|
Úloha variabilních řetězců na rozhraní podjednotek ve formování ATP-vazebné kapsy a funkci P2X4 receptoru
Tvrdoňová, Vendula ; Zemková, Hana (vedoucí práce) ; Novotný, Jiří (oponent) ; Vlachová, Viktorie (oponent)
5 ABSTRAKT Krystalizace P2X4 receptoru (P2X4R) ze zebřičky ("zebra fish", zfP2X4) v uzavřeném a otevřeném stavu odhalila změny v konformacích ektodomény včetně změn v oblasti styčných ploch mezi levou ("left flipper"; LF) a hřbetní ("dorsal fin"; DF) ploutví. Roli těchto struktur ve formování ATP vazebné kapsy a funkci receptoru jsme zkoumali pomocí alaninové skenovací mutageneze úseků LF (D280-N293) a DF (R203-L214) potkaního P2X4R, a s využitím ATP a analogických agonistů 2-(methylthio)adenosin 5'- trifosfátu, adenosin 5'-(γ-thio)trifosfátu, 2'(3'-O-(4-benzoylbenzoyl)adenosin 5'- trifosfátu a α,β-methylenadenosin 5'-trifosfátu. Sníženou citlivost anebo účinnost ATP mělo 15 z 26 vytvořených mutací. Mutace R203A, N204A a N293A byly v podstatě nefunkční, ale jejich funkci bylo možné obnovit ivermektinem, alosterickým modulátorem P2X4R. Mutace I205A, T210A, L214A, P290A, G291A a Y292A měly změněnou odpověď na ATP a na analogické agonisty. Naproti tomu mutace L206A, N208A, D280A, T281A, R282A a H286A nevykazovaly ve srovnání s divokým typem receptoru žádnou změnu v odpovědích na ortosterické agonisty. Tyto pokusy, společně s homologním modelováním ukázaly, že aminokyseliny z první skupiny nacházející se v horní části obou řetězců LF a DF, se podílejí na přesné organizaci ATP-vazebné kapsy a iniciaci převodu...
|
|
Zkoumání změn v epigenetických modifikacích v mozku potkana vyvolaných působením morfinu
Hronová, Anna ; Novotný, Jiří (vedoucí práce) ; Roubalová, Lenka (oponent)
Tato práce se zabývala vlivem různě dlouhých abstinenčních období na epitran- skriptomickou modifikaci m6 A a enzymy účastnící se této modifikace, stejně jako na transkripční faktory v mozku potkanů závislých na morfinu. Použité metody zahrnovaly využití kolorimetrického kitu pro určení hladin m6 A a Western blot metodu pro kvantifikaci hladin enzymů a transkripčních faktorů. Výsledky ukázaly, že různě dlouhé úseky morfinové abstinence neměly významný vliv na m6 A modi- fikaci, což naznačuje, že tato dráha pravděpodobně nebyla ovlivněna morfinovou abstinencí. Nicméně byly pozorovány signifikantní změny v hladinách enzymů, které jsou zapojené do regulace m6 A, které byly místně a časově specifické, bez jasného trendu. Zkoumání transkripčních regulátorů ∆FosB a MeCP2 taktéž odha- lilo signifikantní změny jen v některých částech mozku a v určitých časech, ale bez jasného trendu ve změnách hladin. Výsledkem této práce je, že dynamika hladin transkripčních regulátorů, N6 6-metyl-adenosinu a enzymů, které se účastní m6 A modifikace je místně a časově specifické a otevírá nové otázky ohledně mechanismů, které řídí neurobiologické pochody během abstinenčního období.
|
|
The effect of opioids on the immune system
Miniariková, Nina ; Novotný, Jiří (vedoucí práce) ; Cimermanová, Veronika (oponent)
Používanie opioidov v medicíne je nevyhnutné, nakoľko slúžia na potlačenie bolesti ako súčasť anestézie najmä počas chirurgických zákrokov. Následne pomáhajú tlmiť bolesť počas pooperačnej starostlivosti a predpisujú sa tiež pacientom s chronickou bolesťou, napríklad pri konečných štádiách rakoviny. Opioidy však patria medzi celosvetovo najčastejšie zneužívané látky. Spojené Štáty Americké čelia opioidovej epidémii, tiež nazývanej opioidová kríza, ktorá začala najmä nadmernými predpismi opioidov a ich následným zneužitím. Je zrejmé, že opioidy vplývajú na imunitný systém a táto téma je predmetom štúdií, hlavne v posledných rokoch. Rôzne opioidy majú variabilné účinky na imunitný systém. Pochopenie ich vplyvu na imunitný systém by mohlo predstavovať zlepšenie zdravotnej starostlivosti a zároveň slúžiť ako podklad pre návrhy nových metód liečby niektorých ochorení. Táto bakalárska práca sumarizuje dostupné štúdie, ktoré sa zaoberajú vplyvom a účinkami rôznych opioidov na bunky imunitného systému s cieľom lepšieho pochopenia ich významu a využitia v praxi. Kľúčové slová: opioidy, imunitný systém, inhibícia, imunomodulácia, fagocyty, lymfocyty
|
|
The role of SGIP1 protein in the control of cannabinoid receptor
Gazdarica, Matej ; Blahoš, Jaroslav (vedoucí práce) ; Jakubík, Jan (oponent) ; Novotný, Jiří (oponent)
Dvě oblasti na C-konci kanabinoidního receptoru 1 (CB1R), 425 SMGDS429 a 460 TMSVSTDTS468 , obsahují shluky serinových a treoninových zbytků, které mohou být fosforylovány a společně hrají zásadní roli při desenzitizaci a internalizaci aktivovaného CB1R. Pomocí metod bioluminiscenčního rezonančního přenosu energie spolu s farmakologickými inhibitory jsme v této práci zkoumali úlohu fosforylace těchto serinových/treoninových klastrů při zprostředkování protein-proteinových interakcí CB1R s molekulami důležitými pro desenzitizaci a internalizaci tohoto receptoru. Ukázali jsme, že interakce CB1R s G proteinem spřaženou receptorovou kinázou 3 (GRK3) a β-arrestinem2 závisí na odlišných vzorcích fosforylace C-konce CB1R. Kromě toho musí být GRK3 pro interakci s CB1R v aktivní formě. Dále byl zkoumán vliv proteinu SGIP1 (Src homology 3- domain growth factor receptor-bound 2-like (endophilin) interacting protein 1) na dynamiku signalosomu CB1R a desenzitizaci CB1R. SGIP1 zásadně mění interakci CB1R s GRK3 a β- arrestinem2 a modifikuje vazbu GRK3 na βγ podjednotky G proteinů. V této práci charakterizujeme nově identifikované sestřihové varianty SGIP1 a ukazujeme, že změny způsobené alternativním sestřihováním v doménách SGIP1 nemají vliv na inhibiční účinek SGIP1 na internalizaci CB1R. Výsledky této studie...
|
|
Neurobiology of food addiction
Cíbiková, Sofia Anna ; Novotný, Jiří (vedoucí práce) ; Petríková, Ivana (oponent)
Táto práca sa zameriava na závislosť na jedle, a to najmä na jej neurobiologickú podstatu. Fakt, že vysoko spracované vysoko kalorické jedlo môže mať podobný efekt ako návykové látky je známy už desaťročia, avšak s rapídne stúpajúcou prevalenciou obezity v posledných rokoch sa čoraz viac výskumu venuje tejto problematike. Závislosť na jedle býva často spojená práve s obezitou, alebo poruchami príjmu potravy ako je záchvatové prejedanie, a prirodzene má negatívny vplyv na zdravie čím ďalej tým väčšieho množstva ľudí. Nadmerná konzumácia vysoko kalorického jedla spôsobuje zmeny v nervových dráhach v mozgu spojených najmä s dopamínom a systémom odmeny, vďaka čomu podobne ako návykové látky vedie k vzniku závislosti, ktorá sa prejavuje stratou kontroly nad konzumáciou, vybudovaním si tolerancie, či abstinenčnými príznakmi. Stres a rôzne psychické poruchy ako depresia či úzkosť bývajú často faktormi, ktoré prispievajú k vzniku tejto závislosti. Výzkum podobnosti závislosti na jedle so závislosťami na návykových látkach môže byť prospešný pre nájdenie vhodnej terapie. Najefektívnejšími sa zdajú byť metódy kognitívnej intervencie a psychoterapeutické metódy, naopak prísne diéty sa snahy o veľkú zmenu životného štýlu často prinášajú naopak negatívne výsledky. Kľúčové slová: závislosť na jedle, obezita,...
|
|
Význam epigenetických mechanismů při rozvoji drogové závislosti
Durdilová, Marie ; Novotný, Jiří (vedoucí práce) ; Janoušková, Alena (oponent)
Zneužívání návykových látek je celosvětově velice rozšířené a nese s sebou řadu negativních dopadů, jak na jednotlivce, tak na okolí. Na některé látky může vznikat závislost již po několika dávkách, u jiných látek to může být záležitost dlouhodobějšího charakteru. Výsledek je ale vesměs podobný, a to takový, že se prioritou v životě daného člověka stává daná droga nebo činnost. Tato změna priorit souvisí se zvýšenou produkcí dopaminu v důsledku působení dané látky na mozek, a modulací okruhů odměny v mozku. Změny propojení a vzrušivosti neuronů v mezolimbickém a mezo- kortikolimbickém dopaminergním systému vedou ke vzniku a udržování závislosti. Tyto změny na neuronální úrovni jsou v organismu udržovány pomocí epigenetických remodelací chromatinu. Vzorec epigenetických modifikací, charakteristický pro určitý typ zneužívané látky, může být předáván do další generace a tím tak zvyšovat potenciál rozvoje závislosti u potomků. Výzkumy epigenetických modifikací, spojených se závislostí, nám poskytují hlubší porozumění neurofyziologickým změnám doprovázejících drogovou závislost. Zároveň otvírají otázku dalších možností léčby drogové závislosti zacílením na epigenetické modifikace udržující a charakterizující danou závislost.
|
| |
|
Hodnocení ekonomické efektivnosti a rizik investičního projektu
Novotný, Jiří ; Hromádka, Vít (oponent) ; Korytárová, Jana (vedoucí práce)
Bakalářská práce se zabývá hodnocením ekonomické efektivnosti a rizik investičního projektu. Jedná se o výstavbu polyfunkčního domu v Brně. Teoretická část práce vysvětluje základní pojmy, definuje fáze životního cyklu projektu, popisuje peněžní toky, ukazatele ekonomické efektivnosti a zabývá se řízením rizika projektu. Praktická část je věnována investičnímu projektu, především tvorbě peněžních toků a výsledným zhodnocením ekonomické efektivnosti daného projektu. V závěru práce je provedena analýza citlivosti.
|
|
Vliv pracovních režimů řidičů v silniční nákladní dopravě na bezpečnost dopravy
Máša, Vojtěch ; Novotný, Jiří (oponent) ; Libertín, Josef (vedoucí práce)
Pracovní režimy řidičů jsou omezující limity důležité jak pro silniční dopravce, tak pro řidiče. Mají zásadní vliv na logistické mechanismy výrobních podniků, které přepravují své zboží po silnici. Nedodržování těchto limitů, je v poslední době jeden z hlavních problémů v silniční dopravě a vede k nekalé konkurenci mezi silničními dopravci. Dopravce získává nedodržováním těchto sociálních předpisů zcela zásadní konkurenční výhodu. V poslední době se uvedené problematice věnuje hodně času z pohledu politiků. Státy porušování sociálních předpisů dopravcem i řidičem tvrdě trestají a často se v článcích dočteme o pracovních režimech řidičů a s tím spojenou nebezpečnost nákladní dopravy, ohrožení bezpečnosti silničního provozu, ohrožení řidičů osobních vozidel. Již 10 let se uvedené problematice věnuji a podílím se na tvorbě školících materiálů na toto téma u Sdružení ČESMAD BOHEMIA. Ve své práci jsem chtěl posoudit problematiku pracovních režimů řidičů z odborného hlediska - jak jsou limity pracovních režimů nastavené a zda vyhovují bezpečnosti silničního provozu. Dále pak posoudit statistiky nehodovosti v ČR v návaznosti na pracovní režimy řidičů a navrhnout změny, které by přispěly ke zlepšení sociálních předpisů v návaznosti na bezpečnost silničního provozu.
|
|
Analýza rytmu z intervalů RR
Novotný, Jiří ; Škutková, Helena (oponent) ; Kozumplík, Jiří (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce řeší problematiku automatické klasifikace srdečního rytmu, založené na posloupnosti RR intervalů. Její teoretická část se zabývá charakteristikou arytmií, které byly klasifikovány, a principy detektorů a klasifikátorů použitých v této práci. V praktické části byl v Matlabu realizován detektor komplexů QRS založený na výpočtu obálky EKG signálu. Dále byl vytvořen algoritmus ke klasifikaci arytmií na základě analýzy RR intervalů. Spolehlivost detektoru a účinnost klasifikátoru byla ověřena na standardní databázi CSE. Senzitivita detektoru byla 98,28% a jeho pozitivní prediktivní hodnota byla 98,38%. Diagnózy realizovaného klasifikátoru se v 73,17% shodovaly s diagnózami kardiologů.
|