|
|
Regulace glutathionperoxidas pomocí mikroRNA
Boučková, Karolína ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Skarková, Veronika (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Karolína Boučková Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Regulace glutathionperoxidas pomocí mikroRNA Oxidační stres je nerovnováha mezi vznikem volných radikálů a schopností organismu tyto radikály přirozeně odstraňovat. Pokud dojde k nadměrné tvorbě volných radikálů v těle a nejsou odbourávány, může dojít k poškození buněk a DNA, k předčasnému stárnutí a vzniku různých chorob. Mají však i prospěšný účinek, organismus využívá volné radikály k odstraňování odumřelých buněk a bakterií. Za normálních okolností má organismus dostatek mechanismů, kterými kompenzuje činnost volných radikálů a zabraňuje vzniku oxidačního stresu. Činnost již vytvořených volných radikálů může být inhibována prostřednictvím antioxidantů. Antioxidanty mohou být děleny na enzymatické a neenzymatické. Mezi nejdůležitější enzymatické antioxidanty patří glutathionperoxidasy (GPx). V lidském genomu bylo objeveno 8 genů kódujících GPx. GPx je cytosolový enzym, který katalyzuje redukci peroxidu vodíku na vodu a kyslík a také katalyzuje redukci peroxidových radikálů na alkoholy a kyslík. Pokud dojde ke snížení exprese nebo k inaktivaci enzymů, může to pro organismus znamenat nebezpečí. Inaktivace se mohou...
|
|
|
Výběr a validace referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA v lidských jaterních řezech
Studenovská, Petra ; Boušová, Iva (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Petra Studenovská Školitel: doc. PharmDr. Boušová Iva, Ph.D. Název diplomové práce: Výběr a validace referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA v lidských jaterních řezech Použití ultratenkých jaterních řezů je často využívaným in vitro systém při biochemických, farmakologických a toxikologických studiích. Důvodem je zejména zachování buněčné architektury tkáně, a tedy i jejích funkcí. Cílem diplomové práce byl výběr a validace referenčních genů pro relativní kvantifikaci mRNA v lidských jaterních řezech. Jako vzorky byla použita jaterní tkán od 3 pacientů s různým věkem, diagnózou a farmakoterapií. Ze vzorků jater byly připraveny jaterní řezy, které byly vystaveny působení dimethylsulfoxidu (kontrola) nebo známým induktorům cytochromu P450, rifampicinu (10 µM) a β-naftoflavonu (10 µM). Následně byla ověřena stabilita exprese referenčních genů pomocí programu RefFinder, který integruje programy geNorm, BestKeeper, NormFinder a komparativní ΔCT metodu. Optimální počet referenčních genů, které by měly být použity k relativnímu hodnocení genové exprese cílových genů, byl zjištěn pomocí programu geNorm. Nejvhodnější kombinací genů pro normalizaci exprese sledovaných genů byla dvojice YWHAZ a B2M....
|
|
|
Regulace glutathionperoxidasy 7 pomocí mikroRNA
Vávrová, Gabriela ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Řešitel: Bc. Gabriela Vávrová Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Regulace glutathionperoxidasy 7 pomocí mikroRNA Glutathionperoxidasy (GPxs) jsou považovány za klíčové antioxidační enzymy. Je známo celkem 8 lidských genů kódujících GPxs. Jejich hlavním úkolem je chránit organismus před oxidačním poškozením biomolekul vlivem oxidačního stresu, který vzniká v důsledku nerovnováhy mezi tvorbou a odstraňováním volných radikálů. Tyto enzymy katalyzují redukci volného peroxidu vodíku a organických hydroperoxidů na vodu či příslušné alkoholy. Tato práce je zaměřena na ovlivnění genové exprese monomerního enzymu GPx7 vlivem mikroRNA. GPx7 se podílí na správném složení proteinů v endoplazmatickém retikulu, na správném průběhu adipogeneze a potlačuje také rozvoj rakoviny. Krátké jednořetězcové nekódující molekuly mikroRNA se podílejí na post-transkripční regulaci genové exprese. Tyto molekuly negativně ovlivňují proces translace, tedy překlad mRNA do proteinu. MikroRNA se váží k vazebné oblasti převážně uvnitř 3'UTR mRNA cílového genu. Cílem této práce bylo experimentálně ověřit, zda dochází k interakci bioinformaticky predikovaných molekul miR-29b a miR-335 s 3'UTR vazebnou oblastí...
|
|
|
Vyšetření MPL genu u myeloproliferativních onemocnění
Vitásková, Liana ; Beránek, Martin (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Studijní program: Zdravotnická bioanalytika Autor práce: Liana Vitásková, DiS. Vedoucí práce: prof. PharmDr. Martin Beránek, PhD. Název práce: Vyšetření MPL u myeloproliferativních onemocnění Tato bakalářská práce zpracovává téma myeloproliferativních onemocnění v souvislosti s mutacemi v MPL genu. Jejím cílem bylo zavést vyšetřovací laboratorní postupy na oddělení molekulární genetiky v Krajské nemocnici Liberec, a.s. Zvolením použitých metod jsem tuto metodu zavedla a je možné ji na našem pracovišti vyšetřovat. Určením konkrétní mutace je možné lépe určit diagnózu pacientů s myeloproliferativními onemocněními a nastavit tak vhodnou léčbu. Cíl práce: Cílem bakalářské práce bylo seznámit se s problematikou myeloproliferativních onemocnění a s jejich základní charakteristikou. Dále podrobné seznámení se s problematikou a významem mutací v MPL genu u myeloproliferativních onemocnění. Hlavním cílem bylo zavést a osvojit si metody používané při stanovení mutací MPL genu na pracovišti molekulární genetiky v Krajské nemocnici Liberec, a.s. Metody: V metodické části jsou popsány pracovní postupy, které jsem zavedla pro diagnostiku mutace v MPL genu na pracovišti molekulární genetiky Krajské nemocnice v Liberci,...
|
|
|
Effect of albendazol on the expression of selected enzymes in Haemonchus contortus
Božíková, Martina ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Martina Božíková Školiteľ: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vplyv albendazolu na expresiu vybraných enzýmov Haemonchus contortus Haemonchus contortus je dominantný gastrointestinálny patogén malých prežúvavcov, ktorý môže spôsobiť oslabenie až smrť hostiteľského organizmu. Straty sú zaznamenávané hlavne u mladých jedincov, čo sa následne odzrkadľuje aj na samotnej ekonomike chovu. Z toho dôvodu prevencia a terapia stále zohrávajú najvýznamnejšiu úlohu. Avšak na druhej strane, zvýšená schopnosť červov prežiť túto liečbu predstavuje závažný problém. Jednou z možností vzniku rezistencie je zvýšená aktivita enzýmov, ktoré sú zodpovedné za metabolizmus xenobiotik. Cieľom diplomovej práce bolo sledovať vplyv albendazolu (ABZ) na expresiu vybraných génov biotransformačných enzýmov UDP-glykozyltransferáz (UGTs). Pre tento účel boli vybrané dva kmene H. contortus - citlivý na anthelmintiká ISE (Inbred Susceptible Edinburgh) a rezistentný na anthelmintiká WR (White River). Jedna časť parazitov bola kultivovaná v médiu s obsahom albendazolu po dobu dvanásť hodín, druhá časť, ktorá slúžila ako kontrola bola kultivovaná v médiu bez obsahu liečiva. Následne bola meraná génová expresia dvanástich...
|
|
|
Konstitutivní exprese UDP-glukosyltransferas vlasovky slezové
Nekovová, Lucie ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Vokřál, Ivan (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Lucie Nekovová Školitel: Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Konstitutivní exprese UDP-glukosyltransferas vlasovky slezové Hemonchóza způsobená gastrointestinální hlísticí Haemonchus contortus (vlasovka slezová) je jedním z nejčastějších parazitárních onemocnění malých přežvýkavců. Napadení chovu tímto krev sajícím parazitem znamená nejen závažné poškození zdraví zvířat, ale i s tím související sníženou produktivitu a ekonomické ztráty. Anthelmintika využívaná pro léčbu hemonchóz jsou často nedostatečně účinná z důvodu celosvětově se rozvíjející rezistence. Znalosti mechanismů způsobující rezistenci nejsou stále dostačující, a proto je kladeno velké úsilí na odhalení faktorů, které by mohly být jejich příčinou. Jedním z důvodů vzniku rezistence se zdají být změny biotransformačních enzymů a jejich exprese. U H. contortus bylo nalezeno více jak 40 genů kódujících různé druhy UDP-glukosyltransferas (UGT). UGT jsou hlavními enzymy spojovanými s deaktivací (glykosylací) léčiv u hlístic. Proto se tato práce zaměřuje především na rodinu UGT s cílem analyzovat pomocí qPCR změny v expresi těchto genů u citlivých (ISE) a rezistentních (WR) kmenů vlasovky slezové. 11 genů UGT z kmene ISE a WR,...
|
|
|
Epigenetic Regulation of Adhesive Molecules in High-grade Serous Ovarian Carcinoma
Baranová, Ivana ; Palička, Vladimír (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
4 Souhrn Název: Epigenetická regulace adhezivních molekul u high-grade serózního ovariálního karcinomu Nedostatek účinných biomarkerů pro screening a včasnou detekci ovariálního karcinomu je v současné době považován za jeden z nejnaléhavějších problémů onkogynekologie. Vzhledem k tomu, že k epigenetickým změnám dochází již v počátcích karcinogeneze, mohly by být tyto změny využity jako screeningové markery u rizikové populace. Epigenetické mechanismy se mimo jiné podílejí i na regulaci adhezivních molekul, které sehrávají důležitou roli při rozvoji nádoru a tvorbě metastáz. Hlavním cílem této práce byla analýza změn v metylaci u vybraných kadherinů a kateninů v ovariální nádorové tkáni v porovnání s kontrolní tkání. Vyšetřovaný soubor tvořilo 68 pacientek s high-grade serózním ovariálním karcinomem (HGSOK) a 46 kontrolních pacientek. Pro stanovení oblastí s nejvýznamnějšími změnami v metylaci ve vybraných genech bylo využito masivně paralelního sekvenování. Pro potvrzení metylačních změn v místech s největším potenciálem byla použita metylačně-sensitivní vysokorozlišovací analýza křivek tání a metylačně-specifická kvantitativní polymerázová řetězová reakce. Dalším cílem práce bylo vytvoření panelu biomarkerů, který by mohl být v budoucnu využit při screeningu HGSOK. Vybrané kadheriny byly proto hodnoceny...
|
|
|
Epigenetic Regulation of Adhesive Molecules in High-grade Serous Ovarian Carcinoma
Baranová, Ivana ; Palička, Vladimír (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent) ; Friedecký, David (oponent)
4 Souhrn Název: Epigenetická regulace adhezivních molekul u high-grade serózního ovariálního karcinomu Nedostatek účinných biomarkerů pro screening a včasnou detekci ovariálního karcinomu je v současné době považován za jeden z nejnaléhavějších problémů onkogynekologie. Vzhledem k tomu, že k epigenetickým změnám dochází již v počátcích karcinogeneze, mohly by být tyto změny využity jako screeningové markery u rizikové populace. Epigenetické mechanismy se mimo jiné podílejí i na regulaci adhezivních molekul, které sehrávají důležitou roli při rozvoji nádoru a tvorbě metastáz. Hlavním cílem této práce byla analýza změn v metylaci u vybraných kadherinů a kateninů v ovariální nádorové tkáni v porovnání s kontrolní tkání. Vyšetřovaný soubor tvořilo 68 pacientek s high-grade serózním ovariálním karcinomem (HGSOK) a 46 kontrolních pacientek. Pro stanovení oblastí s nejvýznamnějšími změnami v metylaci ve vybraných genech bylo využito masivně paralelního sekvenování. Pro potvrzení metylačních změn v místech s největším potenciálem byla použita metylačně-sensitivní vysokorozlišovací analýza křivek tání a metylačně-specifická kvantitativní polymerázová řetězová reakce. Dalším cílem práce bylo vytvoření panelu biomarkerů, který by mohl být v budoucnu využit při screeningu HGSOK. Vybrané kadheriny byly proto hodnoceny...
|
|
|
Effect of imatinib on selected mice microRNAs
Heglasová, Silvia ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Skarková, Veronika (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Silvia Heglasová Školiteľ: Doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vplyv imatinibu na vybrané myšacie mikroRNA Imatinib (IMB) patrí medzi nízkomolekulárne tyrozín kinázové inhibítory (TKI). Jeden z nežiadúcich účinkov IMB je kardiotoxicita. Včasná diagnostika poškodenia srdca je dôležitá pre zlepšenie zdravia ľudí. Potenciálnym biomarkerom poškodenia srdca sú mikroRNA (miRNA). Nachádzajú sa nielen intracelulárne, ale aj voľne cirkulujúce v krvnom obehu. MiRNA v plazme sú stabilné, odolné voči opakovanému zmrazovaniu a metódy ich stanovenia sú veľmi citlivé. V mojej diplomovej práci som preto zisťovala zmenu expresie miRNA pri poškodení srdca IMB. Sledovala som cirkulujúce miRNA v plazme a tkanivové miRNA v srdciach myší. Vybrané miRNA boli stanovované kvantitatívnou real-time PCR (qPCR). Bola tiež stanovená hladina Troponínu T v plazme ako klasického biomarkeru kardiotoxicity. Hladiny Troponínu T v plazmách ovplyvnených IMB boli veľmi variabilné. Tento fakt poukazuje na odlišné reakcie jedincov na IMB. Zmeny expresie pozorovaných miRNA v plazme myší, ktorým bol podávaný IMB neboli významné. Ku štatisticky významnému zníženiu expresie došlo len u miR-205 v srdcovom tkanive. Vhodnosť...
|
|
|
Effect of doxorubicin on selected mice microRNAs
Dugasová, Lucia ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Jansová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Lucia Dugasová Vedúci: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vplyv doxorubicínu na vybrané myšacie mikroRNA Doxorubicín (DOX) patrí mezi antracyklínové antibiotiká, používajú ho pacienti trpiaci nádorovými ochoreniami. Jeho nežiadúcim účinkom je vznik kardiotoxicity. Prognóza kardiotoxicity závisí na jej včasnom odhalení, a preto mnohé štúdie skúmajú vlasnosti mikroRNA, ktoré by v budúcnosti mohli byť vhodné biomarkery poškodenia srdca. MikroRNA sú zapojené takmer vo všetkých procesoch v ľudskom tele, pri vývoji, deferenciácií, proliferácií a apoptóze. Nachádzajú sa aj v extracelulárnom priestore, sú stabilné a majú mnoho ďalších pozitívnych vlastností. Moja diplomová práca je zameraná na sledovanie zmien hladín expresie mikroRNA, ktoré môžu vznikať pri poškodení srdca doxorubicínom. Ako vzorky boli použité srdcové tkanivá a plazma myší, ktoré boli ovplyvňované doxorubicínom a porovnávané s kontrolnými vzorkami. Vzorky boli spracované a vyhodnotené metódou kvantitatívnou real - time PCR (qPCR). Štatisticky významné zvýšenie expresie vo vzorkách srdcového tkaniva myší nastalo len u miR- 34a a zníženie expresie u miR-205. Vzorky plazmy myší poukázali na štatisticky signifikantné...
|
host ::
RSS.