|
|
Imunologické a histologické metody ve výzkumu Huntingtonovy nemoci
Jandurová, Patrícia ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Rathouská, Jana (oponent)
Autor: Patrícia Jandurová Název: Imunologické a histologické metody ve výzkumu Huntingtonovy nemoci Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Studijní obor: Zdravotní laborant Huntingtonova nemoc (HN) je vážné dědičné, autozomální, neurodegenerativní onemocnění postihující jedince bez rozdílu pohlaví. Toto onemocnění je způsobené expanzí CAG tripletů v genu pro protein huntingtinu, který je exprimovaný ve většině tkání. Takto mutovaný protein způsobuje degeneraci neuronů v mozku postižených pacientů, což vede k motorickým poruchám a rozkladu osobnosti. Nemoc vzniká při přítomnosti mutace na jednom ze dvou párových chromozomů. Riziko předání vlohy pro nemoc přímým potomkům je tedy 50%. Kvůli nástupu projevů většinou až v dospělosti je tato nemoc velice zákeřná. Doposud neexistuje vhodná léčba, ale mnoho výzkumných týmů se soustředí na navržení vhodných léčebných postupů. Tato práce popisuje Huntingtonovu nemoc a zaměřuje se na možnosti experimentálního studia s použitím některých imunologických a histologických metod na vhodných zvířecích modelech. Jednotlivé techniky jsou v práci popsány a výsledky jsou doložené pomocí obrázků. Klíčová slova: Huntingtonova nemoc, CAG triplet, imunologické a histologické metody, zvířecí model
|
|
|
Prionové onemocnění člověka- Creutzfeldtova-Jakobova nemoc
Sedláková, Veronika ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Konečná, Klára (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Kandidát: Bc. Veronika Sedláková Vedoucí: PharmDr. Jana Rathouská, Ph.D. Konzultant: Ing. Magdalena Smětáková Název práce: Prionové onemocnění člověka - CREUTZFELDTOVA- JAKOBOVA NEMOC Cíl práce: Teoretická část práce podává ucelenou teorii nejen o prionech, ale i o Cretzfeldtově-Jakobově nemoci obecně. Cílem experimentální práce bylo zhodnotit a kvantifikovat mozkomíšní mok a mozkovou tkáň u osmi jedinců s podezřením na prionové onemocnění Creutzfeldtovou-Jakobovou nemocí. Metody: Pro stanovení přítomnosti 14-3-3 proteinu v mozkomíšním moku a prionového proteinu v nativní mozkové tkáni byla použita metoda Western blot. Výsledky byly vyjádřeny pouze kvalitativně. Pro lepší specifitu byla diferenciální diagnostika doplněna o imunologické vyšetření likvorového tripletu (p-TAU, h- TAU, β-amyloid). Toto kvantitativní stanovení bylo provedeno metodou enzymové imunoanalýzy (ELISA). Výsledky: U všech osmi podezřelých jedinců bylo potvrzeno onemocnění Creutzfeldtovou-Jakobovou chorobou. Velkým přínosem pro definitivní potvrzení této nemoci bylo stanovení prionového proteinu post mortem. Průkaz přítomnosti β-podjednotky 14-3-3 proteinu není specifický, protože je pozitivní u všech rychlých rozpadů mozkové...
|
|
|
Stanovení chelatačních vlastností 6,7-dihydroxykumarinu
Kolouch, Jan ; Filipský, Tomáš (vedoucí práce) ; Rathouská, Jana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Jan Kolouch Konzultant: PharmDr. Tomáš Filipský, Ph.D. Název rigorózní práce: Stanovení chelatačních vlastností 6,7-dihydroxykumarinu Železo je nepostradatelným elementem v lidském těle. Tento prvek sehrává nezastupitelnou roli v řadě metabolických reakcí, mezi něž patří např. transport kyslíku a syntéza DNA. Mezi esenciální vlastnosti železa patří schopnost přenášet elektrony a facilitovat katalytické reakce. Tyto reakce jsou umožněny oxidačně-redukčními vlastnostmi železa, které se běžně vyskytuje ve dvou oxidačních stavech, tj. Fe2+ a Fe3+ . Nicméně, tento prvek může katalyzovat nejen prospěšné, ale také toxické reakce. Jednou z nich je Fentonova reakce, která vede k tvorbě volných kyslíkových radikálů, které působí toxicky na okolní tkáně. V této rigorózní práci jsme se zaměřili na analýzu chelatační vlastností 6,7- dihydroxykumarinu (67DHC) při různých pH (4,5, 5,5, 6,8 a 7,5) pomocí kompetitivní a přímé UV-Vis spektrometrie. Dále jsme zjišťovali redukční aktivitu 67DHC při pH 4,5 a 5,5. Přímou UV-Vis spektrometrií jsme zjistili, že 67DHC chelatoval Fe2+ ionty při pH 5,5, 6,8 a 7,5 v chelatačním poměru 2:1 (67DHC:Fe2+ ). Naproti tomu Fe3+ ionty byly chelatovány při pH 6,8 a 7,5 v...
|
|
|
Vliv spiruliny platensis na experimentální aterogenezi
Dudová, Adriana ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Rathouská, Jana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Vliv Spiruliny platensis na experimentální aterogenezi Rigorózní práce Mgr. Adriana Dudová Konzultant rigorózní práce: PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Spirulina platensis je modrozelená řasa patřící do cyano bakterií. Řasa je velkým zdrojem lehce zpracovatelných bílkovin, nenasycených mastných kyselin a dalších elementů, např. z makroelementů vápník, železo, z mikroelementů chrom, lithium, selen. Dále obsahuje přírodní barviva chlorofyl, phycocyanin. Byly popsány její antioxidační a protizánětlivé účinky. Cíl práce: Záměrem této rigorózní práce bylo ověřit potenciální protizánětlivé účinky Spiruliny platensis na experimentálním zvířecím modelu, kterým byly ApoE-deficientní myši. Metody: Pro tuto studii byly použity myši apo-E deficientního kmene. Myši apoE-deficientního kmene byly krmeny standardní dietou až do věku zvířat 10 týdnů. Poté byly rozděleny náhodně do dvou skupin. Jedna skupina (n=8) byla krmena 1% cholesterolovou dietou (kontrolní skupina) a spirulinová skupina (n=8), ve které byly myši krmeny stejnou aterogenní dietou s přídavkem 40 mg spiruliny na myšku na den, po dobu 8 týdnů. Byla provedena biochemická analýza celkového cholesterolu z krevního vzorku, sledovala se také přítomnost...
|
|
|
Sledování exprese a koexprese endoglinu a P-selectinu v aortě apoE-deficientních myší
Brlicová, Monika ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Kovařík, Miroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutickfakultav HradciKrlov Katedrabiologickcha lkaskchvd Sledovn exprese a koexprese endoglinu a P-selektinu v aortapoE-deficientnch my Diplomovprce MonikaBrlicov Vedoucprce:Mgr.JanaRathousk Clprce: Sledovali jsme expresi a vzjemnou koexpresi endoglinu (receptoru III pro TGF- cytokin) a P-selektinu (adhezn molekuly a markeru endoteliln dysfunkce) v ascendentnch aortch apoE-deficientnch my krmench standardn dietou pro hlodavce a dietou zpadnho typu (vysokotukovou dietou) pro dosaen rznch fz aterosklerotickho, procesu. Rovn byly hodnoceny zmny celkovch hladin cholesterolu u mypopodnoboutypdiet. Metody: Pro tuto diplomovou prci byl pouit modifikovan kmen C57BL/6J my s deficitem apolipoproteinu E, kter je nchyln k aterogenezi. Myibylyrozdlenydo t skupin. Prvn skupina byla krmena standardn dietou (tzv. "chow" dieta) po dobu dvoumsca daldvskupinyzpadnmtypemdiety (tzv. "Western type" dieta) po dobu dvou a ty msc.U vech skupin byly biochemicky stanoveny a nslednjsme statisticky hodnotili hladiny celkovho cholesterolu v krvi. Imunohistochemick metodynmumonilydetekovat expresi a ppadnoukoexpresi endoglinu a...
|
|
|
Hodnocení exprese a koexprese endoglinu a VCAM-1 v aortě apoE-deficientních myší
Minaříková, Lucie ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Fikrová, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Hodnocení exprese a koexprese endoglinu a VCAM-1 v aortě apoE-deficientních myší Diplomová práce Lucie Minaříková Vedoucí práce: Mgr. Jana Rathouská Cíl práce: Záměrem této práce bylo sledovat expresi a koexpresi endoglinu (TGF-β receptoru III) a molekuly VCAM-1 v endotelu myší aorty. Jako experimentální model jsme použili myší kmen C57BL/6J, který byl geneticky upraven a vyznačoval se deficitem apolipoproteinu E. Metody: Při studii jsme se zaměřili na testování myšího kmene C57BL/6J s knockoutovaným genem pro apolipoprotein E v různých fázích aterosklerotického procesu. Deset týdnů staré myší samice byly rozděleny do tří skupin a krmeny dietami s různým obsahem cholesterolu. Jedna experimentální skupina byla krmena standardní dietou pro hlodavce (tzv. "chow type diet") po dobu dvou měsíců. Zbylé dvě skupiny byly krmeny dietou s obsahem 21 % tuku (tzv. "Western type diet") po dobu dvou a čtyř měsíců. Pro zjištění hladin celkového cholesterolu byla provedena biochemická analýza krve. Získané vzorky vzestupné části aorty byly analyzovány imunohistochemickou metodou ImmPRESSTM s detekčním činidlem DAB. Sledovanými markery byly endoglin (ENG) a VCAM-1. Výsledky: Biochemická analýza prokázala hodnoty...
|
|
|
Oxidační stres v modelu katecholaminové kardiotoxicity
Linhartová, Anna ; Filipský, Tomáš (vedoucí práce) ; Rathouská, Jana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Uchazeč: Mgr. Anna Břečková Konzultant: Mgr. Tomáš Filipský, Ph.D. Název rigorózní práce: Oxidační stres u modelu katecholaminové kardiotoxicity Kardiovaskulární onemocnění jsou celosvětově nejčastější příčinou mortality a morbidity, zejména se jedná o ischemickou chorobu srdeční a její nejzávažnější formu -akutní infarkt myokardu (AIM). Lepší prognózy AIM může být dosaženo detailním pochopením vlastních mechanismů jeho etiopatogeneze. V této studii jsme se zaměřili na stanovení oxidačního stresu u 2-hod modelu isoprenalinové kardiotoxicity, tj. stavu, který má ve svém akutním stádiu několik společných patofyziologických podobností s časnou fází lidského AIM, u Wistar:Han potkanů. Markerem oxidačního stresu byl glutathion. Rovněž byla provedena analýza korelací mezi naměřenými hodnotami oxidovaného glutathionu (GSSG), celkového glutathionu (GSHt) a poměru GSH/GSSG s jednotlivými parametry EKG křivky. Potkani byli rozděleni do dvou skupin, tj. kontrolní skupina (voda pro injekce, 2 ml/kg, s.c.) a isoprenalinová skupina (isoprenalin, 100 mg/kg, s.c.). U potkanů, kterým byl podán isoprenalin a kteří nepřežili 2-hod experiment, došlo k signifikantnímu zvýšení koncentrace GSSG a snížení poměru GSH/GSSG....
|
|
|
Hodnocení exprese iNOS a HO-1 v aortě myší s vysokými hladinami sérového endoglinu pomocí Western blot analýzy.
Tysoňová, Kristýna ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Doleželová, Eva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Hodnocení exprese iNOS a HO-1 v aortě myší s vysokými hladinami sérového endoglinu pomocí Western blot analýzy Autor diplomové práce: Kristýna Tysoňová Vedoucí práce: PharmDr. Jana Rathouská, Ph.D. Cíl práce: Záměrem této diplomové práce bylo zhodnotit rozdíly exprese iNOS a HO-1 (markery nitračního/oxidačního stresu) v aortě dvou skupin geneticky modifikovaných myší na cholesterolové dietě, které se lišily hladinami lidského sérového endoglinu. Metody: Pro studii se použily 6 měsíců staré transgenní myší samice kmene CBAxC57BL/6J s vysokou hladinou lidského solubilního endoglinu. Pomocí ELISA analýzy byla stanovena hladina tohoto endoglinu a myši byly rozděleny do dvou srovnávaných skupin. Sledovaná skupina (Sol-Eng+ ) vykazovala vysoké hladiny lidského solubilního endoglinu a jejich sourozenecké myši s nízkými (nedetekovatelnými) plazmatickými hladinami lidského endoglinu byly použity jako myši kontrolní. Po dobu 3 měsíců byly obě skupiny krmeny speciální stravou s vysokým obsahem tuku a cholesterolu. Biochemickou analýzou byla zjištěna hladina celkového cholesterolu. Pro detekci a kvantifikaci exprese markerů iNOS a HO-1 byla použita analýza Western blot. Výsledky: Po tříměsíční...
|
|
|
JNK3 MAP-kinase localization in the brain of mice with Alzheimer's disease
Kohoutová, Lucie ; Rathouská, Jana (vedoucí práce) ; Herink, Josef (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Student: Lucie Kohoutová Školitel: PharmDr. Jana Rathouská, Ph.D. Školitel specialista: Dr. Maria Javier Ramirez Název práce: Lokalizace JNK3 MAP-kinázy v mozku myší postižených Alzheimerovou chorobou Cíl práce: Přesná patogeneze alzheimerovy choroby je doposud nejasná. Objevem c-Jun N- terminálních kináz (JNKs), majích mnoho funkcí zahrnujících regulaci genové exprese, zánětlivých procesů, buněčné proliferace a apoptotické buněčné smrti, se otevřely dveře k hlubšímu poznání mechanismů Alzheimerovy choroby (ACH). JNK3 je forma těchto kináz jedinečná pro mozek, hrající důležitou roli ve vývoji neurodegenerativních procesů, jelikož je spouštečem neuronální apoptozy. Jeho přesná lokalizace v mozku je doposud neznámá a její objasnění by mohlo pomoci najít cestu k novým možnostem léčby ACH. Pomocí knock-outu bylo dokázáno, že utišení jeho exprese vede přímo ke snížení hladin beta amyloidu (Aβ). Metody: Při studiu exprese aktivní formy JNK3 proteinu byli použity transgenní myší modely s ACH typu Tg2576 ve srovnání s kontrolou bez ACH. Lokalizace této aktivní formy JNK3 proteinu byla prováděna na stejných transgenních modelech za použítí imunohistochemie s detekcí protilátkami astroglí (GFAP), mikroglií...
|
|
|
C-reaktivní protein, kardiovaskulární onemocnění a dysfunkce endotelu.
Bartoňková, Kristýna ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Rathouská, Jana (oponent)
C-reaktivní protein, kardiovaskulární onemocnění a dysfunkce endotelu Diplomová práce Autor: Kristýna Bartoňková Studijní obor: Farmacie Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Cíl práce: Endotel významně ovlivňuje cévní homeostázu, která je porušena při jeho dysfunkci. Dysfunkce endotelu je spojena s mnohými kardiovaskulárními onemocněními. Společně s chronickým zánětem je také podkladem pro metabolický syndrom a některé jeho součásti. Cílem práce bylo detekovat endotelovou dysfunkci u nového transgenního modelu metabolického syndromu pomocí vybraného spektra markerů. Metody: V práci byly sledovány následující faktory: endotelová syntáza oxidu dusnatého, fosforylovaná endotelová syntáza oxidu dusnatého, superoxid-dismutáza 3, cyklooxygenáza 2, nukleární faktor κB a forkhead box P3. Hodnocení jejich exprese v homogenátu aorty bylo provedeno pomocí metody Western blot. Kontrolní skupinu tvořily spontánně hypertenzní samci potkanů, hodnocenou skupinou byli samci transgenních spontánně hypertenzních potkanů exprimujících lidský C-reaktivní protein. Chemiluminiscenční metodou byla následně provedena detekce proteinů na rentgenové filmy. Data byla vyhodnocena denzitometrickou metodou. Výsledky a závěry: Naše výsledky ukazují, že nedošlo k signifikantním změnám v expresi...
|
host ::
RSS.