|
|
Genová imunoterapie nádoru: DNA vakcíny proti HPV16
Poláková, Ingrid ; Šmahel, Michal (vedoucí práce) ; Hejnar, Jiří (oponent) ; Reiniš, Milan (oponent)
dizertačnej práce Génová imunoterapia nádorov: DNA vakcíny proti HPV 16 Mgr. Ingrid Poláková Cervikálny karcinóm (CC), asociovaný s infekciou ľudským papilomavírusom (HPV), predstavuje druhé najrozšírenejšie nádorové ochorenie žien. V súčasnej dobe sú na trhu dve profylaktické vakcíny, ktoré sú schopné navodiť ochranu proti HPV 16 a HPV 18. Profylaktické vakcíny však nemôžu poslúžiť ako liečba už existujúcich HPV infekcií. Preto je žiaduce vyvinúť terapeutické vakcíny, ktoré by si poradili aj s rastúcimi nádormi. Virálne onkoproteíny E6 a E7 sú vhodným cieľom pre vývoj vakcín proti HPV. DNA vakcíny sa postupom času stali účinným prostriedkom pre vývoj vakcín proti nádorovým ochorením, teda aj proti CC. Bohužiaľ ich účinnosť na väčších zvieratách a hlavne ľuďoch je nízka. V súčasnej dobe prebieha niekoľko štúdií, ktoré sa sústreďujú na zvýšenie účinnosti a bezpečnosti DNA vakcín proti ľudským papilomavírusom. V tejto práci bola hodnotená imunogénnosť DNA vakcín proti HPV 16 po fúzii génov E7 a E6 s génom GUS a po ich podaní pomocou génovej pištole. Zvýšená hladina produkcie delečných mutantov E7GGG.GUS a fúzneho proteínu GUS.E7GGG po imunizácii s týmito vakcínami zvýšila produkciu protilátok špecifických proti E7, ale nezlepšila odpoveď cytotoxických T lymfocytov. Pripojenie signálnej sekvencie k...
|
|
|
Cytoskelet v pohybech myšího polyomaviru od povrchu buňky k buněčnému jádru
Klímová, Lucie ; Forstová, Jitka (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent)
6 Roles of cytoskeleton in mouse polyomavirus trafficking ABSTRACT: Mouse polyomavirus (mPyV) is small non-enveloped DNA virus. Its endocytic pathway is studied for a potential utilisation of polyomaviral virus-like particles in gene therapy and/or immunotherapy. mPyV enter cells by internalisation into smooth monopinocytic vesicles. During it's journey through the cell, it pass through early endosomes, and at the time 3 hours post infection, it is localised in endoplasmic reticulum and recycling endosomes. Many aspects of mPyV trafficking and nuclear entry are not clear yet. Time-lapse live imaging fluorescence confocal microscopy was used to describe the mouse polyomavirus intracellular movements. For these studies, we utilised mPyV fluorophore-labeled virions and cells expressing GFP-tagged g-actin or alpha-tubulin. Some virion-loaded vesicles were seen to move with actin organised into dynamic structures. Some of these structures resembled actin comets created by Listeria or vaccinia virus. At the same time post infection (40-60 min post infection), movement of the virion loaded vesicles along mirotubules was observed suggesting the simultaneous involvement of actin and tubulin during mPyV trafficking. Dynamitin, a dominant negative inhibitor of dynein-dynactin function reduced mPyV infection. Taken...
|
|
|
Posílení účinku DNA vakcíny proti karcinomu děložního hrdla pomocnými epitopy
Peřinová, Lucie ; Brábek, Jan (oponent) ; Šmahel, Michal (vedoucí práce)
Původci rakoviny děložního hrdla jsou viry ze skupiny lidských papillomavirů (HPV). Na transformaci infikované buňky v buňku nádorovou se nejvíce podílejí jejich onkoproteiny E6 a E7, a proto se právě na ně zaměřuje vývoj terapeutických DNA vakcín. Pro posílení jejich účinnosti se pracuje na definování pomocných epitopů aktivujících CD4+ T buňky, které se podílejí na navýšení počtu efektorových cytotoxických T lymfocytů a tedy i eliminaci nádoru. Pro celkové posílení imunitní odpovědi se již využívají epitopy pocházející přímo z onkoproteinů, syntetické epitopy, případně bakteriální epitopy nespecificky aktivující imunitní reakce. Prozatím nebylo provedeno dostatečné množství srovnávacích prací, které by určily jednoznačně nejefektivnější pomocné epitopy. Vývoj se spíše ubírá směrem ke kombinaci více variant za využití imunostimulačních molekul.
|
|
| |
|
|
Epigenetická regulace exprese imunoaktivních genů u nádorových buněk
Hejhal, Tomáš ; Reiniš, Milan (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent)
Nádorové bujení má základ v chybné funkci genů, které ovlivňují dělení buněk, apoptózu nebo migraci buněk z jednoho místa v těle do jiného. Během vzniku nádoru mohou být umlčeny geny, které fungují jako brzda buněčného dělení nebo naopak aktivovány geny, které zvyšují schopnost buněk dělit se a odolávat programované buněčné smrti. Mechanismů, které ovlivňují funkci genů během vzniku nádoru, existuje několik. Významou roli hrají mutace genů a poškození chromozomů. Kromě toho mohou být geny inaktivovány epigenetickými mechanismy, které zahrnují modifikace histonů a methylace cytosinu v CpG párech lokalizovaných v kontrolních oblastech genů. Cílem této práce bylo objasnit, zda epigenetické mechanismy ovlivňují u vybraných nádorových linií expresi genů, které jsou důležité pro interakci nádorových buněk s imunitním systémem. Je známo, že u některých nádorů dochází pod selekčním tlakem imunitního systému ke změně exprese povrchových molekul, které jsou podstatné pro kontakt s buňkami imunitního systému. V teoretické části této práce jsou shrnuty informace o epigenetických mechanismech a jejich vlivu na geny zásadní pro tvorbu nádorů. Dále jsou uvedeny poznatky z odborné literatury na téma nádorová imunologie. Jako hlavní experimentální přístup bylo zvoleno použití inhibitorů, které ovlivňují methylaci DNA a...
|
|
|
Improvement of retroviral vectors for efficient gene transfer
Šenigl, Filip ; Hejnar, Jiří (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent) ; Ruml, Tomáš (oponent)
Souhrnvýsledků Retrovirovévektory, kteréjsou sďropnéefektivně přenášetgenetickou informaci do cilových buněk a integrovď se do jejich DNd jsou velice užitečrrépro mnoho experimentri ďe poúý stabitnípřenos geirůještěnemuslbý dostačující.V expresi přenesenýchgenůhrají významnou roli takéepigenetickémodifikace. Exprese mužebý přerrršenajiž v momantě integrace DNA vektoru nebo můžedochrázetkpostupnémuvypinaní kopii vektoru během ďouhodobých experimentů.Rebovirové vektory se mohou ve stabilitě exprcse výzrramně lišit ďe posfupnémutranskripčnímuumlčováni poďéhají všechny. Proto je zapotřebí mďifikovat retovirové vektory za účelemstabilizace jejich exprese v ciloých buňkóch. stabi|ní expreseje důIeátrizejmerravoblasti genovéterapie,kde je opakovrini bansdukce častonemožnénebove|mi komplikované. Retrovirovévektory odvozenéod ASLV jsou v savčíchbuňkách velmi účinně umlčovárry.Testova|ijsme moŽnoststabilizovatexpresi těchto vektorůinzerci vnitřního elementuCpG ostrovu (IE). cpc ostrovyjsou aliímésvou schopnostiudržovatpřilehlé promotorytranskripčněaktivní'Konstruova|ijsme vnitřní elementCpG' ostrovagenu pro adenosinfosforibosyltransferrázuo déIcel20bp' Tentoe|ementbyl vloŽenv sensei antisense orientacido tříruznýchm|stuvnitř LTR (nazačátekoblastiU3, mezi enhancerya pÍomotora na začátekoblasti U5)' Týo vektory...
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.