|
|
Hodnocení exprese iNOS a HO-1 v aortě myší s vysokými hladinami sérového endoglinu pomocí Western blot analýzy.
Tysoňová, Kristýna ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Hodnocení exprese iNOS a HO-1 v aortě myší s vysokými hladinami sérového endoglinu pomocí Western blot analýzy Autor diplomové práce: Kristýna Tysoňová Vedoucí práce: PharmDr. Jana Rathouská, Ph.D. Cíl práce: Záměrem této diplomové práce bylo zhodnotit rozdíly exprese iNOS a HO-1 (markery nitračního/oxidačního stresu) v aortě dvou skupin geneticky modifikovaných myší na cholesterolové dietě, které se lišily hladinami lidského sérového endoglinu. Metody: Pro studii se použily 6 měsíců staré transgenní myší samice kmene CBAxC57BL/6J s vysokou hladinou lidského solubilního endoglinu. Pomocí ELISA analýzy byla stanovena hladina tohoto endoglinu a myši byly rozděleny do dvou srovnávaných skupin. Sledovaná skupina (Sol-Eng+ ) vykazovala vysoké hladiny lidského solubilního endoglinu a jejich sourozenecké myši s nízkými (nedetekovatelnými) plazmatickými hladinami lidského endoglinu byly použity jako myši kontrolní. Po dobu 3 měsíců byly obě skupiny krmeny speciální stravou s vysokým obsahem tuku a cholesterolu. Biochemickou analýzou byla zjištěna hladina celkového cholesterolu. Pro detekci a kvantifikaci exprese markerů iNOS a HO-1 byla použita analýza Western blot. Výsledky: Po tříměsíční...
|
|
|
Vliv C-reaktivního proteinu na endotel v aortě spontánně hypertenzních potkanů
Kosán, Aleš ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
VLIV C-REAKTIVNÍHO PROTEINU NA ENDOTEL V AORTĚ SPONTÁNNĚ HYPERTENZNÍCH POTKANŮ Diplomová práce Autor: Aleš Kosán Studijní obor: Farmacie Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Endotelová dysfunkce a chronický zánět jsou faktory hrající roli v patogenezi metabolického syndromu. Tato práce je koncipována jako pilotní studie, jejímž cílem je navrhnout další směr zkoumání v oblasti vlivu C-reaktivního proteinu na endotel. Pomocí metody Western blot byla sledována exprese čtyř látek, v minulosti spojených se vznikem endotelové dysfunkce: endotelinu-1, hemoxygenázy-1, endoglinu a fosforylované syntázy oxidu dusnatého. Měření bylo provedeno na vzorcích z homogenizovaných potkaních aort transgenních spontánně hypertenzních potkanů exprimujících lidský C reaktivní protein. Jako kontrolní skupina byl využit kmen standardních spontánně hypertenzních potkanů. Detekce byla provedena pomocí chemiluminiscenčního substrátu na RTG filmy a získaná data byla semikvantitativně vyhodnocena denzitometrickou metodou. U endoglinu jsme zaznamenali zvýšenou expresi v hodnotě 186,3 % oproti kontrolní skupině. Exprese fosforylované formy endotelové syntázy představovala 325,6 % v porovnání s kontrolní skupinou. U hemoxygenázy-1 byl nárůst exprese minimální (109,0 %) a exprese endotelinu-1 byla...
|
|
|
Role of Gq-coupled receptors in brown adipocytes
Čajková, Michaela ; Kovařík, Miroslav (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biologických a lékařských věd Rheinische Friedrich-Wilhelms-University Bonn, Institute of Pharmacology and Toxicology Kandidát: Michaela Čajková Školiteľ: PharmDr. Miroslav Kovařík, Ph.D. Konzultant: Dr. Linda Sarah Hoffmann Názov diplomové práce: Úloha receptorů spřažených s Gq proteiny v hnědých adipocytech V mojej diplomovej práci, sme sa zamerali na štyri receptory spojené s Gq proteiny (F2R, α1DAR, LPHN1, TSHR) v hnedých adipocytoch (BAs), ktoré boli identifikované v screene, s najvyššou expresiou v nezrelých a zrelých BAs. Cieľom bolo potvrdiť predpoklad, že receptor pre thyroidný stimulujúci hormón (TSHR) hrá kľúčovú rolu v diferenciácií BAs a že F2R, LPHN1 a α1D-AR by mohli byť pre BAs dôležité. V našej štúdii sme zisťovali genetickú expresiu týchto štyroch receptorov v BAs pomocou analytických metód kvantitatívna reverzná-transkripcia polymerázová reťazová reakcia (qRT-PCR) a Western blot. Výsledky z analýz ukázali, že expresia TSHR bola zvýšená v zrelých BAs, znamená to, že TSHR indukuje dozrievanie BAs. BAs infikované s vlásenkovou RNA (sh-RNA) proti TSHR sa diferencovali podstatatne menej, čo sme dokázali aj pomocou Oil Red-O barvenia. Expressia adipocytného Proteinu 2 (aP2), peroxisome proliferator-activated...
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během intrahepatální cholestázy u potkanů
Kolouch, Jan ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Cermanová, Jolana (oponent)
Jan Kolouch Změna exprese transportních proteinů během intrahepatální cholestázy u potkanů Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem diplomové práce bylo ověření cholestatického poškození jater prostřednictvím biochemické analýzy plazmy a analýzy exprese hlavních jaterních transportních proteinů (Ntcp, Oatp1a4, Bsep, Mrp2, Mrp3, Mrp4) pro uptake a eflux látek na úrovni mRNA. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320 g), byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina (LPS-K) a skupina LPS (lipopolysacharid podaný jednorázově i.p., 4 mg/kg). Vzorky krve a jater byly odebrány 12 hodin po aplikaci LPS. Biochemická analýza plazmy byla provedena pomocí Cobas Integra ® 800 a GC/MS. Změny exprese transportních proteinů na úrovni mRNA byly hodnoceny qRT-PCR. Výsledky: V porovnání s kontrolou byla ve skupině LPS pozorována významně zvýšená plazmatická koncentrace žlučových kyselin a zvýšená aktivita enzymů ALP a GMT. U žlučových kyselin došlo ke zvýšení koncentrace na 818 %, aktivita ALP byla zvýšená na 311 % a aktivita GMT na 2167 %. Intrahepatální cholestáza vedla k významnému poklesu exprese jaterních transportních proteinů na úrovni mRNA - Ntcp na 4,6 %, Oatp1a4 na 2,2 %, Mrp2 na 1,7 % a Bsep na 25 %. Závěr: Z...
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů I
Šindelářová, Jana ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Zemánková, Lenka (oponent)
Jana Šindelářová Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů I Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem diplomové práce bylo potvrzení cholestatického poškození jater navozeného podvazem žlučovodu v trvání 28 dnů pomocí biochemické analýzy séra a analýzy exprese jaterních transportérů pro uptake látek Ntcp, Oatp1a1, Oatp1a4, Oatp1b2 a Oat2 na úrovni mRNA i proteinu u potkanů. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320g) byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina sham-operovaných potkanů (Sham) a skupina s podvazem žlučovodu trvajícím 28 dní (BDO). Biochemická analýza séra byla provedena pomocí Cobas Integra ® 800. Změny v expresi mRNA a proteinů byly hodnoceny qRT-PCR a Western blot analýzou. Výsledky: Hladina žlučových kyselin byla zvýšená u BDO skupiny zvířat na 454 %, hladina celkového bilirubinu na 4111 % a hladina konjugovaného bilirubinu na 7313 % v porovnání s kontrolní skupinou. Aktivita ALP byla zvýšena na 238 %, aktivita GMT na 2826 %, aktivita ALT na 1200 % a aktivita AST na 1387 % oproti kontrolní skupině. U BDO skupiny zvířat bylo pozorováno snížení hladiny mRNA u Ntcp transportéru na 51 % a Oatp1a4 proteinu na 38 %. Změny hladiny Oatp1a1, Oatp1b2 a Oat2 mRNA...
|
|
|
Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů II
Skořepová, Zuzana ; Doleželová, Eva (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
4 Abstrakt Zuzana Skořepová Změna exprese transportních proteinů během obstrukční cholestázy u potkanů II Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíle práce: Cílem diplomové práce bylo ověření cholestatického poškození jater navozené podvazem žlučovodu po dobu trvání 28 dnů u potkanů analýzou exprese efluxních transportních proteinů v játrech (Bsep, Bcrp, Mrp2, Mdr1, Mdr2, Mrp3, Mrp4) na úrovni mRNA a proteinu. Metody: Potkani kmene Wistar (n = 6, v každé skupině; 280 - 320 g) byli rozděleni do dvou skupin: kontrolní skupina sham-operovaných potkanů (Sham) a BDO skupina (obstrukce žlučovodu v trvání 28 dnů). Byla provedena analýza exprese efluxních transportních proteinů na úrovni mRNA a proteinu metodou qRT-PCR a Western blot. Výsledky: Ve skupině BDO bylo pozorováno významné zvýšení mRNA exprese u Mdr2 proteinu na 303 %, Mdr1b na 340 % a Mrp3 na 9900 % v porovnání s kontrolní skupinou. Exprese Mrp2 mRNA byla snížena na 42 %. Významné zvýšení exprese proteinu ve skupině BDO bylo prokázáno u Bcrp na 160 %, Mdr1 na 1010 %, Mrp3 na 940 % a Mrp4 na 140 % v porovnání se Sham skupinou. Exprese proteinu byla významně snížena u Mrp2 na 31 %, Bsep na 59 % a Mdr2 na 82 % v porovnání s kontrolní skupinou. Závěr: Z výsledků diplomové práce vyplývá, že při obstrukční...
|
|
| |
|
|
Sledování změn exprese VCAM-1 v experimentální aterogenezi
Mertlíková, Veronika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Kandidát: Veronika Mertlíková Školitel: Doc. PharmDr. Petr Nachtigal Ph.D. Název diplomové práce: Sledování změn exprese VCAM-1 v experimentální aterogenezi. Cílem práce bylo popsat expresi VCAM-1 ve stěně cévy u normocholesterolemických myší kmene C57BL/6J, kterým byla podávána standardní laboratorní dieta a u hypercholesterolemických apoE-deficientních myší. Jako experimentální model jsme použili samce normocholesterolemického myšího kmene C57BL/6J a apoE-deficientní myši ve věku 6 týdnů. Samci myšího kmene C57BL/6J byli krmeni standardní laboratorní dietou a apoE-deficientní myši cholesterolovou dietou po dobu 8 týdnů. Poté byla provedena biochemická analýza vzorků krve a imunohistochemická analýza odebraných segmentů aortálního sinu a aortálního oblouku. V porovnání s kontrolním kmenem myší C57BL/6J byla u apoE-deficientních myší nalezena vysoká hladina cholesterolu v krvi. Aterosklerotické pláty vyvíjí pouze tyto hypercholesterolemické myši. Pomocí imunohistochemických metod jsme sledovali expresi VCAM-1 v aortě u C57BL/6J myší, kde nebyly přítomny aterosklerotické pláty, dále u apoE-deficientních myší v místech bez plátů a v oblasti plátů. V oblastech bez lézí byla exprese VCAM-1 detekována...
|
|
|
Imunohistochemická analýza exprese fosforylované formy Smad2 po podávání atorvastatinu u experimentální aterogeneze
Vybulková, Lucie ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Biologických a lékařských věd Kandidát Mgr.Lucie Vybulková Konzultant Doc.PharmDr.Petr Nachtigal, PhD Název rigorózní práce Imunohistochemická analýza exprese fosforylované formy Smad2 po podávání atorvastatinu u experimentální aterogeneze Cíl práce: Cílem této rigorózní práce bylo popsat vliv atorvastatinu na expresi fosforylované formy Smad2 v aterosklerotických plátech ApoE/LDLr-deficitních myší pomocí imunohistochemických metod. Dále byl sledován vliv atorvastatinu na spektrum lipidů a velikost aterosklerotických plátů. Metody: V experimentu byly použity samice kmene C57BL/6J s dvojitým deficitem apolipoproteinu E a LDL- receptoru. Byla u nich provedena biochemická analýza vzorků krve, histologické barvení olejovou červení k detekci lipidů ve tkáních, kvantitativní analýza velikosti lézí a imunohistochemická analýza vzorků aorty se semilunárními chlopněmi pro detekci exprese Smad2 s využitím metodiky Avidin-Biotin a detekcí pomocí DAB. Výsledky: Při biochemické analýze jsme potvrdili nárůst hladin celkového cholesterolu a VLDL po podávání atorvastatinu. Kvantifikací aterosklerotických lézí byla zjištěna menší velikost lézí u ATV skupiny myší. Imunohistochemickou analýzou jsme prokázali expresi fosforylované formy Smad2 v...
|
|
|
Sledování exprese vybraných markerů kaskády pro transformující růstový faktor u myšího modelu aterosklerózy
Pagurko, Lukáš ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Lukáš Pagurko Sledování exprese vybraných markerů kaskády pro transformující růstový faktor u myšího modelu aterosklerózy. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Sledovali jsme expresi endoteliální NO syntázy (eNOS) v aterosklerotických plátech myší za použití imunohistochemických metod. Cílem bylo prokázat jestli atorvastatin ovlivňuje expresi eNOS bez hypolipidemických účinků. Metody: Použili jsme samice kmene C57BL/6J s dvojitým deficitem apolipoproteinu E (apoE) a LDL-receptoru (LDLr) ve věku 16 týdnů. Byla provedena biochemická analýza vzorků krve a imunohistochemická analýza segmentů tkáně tvořených aortou a horní polovinou srdce. Pro detekci exprese eNOS byla použita metodika EnVision s detekcí pomocí DAB. Výsledky: V biochemické analýze jsme zjistili, že osmitýdenní podávání atorvastatinu statisticky významně zvýšilo hladiny celkového cholesterolu. U všech řezů v kontrolní i atorvastatinové skupině byla pozorována přítomnost aterosklerotických lézí, přičemž u řady z nich byla již nalezena ateromová nekrotická jádra. Podávání atorvastatinu vedlo k signifikantnímu poklesu velikosti aterosklerotických plátů ve srovnání s neléčenou skupinou. Podávání atorvastatinu dále vedlo k výraznému navýšení exprese eNOS zejména na povrchu...
|
host ::
RSS.