|
| |
|
| |
|
|
Využití kapilárních elektromigračních metod ve farmaceutické analýze
Petriška, Ivan ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Urbánek, Marek (oponent) ; Blešová, Marie (oponent)
8 SHRNUTÍ Tato práce představuje možnosti využití tří účinných separačních technik založených na elektromigraci analytů, jako jsou kapilární izotachoforéza (ITP), kapilární zónová elektroforéza (CZE) a micelární elektrokinetická chromatografie (MEKC), v analýze farmaceuticky významných látek a to jak syntetického původu v matrici léčivého přípravku, tak především přírodního původu v extraktech léčivých rostlin resp. rostlinných silicích. V teoretické části je věnován poměrně velký prostor popisu těchto metodik a zejména jejich širokému uplatnění ve farmaceutické analýze přírodních látek (tabulky 1, 2 a 3) a dále možnostem ovlivnění separace elektricky neutrálních analytů vlivem přídavku komplexujícího činidla či povrchově aktivní látky do základního elektrolytu. Součástí práce je také přehledná rešeršní publikace (příloha I), shrnující uplatnění elektromigračních metod v kontrole kvality lékopisných rostlinných drog. První experimentální práce (příloha II) ukazuje na možnost použití kapilární izotachoforézy ve farmaceutické analýze ke kontrole obsahu léčivé látky. Stanovení významného sympatomimetika tetryzolinu a antihistaminika antazolinu v hromadně vyráběných nosních a očních kapkách ukazuje, že vyvinutá, optimalizovaná a validovaná ITP metoda poskytuje přesné a správné výsledky. Hlavní výhody navržené...
|
|
|
Sequential injection analysis capability in automation of analytical processes
Novosvětská, Lucie ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent) ; Hraníček, Jakub (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát (příjmení/rodné příjmení): Mgr. Lucie Novosvětská / Mgr. Lucie Zelená Školitel: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Petr Chocholouš, Ph.D. Název dizertační práce: Potenciál sekvenční injekční analýzy v automatizaci analytických postupů Tato dizertační práce, předkládaná jako komentovaný soubor čtyř vědeckých publikací a jednoho probíhající projektu, představuje čtyři nové aplikace v oblasti průtokových metod a jednu aplikaci v oblasti separačních metod, použitou pro analytickou část komplexní farmakologické studie. Tři práce z oblasti farmaceutické analýzy byly optimalizovány, validovány a publikovány v odborných časopisech. Tyto práce zahrnovaly: a) Automatizaci permeačních studií v systému sekvenční injekční analýzy s připojenou liberační jednotkou a provedení experimentů s živými buňkami. b) Farmakologickou studii antiretrovirotika efavirenzu zahrnující jeho stanovení pomocí rychlé chromatografické metody ve třech typech matricových vzorků - v médiu z permeačních studií na buněčných modelech, v Krebsově roztoku použitém při perfuzích placenty potkanů, a v lyzátech z tkáně placenty. c) Stanovení lovastatinu, látky snižující hladinu cholesterolu v krvi, v doplňcích stravy pomocí...
|
|
|
Stanovení biologicky aktivních látek metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminiscenční detekcí
Štěpánková, Lucie ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
1.1 Souhrn Byla navržena a optimalizována jednoduchá a rychlá metoda pro stanovení norepinefrinu metodou sekvenční injekční analýzy s chemiluminescenční detekcí. Optimalizovanými parametry byly objemy a koncentrace vzorku norepinefrin bitartrátu a reagencií, průtoková rychlost, složení nosného proudu a napětí na fotonásobiči. Optimální objem vzorku byl 80 μl a optimální koncentrace činidel (a aspirované objemy) byly - 25 mM polyfosfát sodný (44 μl), 0,1 M kyselina sírová (24 μl) a 1 mM manganistan draselný (21 μl). Optimální průtoková rychlost (pro průchod detektorem) byla 91 μl/s a napětí na fotonásobiči bylo 450 V. Jako nosný proud byla použita ultračistá voda. Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu koncentrací 1 - 40 μmol/l norepinefrin bitartrátu. Parametry kalibrační křivky y = kx + q (kde y je intenzita chemiluminiscence v nA a x je koncentrace norepinefrin bitartrátu v μmol/l) byly vypočítány metodou lineární regrese. Směrnice k byla 33.923 a absolutní člen q byl 34.839. Korelační koeficient byl 0,9997. Relativní směrodatné odchylky byly 2.78 a 1.18 % (n = 10) pro stanovení norepinefrin bitartrátu ve standardních roztocích o koncentracích 4.75 a 18.98 μmol/l. Limit detekce (LOD) byl 0.28 μmol/l a limit kvantifikace (LOQ) byl 3.34 μmol/l. Navrhovaná SIA metoda byla použita pro stanovení obsahu...
|
|
|
Optimalizace stanovení septonexu ve farmaceutických přípravcích metodou kapilární zónové elektroforézy s využitím organických rozpouštědel jako aditiv v základním elektrolytu
Šindelková, Martina ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Pospíšilová, Marie (oponent)
OPTIMALIZACE STANOVENÍ SEPTONEXU VE FARMACEUTICKÝCH PŘÍPRAVCÍCH METODOU KAPILÁRNÍ ZÓNOVÉ ELEKTROFORÉZY S VYUŽITÍM ORGANICKÝCH ROZPOUŠTĚDEL JAKO ADITIV V ZÁKLADNÍM ELEKTROLYTU Pro stanovení septonexu ve farmaceutických přípravcích byla vyvinuta nová metoda kapilární zónové elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí. Optimální podmínky pro separaci a stanovení septonexu byly následující: základní elektrolyt 30mM MES upravený 200mM TRISem na pH = 7,0, který obsahuje (2-hydroxypropyl)-β-cyklodextrin o koncentraci 12,5mg/ml a 20% (objemových) acetonitrilu, pracovní napětí 25kV, teplota termostatu kapiláry 25řC, nástřik vzorku 6 sekund při tlaku 50mbar. Jako vnitřní standard byl použit arginin (200µg/ml). Pík septonexu byl dostatečně separován od píku vnitřního standardu i od EOF. Analýza byla provedena v křemenné kapiláře (vnitřní průměr 50µm, celková délka 75cm a délka k detektoru 45cm). Analýza trvala méně než 5 minut, s promýváním kapiláry méně než 13 minut. Kalibrační závislost byla pro septonex lineární v rozsahu 75µg/ml - 400µg/ml, korelační koeficient r = 0,9997. LOD byl 13,5μg/ml a LOQ byl 45μg/ml. Metoda je použitelná jak pro kvalitativní, tak pro kvantitativní analýzu HVLP obsahujících septonex.
|
|
|
Chemiluminiscenční hodnocení celkové antioxidační kapacity potravin
Vlčková, Jitka ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Solich, Petr (oponent)
Diplomová práce 2014 Abstract_CZE Jitka Vlčková SOUHRN Práce se zabývá měřením a hodnocením celkové antioxidační kapacity (TAC) ve vzorcích červeného vína ošetřených čtyřmi čeřícími činidly (třemi různými typy želatiny a polyvinylpolypyrrolidonem) v koncentracích 10, 20 a 40 g/hL. Hlavním cílem bylo zjistit, jak čeřidla v různých dávkách ovlivňují TAC. Druhá část se zabývá vztahy mezi změnami TAC a obsahy jednotlivých antioxidačních komponent ve vzorcích (celkového množství polyfenolů, antokyanů, kyseliny gallové a nízkomolekulárních fenolů). Celková antioxidační kapacita byla hodnocena metodou TEAC (Trolox equivalent antioxidant capacity assay). Teoretická část diplomové práce stručně shrnuje základy o luminescenci, zaměřené na chemiluminiscenční reakce. Teorie volných radikálů a antioxidanty, zejména ty, které jsou zahrnuty v červeném víně, jsou také popsány. Proces vinařství, především čiření je také obsažen v této části. Experimentální část popisuje metody stanovení celkové antioxidační kapacity, princip metody CL (chemiluminescent) assay založené na systému luminol/křenová peroxidáza. Výsledky ukazují rozdílné chování polyvinylpolypyrolidonu (PVPP) oproti želatině. Zatímco želatina snižuje TAC, PVPP má tendenci působit opačně. Z hlediska koncentrace se ukázalo, že rozdíly v TAC mezi vzorky obsahujícími...
|
|
|
Stanovení sibutraminu ve farmaceutických přípravcích metodou kapilární zónové elektroforézy
Korejsová, Tereza ; Pospíšilová, Marie (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát Mgr. Tereza Korejsová Konzultant doc. RNDr. Marie Pospíšilová, CSc. Název rigorózní práce Stanovení sibutraminu ve farmaceutických přípravcích metodou kapilární zónové elektroforézy Byla vyvinuta metoda kapilární zónové elektroforézy (CZE) s přídavkem sulfatovaného β - cyklodextrinu jako chirálního selektoru pro kvalitativní i kvantitativní analýzu R - a S - sibutraminu (SIB). Metoda byla využita na kontrolu obsahu racemického sibutraminu v přípravcích Meridia®, Lindaxa®, Sibutramin Sandoz® a Sibutramin Teva®. Separace byla optimalizována testováním těchto parametrů: typ pufru a jeho koncentrace, pH pufru, druh a koncentrace chirálních selektorů, teplota separace a separační napětí. Analýzy byly provedeny v křemenné kapiláře pokryté polyakrylamidem (PAA) o celkové délce 30 cm a vnitřního průměru 50 µm. Optimální podmínky separace enantiomerů sibutraminu jsou: 100 mM fosfátový pufr s pH 3,0 (upravený pomocí TRIS) obsahující 2,0 mM S-β - CD. Separace probíhala při teplotě 180 C a separačním napětí 15 kV. Celková doba analýzy je okolo 5-6 minut. Byla provedena validace metody z hlediska parametrů linearity (kalibrační rozmezí 5 - 250 µg/ml, korelační koeficienty R = 0,997185 pro R-SIB, resp. 0,998688...
|
|
|
Využití kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro analýzu proteinů
Vatrasová, Kateřina ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Jáč, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Kateřina Vatrasová Školitel: doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Konzultant: PharmDr. Klára Petrů, Ph.D. Název diplomové práce: Využití kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro analýzu proteinů V současnosti existují různé způsoby stanovení bílkovin. Cílem této práce bylo vyvinout, optimalizovat a charakterizovat metodu kapilární elektroforézy s vodivostní detekcí pro analýzu modelové směsi proteinů (α-laktalbumin, β-laktoglobulin, karboanhydráza, lysozym a ribonukleáza) a porovnat s konvenční UV detekcí. Mezi zkoumané podmínky patřily vliv pokrytí vnitřní stěny kapiláry na adsorpci proteinů, dále složení a koncentrace vhodného separačního elektrolytu, vliv napětí a teploty. K analýze byla využita křemenná kapilára o délce 50 cm (efektivní délka pro vodivostní detektor 35cm, pro UV detektor 41,5 cm) a vnitřním průměru 50 μm. V případě UV detekce byla vybrána vlnová délka 210 nm. Vhodným způsobem úpravy kapiláry bylo statické pokrytí vnitřní stěny několikanásobnou vrstvou iontových polymerů (polybren-dextran sulfát- polybren). Rozdělení směsi pěti proteinů bylo dosaženo v základním elektrolytu 1,5M kyselině octové (pH 2). Separace probíhala při napětí -25 kV a teplotě 25 řC....
|
|
|
Stanovení septonexu ve farmaceutických přípravcích metodou kapilární zónové elektroforézy s vodivostní detekcí
Šindelková, Martina ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Pospíšilová, Marie (oponent)
STANOVENÍ SEPTONEXU VE FARMACEUTICKÝCH PŘÍPRAVCÍCH METODOU KAPILÁRNÍ ZÓNOVÉ ELEKTROFORÉZY S VODIVOSTNÍ DETEKCÍ Byla vyvinuta nová metoda kapilární zónové elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro stanovení septonexu ve farmaceutických přípravcích. Optimální podmínky pro separaci a stanovení septonexu byly následující: základní elektrolyt 30mM MES upravený 20mM TRISem na pH = 7,0, který obsahuje (2-hydroxypropyl)-β-cyklodextrin o koncentraci 12,5mg/ml, 25kV, 25řC, nástřik 15 sekund při tlaku 50mbar. Jako vnitřní standard byl použit N,N-dimethylethanolamin (200µg/ml). Pík septonexu byl dostatečně separován od píku vnitřního standardu i od EOF. Analýza byla provedena v křemenné kapiláře (vnitřní průměr 50µm, celková délka 75cm a délka k detektoru 45cm). Analýza trvala méně než 4 minuty, s promýváním kapiláry méně než 16 minut. Kalibrační závislost byla pro septonex lineární 75µg/ml - 300µg/ml, korelační koeficient r = 0,9976. LOD byl 9μg/ml a LOQ byl 30μg/ml. Při stanovení septonexu v reálném farmaceutickém přípravku byla pozorována špatná opakovatelnost ploch analytu, způsobená patrně nedokonalým potlačením adsorpce septonexu na vnitřní stěnu křemenné kapiláry. Tento problém bude moci být pravděpodobně vyřešen přídavkem organických rozpouštědel do elektrolytu nebo použitím modifikovaných...
|
host ::
RSS.