a může být přenášen mezi buňkami kontaktem, tzv. "tunnelling nanotubes" nebo extracelulárními vezikuly (EV). Frakce EV se dělí na exosomy, mikrovezikuly a apoptotická tělíska rozdílnou biogenezí. PrPTSE se nachází v exosomech a mikrovezikulech, ale tyto frakce EV nikdy nebyly mezi sebou porovnány. Prvním cílem dizertační práce je porovnat obsah PrP, prion konvertující aktivitu a infektivitu v těchto frakcích EV na CAD5 a N2a-PK1 buněčných modelech infekce. Centrifugací jsme izolovali frakci velkých EV (20 000× g) a malých EV (110 000× g) z kondiciovaného média. EV jsme charakterizovali pomocí kryo-elektronové mikroskopie a western blotem s markery Alix, TSG-101, CD63, CD9 a HSP70. Kontaminace z jiných buněčných kompartmentů byla ověřena kalnexinem. Frakce EV se mezi sebou lišili obsahem β-1 integrinu. Malé EV mají sníženou a velké EV mají zvýšenou hladinu...
|
|
Spotřebitelský úvěr
Soukup, Jakub ; Elischer, David (vedoucí práce) ; Dvořák, Jan (oponent)
Spotřebitelský úvěr Abstrakt Tato diplomová práce se se věnuje tématu spotřebitelského úvěru, přičemž se v rámci tohoto tématu zaměřuje na systematický a komplexní rozbor vývoje právní úpravy spotřebitelského úvěru nejen na území České republiky, ale také se zaměřením na podstatné právní předpisy Evropského společenství a Evropské unie. Práce je dále zaměřena na zodpovězení tezí vytyčených v úvodu práce, které se zaměřují zejména na problematiku posouzení úvěruschopnosti spotřebitele a problematiku regulace poskytovatelů a zprostředkovatelů a jejich dopad na činnost těchto subjektů v praxi. Za tímto účelem je práce strukturována do sedmi částí, ve kterých je systematicky popsána právní úprava spotřebitelského úvěru a jsou podrobněji rozebrány její určité podstatné či problematické pasáže. V první části práce jsou vymezeny základní pojmy, které jsou využívány ve všech aspektech právní úpravy spotřebitelského úvěru a souběžně i v této práci. Navazující je dále druhá část, která pojednává o historickém vývoji spotřebitelského úvěru od jeho úplných počátků, přes rozvoj právní úpravy spotřebitelského úvěru v komunitárním právu, až po rozvoj právní úpravy spotřebitelského úvěru v našem právním řádu. Ve třetí části práce se věnuji analýze obecné právní úpravy spotřebitelského úvěru a souvisejících institutů...
|
| |
| |
|
Optimization of methods for analysis of early steps of mouse polymavirus life cycle
Soukup, Jakub ; Španielová, Hana (vedoucí práce) ; Němečková, Šárka (oponent)
Abstrakt Myší polyomavirus je typickým zástupcem čeledi Polyomaviridae a slouží jako model pro studium virové infekce lidskými patogenními polyomaviry. Minoritní proteiny virové kapsidy se ukázaly jako nezbytné pro efektivní zahájení infekce. Za účelem studia jejich role v časných fázích infekce jsme využili nový Cre-LoxP systém produkce virové mutanty postrádající minoritní proteiny. Virus produkovaný touto cestou byl porovnán s virem produkovaným standardní metodou a zjistili jsme, že oba systémy umožňují produkci mutantního viru se srovnatelnou kvalitou a kvantitou. Mutantní virus obsahoval snížené množství virové DNA a tvořil kapsidy se zhoršenou stabilitou. Pro další studium vnitrobuněčného transportu virionů jsme připravili viriony s genomem modifikovaným analogy tymidinu 5-bromo-2'-deoxyuridin (BrdU) a 5-Ethynyl-2'-deoxyuridin (EdU) a optimalizovali metody detekce analogu. Virový genom se zpřístupní detekci 4 hodiny po infekci. Pro ultramikroskopickou analýzu dopravy viru do jádra jsme použili mrazovou substituci. Všechny tyto metody budou použity pro detailní studium odlišných kroků virové infekce. Klíčová slova: Myší polyomavius, minoritní proteiny, mutantní virus, Cre rekombináza, BrdU, EdU, Click...
|
|
Retrocykliny
Soukup, Jakub ; Španielová, Hana (vedoucí práce) ; Beranová, Jana (oponent)
Defensiny jsou peptidy s antimikrobiální, antifungální a antivirovou aktivitou. Defensiny se pravděpodobně vyskytují u všech druhů obratlovců. Existují tři podrodiny defensinů - α, β a θ-defensiny. α-defensiny existují pouze u savců a θ-defensiny byly popsány pouze u makaků a paviánů, ale jejich geny se vyskytují v genomech všech opic starého světa kromě podčeledi Homininae. U lidí k produkci θ-defensinů nedochází, kvůli předčasnému stop kodonu v jejich kódující sekvenci. Nicméně lidské θ-defensiny byly vyrobeny synteticky in vitro a pojmenovány retrocykliny. Retrocykliny si zachovávají nejen antimikrobiální aktivitu, ale vykazují i neobvyklou aktivitu antivirovou. Retrocykliny úspěšně chrání buňky před infekcí HIV, HSV, chřipky a viru horečky dengue bez detekovatelné cytotoxicity k hostitelským buňkám. Retrocyklin RC-101 je blízko klinickým testům jako mikrobicid, který zabraňuje heterosexuálnímu přenosu HIV-1.
|