|
|
Vliv cytochromů P450 na metabolismus protinádorových léčiv vázaných v apoferritinové nanočástici
Wilhelm, Marek ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Ptáčková, Renata (oponent)
Nádorové onemocnění je druhou nejčastější příčinou úmrtí v České republice hned po kardiovaskulárních chorobách. Nový vědní obor - nanomedicína, ukazuje slibný potenciál v protinádorové léčbě pomocí tzv. nanotransportérů - nanočástice schopných přepravovat jiné molekuly. Cytostatika enkapsulovaná do nanotrasportérů zlepšují farmakokinetické i farmakodynamické vlastnosti léčiva. Tím mohou snížit vedlejší účinky cytostatika na zdravou tkáň. V rámci této diplomové práce byl studován apoferritin - apo-forma ferritinu, jenž se ukazuje jako slibný adept pro klinické využití v protinádorové léčbě. Studován byl vliv jaterních mikrosomů kontrolních a premedikovaných potkanů na biotransformaci cytostatika doxorubicinu ve volné formě i ve formě vázané v apoferritinové nanočástici při pH 7,4. Během biotransformace se tvořili dva různé metabolity - M1 a M2. Všechny použité mikrosomy bez ohledu na použitý induktor se podílí na metabolismus doxorubicinu volného i doxorubicinu vázaného v apoferritinu (ApoDox) podobným způsobem. Výsledky zároveň naznačují, že bez ohledu na formu použitého Dox (volný či vázaný v ApoDox) jsou jaterní mikrosomy potkana schopny jeho metabolické přeměny, a to s prakticky stejnou efektivitou. Rovněž byl studován vliv jaterních mikrosomů, cytochromů P450 rodiny 3A4 v Supersomech™ a...
|
|
|
Exprese a purifikace proteinu s inkorporovaným foto-methioninem - využití světlem iniciovaného síťování k mapování protein-proteinových interakcí
Tichá, Andrea ; Ptáčková, Renata (vedoucí práce) ; Indra, Radek (oponent)
Protein 14-3-3ζ je protein, který hraje velkou roli v regulaci buněčného přežití a ochraňuje buňku před stresem a možnou apoptózou. K zjištění protein-proteinových interakcí pomocí světlem iniciovaného síťování je možné do proteinu inkorporovat foto-aktivovatelnou skupinu. Cílem této práci bylo exprimovat protein s inkorporovaným foto-methioninem v auxotrofních bakteriích E. coli B834 a optimalizovat podmínky exprese. Jelikož foto- methionin je strukturně velmi podobný přirozenému methioninu, tak může být začleněn do proteinu pomocí hostitelské aminoacyl tRNA syntetázy. Bylo studováno, jak se mění míra inkorporace v závislosti na době produkce. Po 3 nebo 6 hodinách bylo dosaženo až 70 % inkorporace foto-methioninu oproti přibližně 50 % po jedné hodině.
|
|
|
Metabolismus tyrosinkinasového inhibitoru cabozantinibu jaterními mikrosomy potkana
Jurečka, Tomáš ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Mrízová, Iveta (oponent)
Cabozantinib je protinádorové léčivo, které bylo schváleno pro léčbu progresivního karcinomu štítné žlázy organizacemi FDA i EMA. Cabozantinib působí jako tyrosinkinasový inhibitor. Blokuje receptory signálních drah důležitých pro růst nádorů. Předkládaná bakalářská práce rozšiřuje poznatky o metabolismu cabozantinibu. V práci je studován metabolismus cabozantinibu jaterními mikrosomy izolovanými z různých laboratorních zvířat (potkan, myš a králík) a vliv jednotlivých izoforem cytochromů P450 (CYP) na metabolismus cabozantinibu jaterními mikrosomy potkana. Práce zahrnuje rovněž optimalizaci metody separace metabolitů cabozantinibu pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) a následnou identifikaci pomocí hmotnostní spektrometrie. Za použití mikrosomů izolovaných z různých laboratorních zvířat byly detekovány až tři metabolity: M1, monohydroxycabozantinib a O-desmethylcabozantinib. Pomocí myších mikrosomů byl cabozantinib metabolizován především na O-desmethylcabozantinib a pomocí králičích mikrosomů především na monohydroxycabozantinib. Mikrosomy z kontrolních potkanů tvořily dva metabolity s převahou monohydroxycabozantinibu. Největší množství metabolitů bylo tvořeno mikrosomy potkanů premedikovaných PCN. Tyto výsledky tak naznačují důležitost cytochromů 3A podrodiny na metabolické...
|
|
|
Příprava protinádorových léčiv vázaných v apoferritinu
Fürbacherová, Pavlína ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent)
Rakovina patří mezi nejzávažnější problémy, se kterými se potýká moderní medicína. V posledních letech došlo k velkému rozvoji nanotechnologií a jejich použití v medicíně. Cílem je zefektivnit podávání léčiv a přispět tak k léčbě nádorových onemocnění. Uložení látky do nanočástice může být řešením při nízké stabilitě léčiva a/nebo může přispět k eliminaci nežádoucích vedlejších účinků. Nanočástice apoferritin, která byla sledována v této bakalářské práci, je forma běžně se vyskytujícího proteinu ferritinu. V jeho struktuře se nachází dutina, do které je možné vložit požadované léčivo. Jeho chemické vlastnosti (vysoká stabilita při extrémních teplotách a široké škále pH, snadná manipulace pomocí změny pH) a také biokompatibilita z něj dělají potenciálně vhodný transportér. V předkládané bakalářské práci byla studována schopnost apoferritinu inkorporovat do své struktury protinádorové léčivo cabozantinib. Jedná se o tyrosinkinázový inhibitor 'používaný pro léčbu karcinomu štítné žlázy, ledvinových buněk a hepatocelulárního karcinomu. Dále byl sledován vliv konečné hodnoty pH na vznik komplexu apoferritinu s cabozantinibem a také stabilita tohoto komplexu. Ze získaných výsledků vyplývá, že apoferritin může enkapsulovat cabozantinib do své vnitřní struktury, přičemž konečná hodnota pH na tento proces...
|
|
| |
|
|
Příprava léčiv vázaných v nanočásticích pro cílenou léčbu rakoviny
Jáklová, Kateřina ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Bělonožníková, Kateřina (oponent)
V této bakalářské práci byla studována schopnost apoferritinu enkapsulovat léčiva vandetanib a etoposid. Vandetanib je protinádorové léčivo používané zejména pro léčbu nádorů štítné žlázy. Patří mezi inhibitory tyrosinkinasových receptorů. Etoposid, který se používá velmi široce, jak pro léčbu krevních maligních chorob, tak pro léčbu solidních nádorů, inhibuje topoizomerasu II, která reguluje topologii DNA. Vedlejší účinky, které léčbu oběma léčivy doprovází, je možné minimalizovat využitím cílené léčby pomocí nanočástic. Apoferritin je přirozeně se vyskytující protein skládající se z 24 ferritinových podjednotek. Ve své struktuře obsahuje dutinu využitelnou pro vložení nejrůznějších látek. Struktura je pozoruhodně stálá a odolná vůči biologicky extrémním teplotám (do 70 řC) a širokému rozsahu pH (pH 2 - 10). Navíc apoferritin dokáže cirkulovat v krvi bez toho, aniž by byl detekován imunitním systém. Šíře použití apoferritinu se zvyšuje schopností modifikace jeho povrchu specifickými ligandy. Byl zjišťován zejména vliv koncentrace apoferritinu a vliv koncentrace cytostatika na výslednou koncentraci enkapsulovaného léčiva v apoferritinu, a dále pak efektivita enkapsulace cytostatika. V případě vandetanibu ze získaných výsledků vyplývá, že při konstantní koncentraci vandetanibu a s rostoucí...
|
|
|
Chemoenzymová synthesa antivirálních profarmak
Tupec, Michal ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Indra, Radek (oponent)
Lipasy našly široké uplatnění při výrobě potravin a v některých odvětvích průmyslu, později i v syntetické organické chemii, kde za velmi mírných podmínek katalyzují hydrolytické a esterifikační reakce v rámci chemie chránicích skupin či za účelem rozlišení enantiomerů. V této práci byla komerčně dostupná lipasa z bakterie Pseudomonas fluorescens imobilizována pomocí sol gelového procesu do organokřemičitých materiálů s propylovým, oktylovým nebo fenylovým substituentem. Nejvyšší hydrolytická aktivita byla zjištěna u enzymu na oktylovém nosiči. Imobilizované enzymy se mezi sebou lišily v hydrolytické aktivitě stanovené na různě dlouhých 4-nitrofenylesterech. Další experimenty ukázaly na poměrně dobrou pH stabilitu enzymů při inkubacích (pH 3 až 11) a dále také dobrou teplotní stabilitu v isooktanu (teploty až 100 řC). Většina organických rozpouštědel nemá výrazný vliv na aktivitu lipasy. Za použití modelové látky ze skupiny acyklických analogů nukleosidů - 9 (2',3' dihydroxypropyl)adeninu (DHPA) - byla provedena řada biokatalytických pokusů. Bylo např. zjištěno, že jako donory acylu jsou nejvhodnější vinylestery, že lipasa vykazuje preferenci k vinylesterům s delším acylem, že esterifikace DHPA nejrychleji probíhá v nepolárních rozpouštědlech a že je možná i v rozpouštědlech, v nichž je tato látka zcela...
|
|
|
Mechanismus enzymové aktivace karcinogenů a léčiv systémem cytochromů P450
Indra, Radek ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Souček, Pavel (oponent) ; Koblihová, Jitka (oponent)
12 Abstrakt Environmentální polutant benzo[a]pyren (BaP) je prokazatelným lidským karcinogenem, který se po aktivaci cytochromy P450 (CYP) kovalentně váže na DNA. V rámci dizertační práce byl studován vliv jednotlivých složek systému monooxygenas se smíšenou funkcí (MFO), systému lokalizovanému v membráně endoplasmatického retikula, na metabolismus benzo[a]pyrenu a na tvorbu aduktů BaP s DNA. Zaměřili jsme se především na porovnání vlivu cyt b5 na tento metabolismus a potenciál cyt b5 sloužit jako donor elektronů v rámci reakčního cyklu cytochromu P450 1A1. Tento vliv byl studován jednak z pohledu tvorby metabolitů BaP, a jednak z pohledu tvorby jeho aduktů s DNA. Byl také studován vliv dvou expresních systémů pro cytochrom P450 1A1 (prokaryotický a eukaryotický), na jeho účinnost v metabolismu BaP. Vliv cyt b5 na účinnost monooxygenasového systému byl studován i s další cizorodou látkou, rostlinným alkaloidem ellipticinem, jenž vykazuje protinádorové účinky. Jeho protinádorový efekt, stejně jako vedlejší účinky, závisí na jeho metabolické aktivaci cytochromy P450. Významný z tohoto hlediska je zejména CYP3A4. Ten byl proto použit i v našich experimentech. Dále byla v práci studována vhodnost laboratorního potkana sloužit jako model metabolického osudu BaP v lidském organismu. Při studiu...
|
|
|
Aktivita cytochromů P450 1A1, 1A2 a 3A4 exprimovaných v eukaryotních a prokaryotních systémech
Indra, Radek ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Mizerovská, Jana (oponent)
Cytochromy P450 (CYP) tvoří superrodinu hemových proteinů, jenž je široce rozšířená v přírodě. Jsou důležité pro metabolismus širokého spektra substrátů a katalyzují řadu chemických reakcí. Hrají centrální roli v metabolismu chemoterapeutik (léčiv). Mají také schopnost aktivovat některé protinádorové činidla. Ellipticin, alkaloid nalezený v rostlinách čeledi Apocynaceae, je příkladem takového substrátu cytochromů P450. V práci byla testována efektivita lidských rekombinantních cytochromů P450 exprimovaných v eukaryotickém a prokaryotickém expresním systému, jmenovitě v SupersomechTM , což jsou mikrosomy izolované z hmyzích buněk transfekovaných baculovirem nesoucím cDNA lidských CYP1A1, 1A2 a 3A4 s NADPH:cytochrom P450 reduktasou nebo v Bactosomech, které jsou membránovou frakcí buněk E. coli transfekovaných cDNA stejných lidských cytochromů a NADPH:cytochrome P450 reduktasou, pro oxidaci jejich markerových substrátů a ellipticinu. Cytochrom b5, fakultativní složka systému oxidas se smíšenou funkcí, která metabolizuje xenobiotika, byl také exprimován v některých systémech. Výsledky získané v diplomové práci demonstrují, že lidské CYP1A1, 1A2 nebo 3A4 exprimované v prokaryotickém nebo eukaryotickém systému oxidují své markerové substráty (EROD pro CYP1A1/2, MROD pro CYP1A2 a 6β-hydroxylaci testosteronu pro...
|
|
| |
host ::
RSS.