|
|
Monitoring of protein network dynamics: the role of FcRL proteins during sperm-egg membrane interaction
Bašus, Kryštof ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Šušor, Andrej (oponent)
Vzájemná interakce a fúze membrán spermie a vajíčka je zprostředkována různými molekulami, které se nacházejí na membáně spermie i vajíčka a tvoří proteinové sítě. U mnoha kandidátních proteinů byla předpokládána jejich účast při fúzi membrán gamet, některé z těchto proteinů (Izumo1, CD9, Juno) se ukázaly býti nezbytnými, zatímco u jiných byla objevena zcela jiná role (CD46, tetraspaniny). U myši se po vazbě spermie na vajíčko váže protein Juno na povrchu vajíčka na monomerní protein Izumo1 na povrchu spermie, následuje dimerizace Izumo1 a rychlé vyvázání proteinu Juno z povrchu vajíčka, jak bylo popsáno u myši. Tato skutečnost naznačuje, že pro zajištění fúze membrán musí být na vajíčku exprimován další, zatím nespecifikovaný receptor. Abychom nalezli hlavní lidský fúzogenní receptor pro IZUMO1, využili jsme metodu náhodného screeningu, jedna kulička - jedna sloučenina" (one--bead one compoud, OBOC). Byla vybrána kulička interagující s lidskými spermiemi za splnění všech kritérií a tato kulička nesla navázanou peptidovou sekvenci homologní s Ig doménou ...
|
|
|
Spermatogeneze, klasifikace a hodnocení morfologie spermií pro využití v asistované reprodukci.
Kaňoková, Kristýna ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent)
Spermatogeneze, klasifikace a hodnocení morfologie spermií pro využití v asistované reprodukci Abstrakt Kvalita spermií hraje důležitou roli při stanovení mužské plodnosti. Vzhledem k narůstajícímu poklesu kvality spermií se vyskytuje stále více párů vyžadující metody asistované reprodukce. Morfologie spermií je jedním z faktorů ovlivňujících plodnost muže a defekty v morfologii spermií jsou hlavním předmětem řady studií. Savčí spermie jsou tvořeny v průběhu spermatogeneze a vady ve spermatogenezi mohou způsobit vážné defekty na morfologii spermií. Defekty hlavičky, krčku nebo bičíku spermie mohou mít vážné dopady na oplodňující schopnosti spermie a proto v některých případech je nutné využít metody asistované reprodukce vzhledem k morfologickým abnormalitám. Cílem této práce bylo popsat spermatogenezi, morfologii spermie normální a patogenní a zhodnotit použití a výsledky metod asistované reprodukce v rámci morfologie spermií a případně je uplatnit při výběru metody asistované reprodukce. Morfologie spermií ovlivňuje do určité míry výsledky asistované reprodukce a je nezanedbatelným faktorem ovlivňujícím podíly úspěšnosti oplození, otěhotnění a vývoje embrya. V případech vážné patologie se však nedá doporučit využití metod asistované reprodukce, neboť defekty ve spermatogenezi následně odrážející se ve...
|
|
|
Role integrinů během přípravy gamet k oplození a jejich vzájemné interakce
Foldynová, Veronika ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Tlapáková, Tereza (oponent)
Integriny jsou heterodimerní transmembránové glykoproteiny, které představují velkou sku- pinu receptorů buněčné adheze podílející se na interakcích buněk, buňky a extracelulární matrix a interakcích buňky s patogenem. V současné době je u savců známo 24 různých inte- grinových heterodimerů. Podílejí se na široké škále procesů jako je imunitní odpověď, řízená migrace lymfocytů, agregace krevních destiček, také při hojení ran, buněčné diferenciaci, migraci, proliferaci a samotném přežití buněk. Integriny byly detekovány i na germinálních buňkách a dnes je známé, že hrají důležitou roli i v reprodukčních procesech jako je oplození, implantace embrya a embryonální vývoj. Hlavní náplní této bakalářské práce je seznámení s integriny z pohledu reprodukce, fyziologie integrinů, výskytu a lokalizace jednotlivých pod- jednotek u samčích a samičích gamet savců. Významná část práce je věnována diskuzi role integrinů u gamet, a to jak během maturačních procesů (dozrávání vajíčka ve vaječníku, kapacitaci a akrozomální reakce spermie), tak i při migraci spermie, tvorbě oviduktálního rezervoáru i jejich přímé a nepřímé zapojení do vazby a fúze gamet při oplození. Klíčová slova: integriny, spermie, vajíčko, fúze, oplození
|
|
|
Metodika přípravy transgenní myši.
Reslová, Gabriela ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Pěknicová, Jana (oponent)
Souhrn Práce se zabývá problematikou přípravy transgenních myší a srovnáním jednotlivých metodologických postupů z hlediska efektivity a vhodnosti aplikace pro výzkumné účely. Techniky pro přenos genových konstruktů zahrnují preferovanou mikroinjekci DNA do pronuklea oplodněného vajíčka. Jakož i možnosti spojené s využitím spermií, jež přenášejí zabudovaný genový konstrukt do oocytu při in vitro oplození, nebo za využití retrovirových vektorů, kterými jsou oocyty infikovány. Přenos jader somatických buněk do enukleovaných oocytů, využití embryonálních kmenových buněk, které jsou vnášeny do cizích zárodků či transgeneze pomocí liposomů jsou techniky prozatím používané okrajově z důvodu nutnosti hlubšího probádání. V další části seznamuje práce čtenáře s jednotlivými kroky, jež je nutné provést pro úspěšnost transgeneze. Předmětem zájmu je zde ovariální stimulace nutná pro získání dostatečného množství oocytů, ale také jako příprava pro embryo transfer, jakož i kapacitace spermií, která je zásadní pro in vitro oplození. Práce se rovněž zabývá zpětnou analýzou potvrzení pozitivity exprese transgenu pomocí genotypizace potomků a křížením pozitivních transgenů a srovnává výhody a nevýhody získání homozygotní transgenní linie. Klíčová slova: Transgenní myš, perinukleární injekce, ovariální stimulace, kapacitace,...
|
|
|
Monitorování vybraných steroidních hormonů metodou HPLC-MS/MS a studium jejich vlivu na myší spermie in vitro.
Bosáková, Tereza ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent)
Tato diplomová práce byla zaměřena na vývoj nové metody využívající vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii s tandemovou hmotnostní detekcí (HPLC-MS/MS) pro kvantifikaci vybraných steroidních hormonů, a to 17α-ethynylestradiolu (EE2) a progesteronu (PRG), v M2 fertilizačním médiu. Toto médium je používané při kapacitaci spermií in vitro, což je proces, kdy dochází ke komplexním molekulárně-biochemickým změnám ve spermii, na jejichž základě spermie získávají schopnost oplodnění. Fyziologický průběh tohoto procesu je tudíž zásadní pro získání fertilizační schopnosti samčích gamet. Optimalizované HPLC-MS/MS podmínky (kolona Kinetex EVO C18, mobilní fáze 50/50 (v/v) ACN/H2O, s 0,1% obsahem mravenčí kyseliny v obou složkách, průtok mobilní fáze 0,3 ml/min, nástřik 7,5 µl) byly aplikované pro sledování koncentračních změn jednotlivých analytů během časově závislé kapacitace myších spermií. Testované koncentrace pro EE2 byly 200, 20 a 2 µg/l a pro PRG pouze 200 µg/l. Bylo zjištěno, že nejprve dochází k poklesu koncentrace volného, nevázaného EE2 (minimum okolo 60. min kapacitace) a poté k jejímu opětovnému nárůstu. Tento trend vykazovaly všechny testované koncentrace. Koncentrace (200 µg/l) volného, nevázaného PRG klesala po celou dobu kapacitace. Závislosti koncentrace volného, nevázaného hormonu na...
|
|
|
Multidisciplinární charakterizace interakcí mezi estrogenními hormony a jejich receptory při kapacitaci spermií.
Bosáková, Tereza ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Smrček, Stanislav (oponent) ; Postlerová, Pavla (oponent)
Tato disertační práce byla zaměřena na multidisciplinární charakterizaci interakcí mezi hormony a jejich receptory při kapacitaci spermií, která je finálním krokem maturace spermií u savců a je k oplození vajíčka klíčová. Pro studium byly vybrány tři estrogenní hormony (17β- estradiol (E2), 17α-estradiol (αE2), 17α-ethynylestradiol (EE2)), které jsou součástí znečištění životního prostředí. Tyto hormony, jsou nazývané jako endokrinní disruptory, neboť mohou vyvolat u živočichů poruchy hormonálního systému, a tím negativně ovlivnit fyziologické procesy včetně reprodukce. Nově vyvinutou analytickou HPLC-MS/MS metodou byly sledovány koncentrační změny daných estrogenů (E2, αE2 a EE2) během časově závislé kapacitace myších, resp. potkaních, spermií in vitro. Pro jednotlivé estrogeny byly definovány závislosti koncentrace volného, na spermie nevázaného hormonu na čase kapacitace pro tři vsádkové koncentrace jednotlivých hormonů (200, 20 a 2 μg/L). Získané koncentrační hodnoty byly převedeny na hodnoty relativních koncentrací, které byly podrobeny kinetické analýze. Pro interakci jednotlivých hormonů se spermiemi byly navrženy kinetické modely, které byly popsány systémem diferenciálních rovnic s optimalizací rychlostních konstant a molárního poměru. Optimalizace probíhala na základě hledání minima...
|
|
|
Function of Zinc finger protein 644 (Zfp644) in mouse organism.
Szczerkowska, Katarzyna Izabela ; Sedláček, Radislav (vedoucí práce) ; Komrsková, Kateřina (oponent) ; Blahoš, Jaroslav (oponent)
Gen ZNF644 kóduje transkripční regulátor Zinc Finger Protein 644 patřící do podrodiny Cys2-His2 zinc finger proteinů. Mutace lidskeho ZFN644 (S672G) způsobuje vážnou dědičnou myopii. Výzkum ukázal, že ZFN644 ovlivnujě expresi podřízených genů prostřednictvím interakce s komplexem G9a/GLP (G9a - euchromatic histone-lysine N-methyltransferase 2, EHMT2; GLP - euchromatic histone-lysine N-methyltransferase 1, EHMT1), který hraje významnou roli při methylaci histonů, konkrétně H3Kme1 a H3K9me2. Dále tento komplex může vázat transkripční factor WIZ (Widely-Interspaced Zinc Finger-Containing Protein) a tím současně regulovat umlčení jemu podřízených genů. Abychom mohli studovat dopad mutace ZFP644 na vývoj myopie, vytvořili jsme myší modely, jeden mimikující lidskou mutaci - Zfp644S673G a druhý se zkrácenou formou proteinu Zfp644Δ8 . Oba modely byly podrobeny důkladné vyšetření funkce a morfologie retiny. S využitím ultrasonografie, byly u těchto modelů odhaleny fenotypy v podobě poruchy retiny. Měření potvrdilo spojitost mutace Zfp644 a myopie v obou modelech, navíc byly odhaleny vážné poruchy metabolismu a fertility samic u Zfp644Δ8 modelu. Pro detailnější popis vlivu Zfp644 na plodnost byly provedeny experimenty zahrnujicí analýzu exprese Zfp644 v reprodukčních orgánech, morfometrie vaječníků,...
|
|
|
Studium struktury a metabolismu spermií savců a ryb ve vztahu k procesu reprodukce
Koubek, Pavel ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Komrsková, Kateřina (oponent) ; Flajšhans, Martin (oponent)
4. áVĚR V rámcistudiaspermiíkostnatýcha chrupavčitýchrybby|vytvořenkomp|exníprotoko| optima|izovanýproimunof|uorescenčníznačeníproteinůkapřícha jeseteříchspermií. Tento protoko|'vycházejícíz postupupro imunof|uorescenčníznačenína savčích spermiích,ref|ektujepředevŠímjednoduššía snáze poŠkodite|noustruktururybích spermií.Je tak minima|izovánomoŽnépoškozeníběhemzpracovánívzorkůa vznik nespecifickýchartefaktů,kteréby moh|ynegativněov|ivňovatvýs|edky.Vytvoření vhodnéhoprotoko|upro imunof|uorescenčníznačeníje tak dů|eŽiténejen pro výzkumnéexperimenty,a|ei proap|ikačnívyuŽití'např.při hodnoceníkva|ityspermií' kdyje reprodukovate|nostmetodynezbytná. Při studiu energetickéhometabo|ismu,zajišťujícíhopohyb kapříchspermií,by|a s vyuŽitímspecifickémonok|onálníproti|átkypotvrzenapřítomnostminimá|nědvou isoforem kreatin kinasy (cK)' tvořícíchATP-transportníkyvad|o.Na modeIu demembranizovanýchkapříchspermiíby| prokázánvýznamtohototransportního mechanismua schopnostcytop|asmatickéCK umoŽnitcAMP_nezávis|ouiniciaci f|age|árníhopohybua jeho udÉení.Vdalšíprácizbýváověřitpředevšímhypotézu, zda-lije ú|ohafosfokreatinuv kapříchspermiíchprimárnětransportnínebose jedná předevŠímo energetickézásoby. Studiumspermiíchrupavčitýchryb by|ozaměřeno na strukturuspermiíjesetera ma|éhos vyuŽitímskenovacíhoi...
|
|
|
Fc receptor-like molecules: biological role and phylogenetic conservation of FcRL multigene family
Böhmová, Helena ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Vinkler, Michal (oponent)
Fc receptor-like molekuly (FcRL) jsou nově známé imunologické receptory se zajímavými úlohami v imunitním systému. Fylogenetické studie ukazují, že FcRL geny jsou konzervované v čelistnatých obratlovcích (Gnathostomata) a pravděpodobně vznikly během formace adaptivní imunity. FcRL molekuly mají mnoho extracelulárních imunoglobulinových domén, a někteří zástupci mají i nově identifikované ligandy. Několik zástupců FcRL obsahuje ITIM a ITAM sekvence ve své cytoplasmatické části, které jim propůjčují duální signalizační charakter. Tyto vlastnosti jim umožňují regulovat intracelulární signalizační dráhy. FcRL molekuly se účastní regulace B lymfocytů. Jsou většinově exprimovány na B lymfocytech, někteří zástupci jsou preferenčně exprimovány na cytotoxických T lymfocytech a NK buňkách. Exprese FcRL molekul je specifická pro určité subpopulace B lymfocytů a míra jejich exprese se liší v průběhu diferenciace B lymfocytů, což poukazuje na možnost jejich účasti v tomto procesu. FcRL molekuly byly detekovány u savčích vajíček, a mohou potenciálně hrát roli při fúzi membrán gamet. Tato práce si klade za cíl představit FcRL molekuly v mnoha aspektech, mezi které patří jejich vztah k Fc receptorům, jejich struktura, organizace genomu, fylogenetická konzervace a jejich role v organismu. Práce se také soustředí na...
|
|
|
Monitoring of protein network dynamics: the role of FcRL proteins during sperm-egg membrane interaction
Bašus, Kryštof ; Komrsková, Kateřina (vedoucí práce) ; Šušor, Andrej (oponent)
Vzájemná interakce a fúze membrán spermie a vajíčka je zprostředkována různými molekulami, které se nacházejí na membáně spermie i vajíčka a tvoří proteinové sítě. U mnoha kandidátních proteinů byla předpokládána jejich účast při fúzi membrán gamet, některé z těchto proteinů (Izumo1, CD9, Juno) se ukázaly býti nezbytnými, zatímco u jiných byla objevena zcela jiná role (CD46, tetraspaniny). U myši se po vazbě spermie na vajíčko váže protein Juno na povrchu vajíčka na monomerní protein Izumo1 na povrchu spermie, následuje dimerizace Izumo1 a rychlé vyvázání proteinu Juno z povrchu vajíčka, jak bylo popsáno u myši. Tato skutečnost naznačuje, že pro zajištění fúze membrán musí být na vajíčku exprimován další, zatím nespecifikovaný receptor. Abychom nalezli hlavní lidský fúzogenní receptor pro IZUMO1, využili jsme metodu náhodného screeningu, jedna kulička - jedna sloučenina" (one--bead one compoud, OBOC). Byla vybrána kulička interagující s lidskými spermiemi za splnění všech kritérií a tato kulička nesla navázanou peptidovou sekvenci homologní s Ig doménou ...
|
host ::
RSS.