|
|
Využití testu CAM pro charakterizaci a studium invazivních vlastností rakovinných buněk
Vágnerová, Lenka ; Dvořák, Michal (vedoucí práce) ; Geryk, Josef (oponent)
Kuřecí chorioalantoidální membrána (CAM) je jedním z nejčastěji využívaných in vivo modelových systému pro studium angiogeneze a buněčné invazivity. V rámci této práce byly na CAM testovány vybrané kuřecí sarkomové linie zkoumané v naší laboratoři, u nichž došlo ke změně angiogenních vlastností a schopnosti tvořit metastázy. Kromě CAM testu byl fenotyp těchto buněk charakterizován pomocí několika dalších metod. Vytipovali jsme několik proteinů, které by u zkoumaných buněk mohly ovlivnit změnu jejich angiogenních a invazivních vlastností, a vytvořili jsme stabilně transfekované buněčné linie, které jsme porovnávali s původními buňkami. Prokázali jsme, že geny kódující proteiny ISL1, ARNT2, PROM1, HOXA11 se v našem experimentálním modelu podílejí na aktivaci programů angiogeneze a buněčné invazivity.
|
|
|
Studium extracelulárních nukleových kyselin v mateřské cirkulaci u patologické a fyziologické gravidity
Žejšková, Lenka ; Hromadníková, Ilona (vedoucí práce) ; Černá, Marie (oponent) ; Dvořák, Michal (oponent)
Objev fetální extracelulární DNA v mateřské cirkulaci v roce 1997 přispěl k vývoji nových metod neinvazivní prenatální diagnostiky, které patří mezi nejmodernější přístupy péče o matku a plod. Do rutinní praxe byla zavedena vyšetření pohlaví plodu u těhotenství s rizikem X-vázaných onemocnění a kongenitální adrenální hyperplazie a Rh faktoru plodu u aloimunizovaných gravidit. Tato dizertační práce se zabývá základní charakteristikou extracelulární fetální DNA a fetálních buněk v mateřské cirkulaci a jejich využitím pro neinvazivní prenatální diagnostiku, zejména u gravidit s patologickou placentací (preeklampsie, IUGR). U těchto těhotenských komplikací bylo zjištěno, že v důsledku nedostatečné transformace mateřských spirálních arterií dochází k ischemii a zvýšené apoptóze placentárního trofoblastu a následně ke zvýšenému uvolňování extracelulárních nukleových kyselin (fetálního a mateřského původu) do cirkulace. Doposud byly kvantifikační studie omezeny pouze na gravidity s mužským pohlavím plodu s využitím detekce specifických sekvencí nacházejících se na Y chromozomu (SRY, DYS-14). Vědci se proto snažili objevit tzv. "univerzální fetální marker", který by mohl být využit pro kvantifikační studie zabývající se aktuálním funkčním stavem placenty, nezávisle na pohlaví plodu. Jednou z možností je...
|
|
|
Regulace pre-mRNA sestřihu v prostředí buněčného jádra
Hnilicová, Jarmila ; Staněk, David (vedoucí práce) ; Půta, František (oponent) ; Dvořák, Michal (oponent)
Eukaryotní geny obsahují nekódující sekvence - introny, které jsou z pre-mRNA odstraňovány sestřihovými komplexy. Sestřihové komplexy se skládají z pěti RNA-proteinových podjednotek (U1, U2, U4/U6 a U5), které postupně nasedají na pre-mRNA a jsou společně s dalšími bílkovinami nutné pro vystřižení intronu. Mutace v bílkovinách důležitých pro RNA sestřih mohou způsobovat vážná onemocněním, například mutace zvaná AD29 vedoucí k záměně jediné aminokyseliny v proteinu hPrp31 (tato bílkovina je součástí U4/U6 sestřihového komplexu) je příčinou nemoci retinitis pigmentosa, která často končí úplnou slepotou. Ukázali jsme, že hPrp31 AD29 mutant je nestabilní a není řádně začleněný do sestřihových komplexů. Přesto vadný hPrp31 zřejmě má vliv na metabolismus buňky, protože zpomaluje buněčný růst a dělení, což by mohlo vysvětlit, proč tato mutace vede k retinitis pigmentosa. Dále se zaměřujeme na roli buněčného jádra v pre-mRNA sestřihu. Nové U4/U6·U5 snRNP částice jsou přednostně skládány v nemembránových jaderných strukturách - Cajalových tělíscích. Zjistili jsme, že Cajalova tělíska jsou také důležitá pro recyklaci U4/U6·U5 snRNP. Vedle toho jsme se zaměřili na roli chromatinu (především acetylace histonů) při regulaci alternativního sestřihu. Pomocí inhibitorů histonových deacetylázy jsme změnili...
|
|
|
Od hledání nových onkogenů k pokusu předefinovat fenomén kancerogeneze
Pajer, Petr ; Dvořák, Michal (vedoucí práce) ; Vodička, Pavel (oponent) ; Eckschlager, Tomáš (oponent)
Zvolený experimentální model indukce klonálních nádorů inzerční mutagenezí MAV-2 se ukázal být velmi cenným a bohatým zdrojem informací o procesu transformace normální buňky v buňku nádorovou. V souhrnu bylo mapováno více než 2000 individuálních klonálních VIS z několika set nádorových vzorků. Bylo molekulárně analyzováno 5 tkáňově a histologicky odlišných nádorových typů a od nich odvozených tkáňových kultur. Při studiu byl objeven a popsán fenomén industáze. Hlavním cílem této práce však bylo pochopit obecné důvody a příčiny nádorové transformace buňky. Výsledky studia vedly autora k poněkud paradoxnímu tvrzení, že význam genetických změn v transformované buňce je přeceňován. Přestože popisování funkce jednotlivých genů, hledání nádorových markerů a molekulárních cílů pro terapii je stále velmi přínosné, domnívá se, že tradiční představa vzniku nádoru jako funkce hromadění mutací a jejich selekce je v současnosti významnou brzdou dalšího výzkumu. Úvahy na toto téma jsou shrnuty v závěrečné části předkládané disertační práce.
|
|
|
The biological importance of CAS SH3 domain tyrosine phosphorylation
Janoštiak, Radoslav ; Brábek, Jan (vedoucí práce) ; Dvořák, Michal (oponent)
Proteín CAS je hlavný tyrozín-fosforylovaný proteín v bunkách transformovaných virovými onkogénmi v-src a v-crk. Je to multidoménový adaptorový proteín slúžiaci ako lešenie pre zostavovanie signálnych komplexov dôležitých pre migráciu a invazivitu Src-transformovaných buniek. V N-koncovej SH3 doméne proteínu CAS bolo identifikované nové fosforylačné miesto - tyrozín 12 nachádzajúci sa na väzbovom povrchu SH3 domény. Pre štúdium biologického významu fosforylácie tyrozínu 12 boli pripravené nefosforylovateľná ( Y12F ) a fosfomimikujúca ( Y12E ) mutanta proteínu CAS. Zistili sme, že fosfomimikujúca mutácia Y12E znižuje asociáciu s kinázou FAK a fosfatázou PTP-PEST a taktiež znižuje tyrozínovú fosforyláciu kinázy FAK. Pomocou GFP značeného proteínu CAS sme následne zistili, že Y12E mutácia delokalizuje proteín CAS z fokálnych adhézií, pričom však nemá žiadny vplyv na lokalizáciu CAS do podozómov. Nefosforylovateľná mutácia Y12F zapríčiňuje hyperfosforyláciu substrátovej domény CAS a znižuje dynamiku fokálnych adhézií a s tým spojenú migračnú kapacitu myších embryonálnych fibroblastov ( MEF ) nezávisle na integrínovej signlizácii. Analogicky k migrácii, CAS Y12F znižuje i invazivitu Src-transformovaných MEF. Z výsledkov tejto diplomovej práce vyplýva dôležitosť fosforylácie Tyr 12 v SH3 doméne CAS pre...
|
|
|
Francouzské múzy Jindřicha Štýrského
Dvořák, Michal ; Listíková, Renáta (vedoucí práce) ; Ébert-Zeminová, Catherine (oponent)
Jindřich Štýrský zemřel 21. března 1942 ve svém Smíchovském bytě, kam se nechal měsíc před svou smrtí dopravit z nemocnice, kde byl do té doby hospitalizován. Jakoby tušil, že jeho srdce, oslabené vyčerpávající dědičnou chorobou, brzy vypoví svou službu. Podle svědectví skonal při změně polohy na svém lůžku, nad nímž byl zavěšen jeho obraz Trauma zrození. Obraz, v jehož symbolice lze dešifrovat životní úděl jednoho z nej osobitějších českých avantgardních umělců první poloviny dvacátého století. Cílem této diplomové práce bylo na biografickém nástinu života Jindřicha Štýrského doložit pomocí předložených důkazů vliv francouzského kulturního prostředí na život a dílo tohoto avantgardního umělce. Je nesporné, že inspirace, kterou během opakovaných návštěv Paříže či četbou svých oblíbených francouzských spisovatelů čerpal, hrála v jeho výtvarném i literárním projevu podstatnou roli. Bez těchto frankofonních impulsů by se pravděpodobně ubírala umělecká cesta Jindřicha Štýrského trochu jiným směrem, zcela jistě by však nevznikla například celá řada koláží a kreseb či životopisná díla o dvou zásadních osobnostech francouzské novověké literatury.
|
|
|
Cytokine expression in chemically-induced senescence
Nováková, Zora ; Hodný, Zdeněk (vedoucí práce) ; Hampl, Aleš (oponent) ; Dvořák, Michal (oponent)
Souhrn Buněčná senescence, kerá dokáže potlačit nádorové bujení, představuje odpověď buněk na stres a poškození DNA a způsobuje zástavu proliferace. Na tomto ději se zřejmě podílejí i produkované cytokiny. V současné době se mnoho vědeckých skupin snaží stanovit povahu a funkci sekrečního fenotypu spojeného se senescencí. Bylo zjištěno, že prozánětlivé látky sekretované senescentními buňkami ovlivňují okolní buňky i své vlastní producenty. Tyto poznatky byly získány především na modelech replikativní a onkogenem indukované senescence. Úkol této práce spočíval v definování cytokinové produkce senescentními buňkami indukovanými genotoxickými látkami bromodeoxyuridinem a distamycinem A. V tomto modelu jsme zjistili trvale aktivovanou interferonovou signalizaci spojenou se zvýšením interferonových cílových genů zahrnujících PML, STAT1 a IRF1. Při testování více než 160 cytokinů a jejich receptorů jsme nalezli zvýšenou hladinu u více než dvaceti cytokinů zahrnující prozánětlivé faktory IL-1, IL-6 and IL-8. Domníváme se, že cytokinová signalizace spojená se senescencí vyvolavou chemikáliemi představuje složitý a robustní děj, který je udržován pozitivními zpětnými vazbami. Charles University in Prague Faculty of Sciences PML (promyelocytární leukemický protein) a PML tělíska hrají roli v potlačování...
|
|
| |
|
|
Interaktivní flexibilní program - Chemie síry a jeho vliv na efektivitu osvojování učiva
Dvořák, Michal
UNIVERZITA cká fakulta KARLOVA V PRAZE, Přírodověde Katedra učitelství a didaktiky chemie CHA ce RLES UNIVERSITY IN PRAGUE, Faculty of Scien Department of Teaching and Didactic of Chemistry Interaktivní flexibilní program - Chemie síry a jeho vliv na efektivitu osvojování učiva Interactive flexible program - Sulfur chemistry and its impact to acquiring of curriculum Mgr. Michal Dvořák Souhrn disertační práce Summary of PhD. Thesis Praha/Praque 2009 2 Disertační práce byla vypracována v prezenční formě doktorského studia na Katedře čitelství a didaktiky chemie Přírodovědecké fakulty Univerzity Karlovy. u Předkladatel: Mgr. Michal Dvořák ii Studijní program: Vzdělávání v chem Katedra učitelství didaktiky chemie řírodovědecká fakulta Univerzity Karlovy v Praze P Školitel: Prof. RNDr. Jan Čipera, CSc. Katedra učitelství didaktiky chemie řírodovědecká fakulta Univerzity Karlovy v Praze P 3 KLÍČOVÁ SLOVA Interaktivní flexibilní program; elektronické materiály; e-učebnice; výukové programy, síra; efektivita; proces osvojování učiva; klíčové kompetence; chemický experiment; sobní počítač; technologie. o VODÚ Žijeme v době informačních technologií, v níž dochází k převratnému způsobu získávání nových ...
|
|
|
Interaktivní flexibilní program - Chemie síry a jeho vliv na efektivitu osvojování učiva
Dvořák, Michal ; Čipera, Jan (vedoucí práce) ; Bílek, Martin (oponent) ; Havlíček, David (oponent)
12. Shrnutí Nakonec jsem dospěl k závěru, ževšechny stanovené hlavní i dílčícíledisertační práce byly spIněny a stanovená výzkumná hypotéza byla potvrzena. Z ana|ýzy výukových programů a elektronických učebnic jsem usoudil' žena našem trhu není dostatečně kvalitní didaktický prostředek. Dotazníkovéšetřenízjišťujícízájem mezi učitelia mezi žáky o IFP potvrdilo soudobý trend pouŽívánípočítačůve vzdělávání. Dále sejednoznačně prokázalo, Že o daný didaktický prostředek (IFP) bude zájem na obou stranách. TaktéŽ většina učitelůby přivítala námi zdůrazňovanou možnost zasahovat do obsahu programu dle svých potřeb. o vhodnosti zvolené technologie - DHTML, kterou byl IFP vytvořen, jsem se přesvědčil prostřednictvím besed, diskusí a dotazníkovéhošetření. Z tohoto šetřeníje patrné,žeučite|ése základní počítačovougramotností a s alespoň elementární znalostí HTML mohou do IFP |ibovolně zasahovat' upravovat a přizpůsobovat jej' a to pod|e vnějšícha vnitřních podmínek procesu osvojování učiva. Tímto způsobem mohou učitelé žákůmposkytovat materiály k aktuá|ním otázkám chemického vzdé|ávání, Na základě zjištěných skutečnostíjsem vyfvořil interaktivní flexibi|ní program ,,Chemie Síryoo, a to tak aby v návaznosti na reformu ško|stvíbyly splněny veškeré poŽadavky na moderní didaktický prostředek určenýpro samostudium. Vytvořený...
|
host ::
RSS.