|
|
Izolace vakuol ze suspenzních kultur Scutellaria baicalensis Georgii
Ševčíková, Šárka ; Martin, Jan (vedoucí práce) ; Dušek, Jaroslav (oponent)
Šárka Ševčíková Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Heyrovského 1203, 500 05 Hradec Králové Izolace vakuol ze suspenzních kultur Scutellaria baicalensis GEORGII Diplomová práce Vedoucí práce: Pharm.Dr. Jan Martin, Ph.D. Počet stran: 52 Cílem práce bylo vyvinout metodiku izolace vakuol ze suspenzních kultur šišáku bajkalského - Scutellaria baicalensis Geoorgii z čeledi Lamiaceae. Výchozí metodou byl interní postup pracoviště Leiden University, Division of Pharmacognosy z Holandska. Metoda se ukázala jako nevyhovující. Po seznámení s publikacemi pojednávajícími o metodách izolace vakuol z různých rostlinných druhů a po řadě provedených experimentů, se nám podařilo vyvinout vlastní metodu izolace vakuol využívající ficollový gradient. V literatuře uvedené metody izolace vakuol se navzájem lišily v údajích týkajících se lyzačních enzymů, doby inkubace, složení lyzačního roztoku a také hustotního gradientu. Jednotlivé kroky se nám podařilo optimalizovat a vakuoly izolovat. Výsledná metoda umožňuje izolovat vakuoly v poměrně krátkém čase a v dostatečné kvalitě pro další experimenty. Klíčová slova: šišák, Scutellaria, vakuoly, flavonoidy, ficoll, gradient, izolace vakuol
|
|
|
Kultury léčivých rostlin in vitro - V
Sedlářová, Marcela ; Tůmová, Lenka (vedoucí práce) ; Martin, Jan (oponent)
Elicitace terapeuticky významných kultur in vitro je metoda používaná pro zvýšení produkce sekundárních metabolitů. Efektivita elicitace závisí na komplexu vzájemných interakcí mezi elicitorem a rostlinnou buňkou. Elicitace je ovlivněna mnoha faktory: specifita elicitoru, koncentrace elicitoru, délka elicitace, růstové stádium, složení živného média a světlo. Široké pole vnějších stimulů spouští změny v rostlinné buňce, které vedou ke kaskádě reakcí končících tvorbou a hromaděním sekundárních metabolitů, které rostlině pomáhají překonat stres. V této práci byl sladován vliv UV záření na produkci flavonoidů v kalusových kulturách Genista tinctoria in vitro. Nejvyšší produkce flavonoidů bylo dosaženo u genistinu po působení UV záření o vlnové délce 254 nm po dobu 300 s s odběrem po 48 hodinách. Tato kalusová kultura rostla na SH médiu. Obsah genistinu byl 3,03 %. Klíčová slova: elicitace, elicitor, sekundární metabolity, UV záření, Genista tinctoria
|
|
|
Zhodnocení antioxidační aktivity lipofilních esterů hydroxytyrosylu
Jarkovská, Stanislava ; Martin, Jan (oponent) ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Farmakologie a Toxikologie Kandidát: Stanislava Jarkovská Školitel: Prof. Sandra Incerpi, Dr. Přemysl Mladěnka Název diplomové práce: Zhodnocení antioxidační aktivity lipofilních derivátů hydroxytyrozolu Látky schopné reakce s reaktivními formami kyslíku a dusíku, zkráceně antioxidanty, mohou mít prospěšné účinky u nemocí, v jejichž patogenezi byl prokázán oxidační stres. Antioxidanty jsou dnes navíc široce využívány jako stabilizátory tuků a olejů v potravinách. Hydroxytyrozol, hlavní fenolická látka přítomná v olivovém oleji, má silnou antioxidační aktivitu. Avšak kvůli jeho vysoké polaritě je méně rozpustný v lipofilním prostředí, což omezuje jeho využití v potravinovém průmyslu a prevenci/léčbě nemocí. Cílem této práce bylo porovnat antioxidační aktivitu mateřské sloučeniny hydroxytyrozolu s jeho lipofilními estery s různou délkou postranního řetězce. Antioxidační kapacita těchto esterů hydroxytyrozolu se zvýšenou lipofilitou, které byly nasyntetizovány a charakterizovány v laboratoři chemie na Katedře Mechanické a Industriální Chemie univerzity Roma Tre, byla vyzkoušena in vitro pomocí 2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazolin-6- sulfonové kyseliny (ABTS) metody a na buněčných kulturách L6-myoblastů (fluorescenční metoda s...
|
|
| |
|
|
Genista tinctoria in vitro - ovlivnění tvorby sekundárních metabolitů
Danielová, Barbora ; Martin, Jan (oponent) ; Tůmová, Lenka (vedoucí práce)
9. ABSTRAKT Genista tinctoria in vitro - ovlivnění tvorby sekundárních metabolitů Elicitace je jednou z metod, kterou je možné dosáhnout zvýšení produkce sekundárních metabolitů v kulturách in vitro. Byl sledován vliv dvou elicitorů- látky A (N-(3-jod-4-methylfenyl)pyrazin-2-karboxamid) a látky B (5-terc-butyl-6-chlor-N-(3- jod-4-methylfenyl)pyrazin-2-karboxamid) na produkci isoflavonoidů v kalusové kultuře Genista tinctoria po jejich 6, 12, 24, 48, 72 a 168 hodinovém působení. Kultury byly kultivovány na SH-médiu s přídavkem 0,5mg/l 2,4-D a kinetinu v koncentraci 0,1 mg/l. Obsah isoflavonoidů byl stanoven metodou HPLC. Maximální obsah isoflavonoidů po elicitaci látkou A o koncentraci cA 2= 2,95 . 10-4 mol/l byl prokázán po 6 hodinové elicitaci, kdy se produkce genistinu zvýšila o 3200%. Po aplikaci látky B bylo maximálního zvýšení produkce dosaženo po 12 hodinovém působení koncentrace cB 1=2,33 . 10-3 mol/l, a to o 5640%. Obecně vyšší produkce isoflavonoidů byla zaznamenána po aplikaci látky A.
|
|
| |
|
|
Transport flavonoidů před buněčné membrány I
Deščíková, Veronika ; Martin, Jan (vedoucí práce) ; Kašparová, Marie (oponent)
Veronika Deščíková, Transport flavonoidů přes buněčné membrány I., diplomová práce, Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, vedoucí diplomové práce: Mgr. Jan Martin Ph.D., Hradec Králové, 2007, 52 stran Cílem práce bylo experimentálně ověřit principy transportních mechanizmů pro flavonoid baicalin a jeho aglykon baicalein na suspenzních kulturách získaných z rostliny Scutellaria baicalensis (šišák bajkalský). Obsah flavonoidů po elicitaci glutathionem, orthovanadátem a kyanidem draselným byl stanoven metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). Elicitace glutathionem, který by měl v kulturách způsobovat zvýšenou produkci flavonoidů, měla na suspenzní kultury šišáku bajkalského negativní vliv, zejména po 24 a 72 hodinovém působení. Produkce baicalinu po přidání orthovanadátu sodného prudce poklesla, což dokazuje, že ABC transportéry pro tento flavonoid jsou pravděpodobně vanadát-senzitivní. Elicitace kyanidem draselným nezpůsobila větší změny v obsahu baicalinu a baicaleinu. Klíčová slova: flavonoidy - ABC transportéry - baicalin - šišák bajkalský - Scutellaria baicalensis - elicitace - glutathion - orthovanadát - kyanid draselný
|
|
| |
|
| |
|
|
Genista tinctoria L. in vitro - ovlivnění produkce sekundárních látek
Fiedlerová, Gabriela ; Tůmová, Lenka (vedoucí práce) ; Martin, Jan (oponent)
Genista tinctoria L. in vitro - ovlivnění produkce sekundárních látek Mgr. Gabriela Fiedlerová Souhrn Cílem této práce bylo studium vlivu abiotického elicitoru − ultrazvuku působícího v různých časových intervalech na produkci sekundárních metabolitů − isoflavonoidů v suspenzní kultuře Genista tinctoria L. Kultura byla kultivována v živném Schenk−Hildebrandtovu médiu s přídavkem růstových regulátorů (kys. 2,4−dichlorfenoxyoctová v koncentraci 0,5 mg/l a kinetin v koncentraci 0,1 mg/l) při teplotě 25 řC a světelné periodě 16 hodin světlo/8 hodin tma. Jako elicitor byl použit ultrazvuk (o hustotě výkonu 0,1 W/cm3 a stálé frekvenci 35 kHz) po dobu 1, 2, 3, 4 a 5 minut. Vzorky byly odebírány ihned a dále pak po 6, 12, 24, 48, 72 a 168 hodinách po expozici ultrazvukem. Obsah isoflavonoidů (genistinu, daidzeinu, genisteinu, formononetinu a biochaninu A) byl stanoven pomocí HPLC. Z výsledků je zřejmé, že ultrazvuk jako elicitor zvyšoval produkci genistinu a daidzeinu u suspenzní kultury Genista tinctoria L.. Nejvyšší obsah genistinu (0,08 %) byl zaznamenán při elicitaci ultrazvukem po dobu 3 minut a odběru po 72 hodinách po expozici ultrazvuku a stejné hodnoty bylo dosaženo při elicitaci po dobu 4 minut a odběru po 12 hodinách po expozici ultrazvuku. Největší zvýšení produkce daidzeinu, o 400 % oproti kontrole,...
|
host ::
RSS.