|
|
Studium interakce acyltransferasy RtxC s toxinem RtxA bakterie Kingella kingae
Lichvárová, Michaela ; Osičková, Adriana (vedoucí práce) ; Černá, Věra (oponent)
Bakterie Kingella kingae byla poprvé izolována v roce 1960 mikrobioložkou Elizabeth O. King a donedávna byla považována za vzácnou příčinu lidských onemocnění. Avšak, za posledních 30 let vzrůstá počet odborných prací ukazujících, že je tato bakterie významným pediatrickým patogenem, který napadá především děti ve věku od 6 měsíců do 3 let a způsobuje u nich hlavně septickou artritidu, osteomyelitidu, infekční endokarditidu a bakteriémii. K. kingae vykazuje silný cytotoxický účinek vůči nejrůznějším typům hostitelských buněk, který je způsoben sekretovaným cytolyzinem RtxA patřícím do rodiny RTX (Repeats in ToXin) toxinů. RtxA se váže na glykosylované struktury hostitelské buňky, následně se vloží do její cytoplazmatické membrány a vytvoří v ní kation-selektivní póry, což vede k narušení iontové homeostázy a lýze napadené buňky. RtxA je produkován jako neaktivní protoxin proRtxA, jehož aktivace je zprostředkována acyltransferasou RtxC, která přenáší acylové řetězce na dva konzervované lysinové zbytky K558 a K689 v protoxinu. Jako donor acylu využívá acyl přenášející protein acyl-ACP. V současnosti není jasné, jakým způsobem mezi sebou proteiny RtxC, acyl-ACP a proRtxA vzájemně interagují a které aminokyselinové zbytky jsou za tyto interakce zodpovědné. Cílem diplomové práce bylo na základě...
|
|
|
Preparation of mutant variants of Kingella kingae RtxA cytotoxin for membrane topology research
Lichvárová, Michaela ; Osičková, Adriana (vedoucí práce) ; Malý, Petr (oponent)
Kingella kingae je fakultativně anaerobní, β-hemolytická, gramnegativní bakterie. Bylo prokázano, že K. kingae je důležitou příčinou invazivních infekcí u malých dětí zejména ve věku od 6 do 36 měsíců. Nejčastější onemocnění způsobená bakterií K. kingae jsou septická artritida, osteomyelitida, bakteriémie a infekční endokarditida. Klíčovým faktorem virulence K. kingae je sekretovaný RtxA toxin, který patří do skupiny RTX toxinů (z angl. Repeats in ToXin). Ty se na základě buněčné specifity jejich účinku dělí do dvou kategorií, a to na hemolyziny a leukotoxiny. Široká specifita RtxA toxinu naznačuje, že daný toxin patří mezi hemolyziny. Molekuly RtxA toxinu se vkládají do membrány hostitelské buňky a vytvoří v ní póry, které jsou schopny propouštět ionty, čimž dojde k porušení iontové rovnováhy nitrobuněčného prostředí a k případné lýze buňky. Cílem předkládané bakalářské práce bylo připravit mutantní varianty cytotoxinu RtxA s lysinovými substitucemi v doméně tvořící póry pro budoucí studium membránové topologie daného toxinu s využitím metody navázaní biotinu na aminokyselinový zbytek lysinu. Pro studium topologie RtxA toxinu v membráně hostitelské buňky musí být daný toxin schopen vkládat se do buněčné membrány. Proto dalším cílem bylo stanovení biologické aktivity mutantních variant RtxA toxinu...
|
|
|
Vliv komerčních probiotických preparátů na složení střevního mikrobiomu člověka
Balatka, Štěpán ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Osičková, Adriana (oponent)
Střevní mikroflóra je rozsáhlý ekosystém mikroorganismů, který tvoří symbiotické i patogenní druhy. Mikroflóra plní řadu důležitých funkcí v lidském organismu. Nezpochybnitelnou funkcí je vliv na zdravotní stav hostitele. Pro zdravý mikrobiom obecně platí, čím vyšší je biodiverzita, tím vyšší je prospěšnost. Hlavním předpokladem ovšem je, že se nejedná o vysokou rozmanitost patogenních bakteriálních druhů. Mikrobiom tvoří mnoho "prospěšných" druhů zejména z čeledi Bifidobacterium a Lactobacillus. V posledních desetiletích narůstá popularita doplňování těchto "prospěšných" druhů pomocí různých doplňků stravy (např. probiotika). Předkládaná diplomová práce se zabývá pilotní studií vlivu kapalných komerčních probiotických preparátů od americké firmy Ascended Health (nedostupné na českém trhu) na lidský mikrobiom. Studie se zúčastnilo 9 dobrovolníků, kteří poskytli 70 fekálních vzorků odebraných v čase před užitím, během užívání a po užití zkoumaných preparátů. Pro zjištění biodiverzity střevních bakteriálních druhů byly použity dvě metody, obě založené na identifikaci pomocí bakteriální DNA kódující gen pro 16S rRNA. První metoda využívá techniku PCR-DGGE a poté identifikaci pomocí Sangerova sekvenování. Druhá metoda je založena na přípravě knihovny pro sekvenování nové generace. Vyhodnocení a analýza...
|
host ::
RSS.