|
|
Terapie hematologických malignit
Baniková, Lucia ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Čečková, Martina (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikológie Kandidát: Lucia Baniková Školiteľ: Doc. PharmDr. František Štaud, PhD. Názov diplomovej práce: Terapia hematogénnych malignít Hematologické malignity sú rakoviny krvi, kostnej drene a lymfatických uzlín. Jednotlivé hematologické malignity sú definované a navzájom rozlišované zásadne podľa štyroch parametroch: klinické prejavy, mikroskopická morfológia, imunofenotyp a molekulárne/genetické znaky. Aj napriek pokroku dosiahnutom v poslednom desaťročí v liečbe hematologických malignít, väčšina pacientov má stále neutešenú prognózu. Avšak, lepšie znalosti biológie nádorov otvorili možnosť rozvíjať nové "inteligentné" terapeutické stratégie, tzv. cielené terapie. Tieto prístupy majú za cieľ selektívne zabíjať nádorové bunky, pričom táto selekcia je založená buď na expresii špecifickej molekuly na ich povrchu, alebo sekundárne na aktivácii jednotlivých molekulárnych dráh malígnej transformácie. Rozsiahly výzkum viedol k pochopeniu, že existuje mnoho ďalších podtypov hematologických malignít. Každý z týchto podtypov sa chová vo svojom vlastnom osobitnom spôsobe a vyžaduje vlastnú špeciálnu terapiu. Správna liečba závisí na presnej diagnostike a osobitných vlastností, ako je vek pacienta, celkový zdravotný...
|
|
|
The influence of antidepressants on serotonin homeostasis in placenta
Váchalová, Veronika ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Jirkovský, Eduard (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Veronika Váchalová Školitel: Prof. PharmDr. František Štaud, Ph.D. Konzultant: Mgr. Rona Karahoda Název diplomové práce: Vliv antidepresiv na homeostázu serotoninu v placentě Deprese je vážná duševní porucha postihující 10-20% žen během těhotenství. Až 10% těchto žen užívají antidepresiva (ADs), nejčastěji ze skupiny selektivních inhibitorů zpětného vychytávání serotoninu (SSRIs). Navzdory skutečnosti, že se bezpečnost této léčby v těhotenství jeví jako sporná vzhledem k možným negativním následkům na matku i plod, mechanismy popisující tyto interakce nebyly stále dostatečně popsány. Během těhotenství je serotonin (5-HT) důležitým článkem pro správnou funkci placenty, vývoj a fetální programování plodu. Homeostáza 5-HT v placentě je udržována skrze 5-HT transportér (SERT/SLC6A4) na apikální straně a transportér pro organické kationty 3 (OCT3/SLC22A3) na bazální straně trofoblastu. Tyto transportéry vychytávají 5-HT z maternálního a fetálního krevního oběhu do syncytiotrofoblastu (STB), kde je následně degradován enzymem monoaminoxidázou-A (MAO-A). Vzhledem k tomu, že všechna ADs interferují se 5-HT systémem, je důležité studovat jejich potenciální interkace ve feto-placentární jednotce. V této...
|
|
| |
|
|
Investigating the role of zinc transporter ZIP 6 and STAT3 in mitosis
Burgetová, Lenka ; Čečková, Martina (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Lenka Burgetová Školitel: PharmDr. Martina Čečková PhD. Školitel specialista: Dr. Kathryn Taylor PhD. Název diplomové práce: Studium role zinkového transportéru ZIP 6 a STAT3 v mitóze Bylo prokázáno, že STAT3 (přenašeč signálu a aktivátor transkripce 3) se podílí na vzniku rakoviny. ZIP6 je cílem tohoto transkripčního faktoru. Větší část dosavadního výzkumu byla zaměřena jen na aktivaci STAT3 po fosforylaci tyrosinu, zatímco fosforylace serinu zůstala relativně neprozkoumána. Domníváme se, že fosforylace serinu je aktivována v průběhu mitózy tamoxifen-rezistentních prsních nádorových buněk (TamR), a že zinkový transportér ZIP6 a na serinu fosforylovaný STAT3 jsou zahrnuty v zinkem zprostředkovaném mechanismu mitózy. Při použití nocodazolu pro navození zástavy mitózy, jsme pozorovali snížení exprese na tyrosinu fosforylovaného STAT3, zatímco exprese STAT3 fosforylovaného na serinu byla u mitotických buněk zvýšena. Přidání zinku mělo za následek vyrušení účinku nocodazolu, obnovení buněčného cyklu a proteolytické štěpení STAT3, což svědčí pro nový mechanizmus úniku z mitózy. Dále jsme objevili, že ZIP6 je v průběhu mitózy štěpen na N-terminálním úseku a přemístěn z endoplazmatického...
|
|
|
Genotypizace ApoE u dětí
Weinfurterová, Radka ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Nachtigal, Petr (oponent)
Cílem této studie bylo zjistit vliv genotypu apolipoproteinu E na sérové hladiny LDL cholesterolu, HDL cholesterolu a triglyceridů v populaci dětí, mužského i ženského pohlaví. Bylo zjištěno, že apo E genotyp má významný vliv na hladiny apo E, celkového cholesterolu, LDL cholesterolu a HDL cholesterolu v krvi sledované populace. Objekty s alelou apo E4 měly výrazně vyšší hladiny LDL cholesterolu. Naopak osoby s alelou apo E2 měly vyšší hladinu apo E a nižší hladinu LDL cholesterolu. Tyto výsledky korespondují s již dříve provedenými studiemi.
|
|
|
Příprava rekombinantní cDNA některých lékových transportérů
Hadrabová, Zdeňka ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Červený, Lukáš (oponent)
Pro následnou přípravu buněčné linie se zvýšenou expresí transportéru MRP3 byl připraven vhodný plazmid obsahující kódující sekvenci pro tento transportér. Experimentálně bylo stanoveno složení reakční směsi a teplotní profil PCR pro amplifikaci sekvence kódující transportér MRP3. Připojením adenosinu byl PCR produkt upraven pro klonování do plazmidu pCR® -XL-TOPO® . Plazmid pCR® -XL-TOPO® se zaklonovanou sekvencí a plazmid pZeoSV2(-) byly štěpeny restrikčními endonukleázami EcoRV a SpeI. Následně bylo možné díky komplementárním koncům vyštěpenou kódující sekvenci MRP3 zaklonovat do plazmidu pZeoSV2(-), který je vhodný pro transfekci eukaryotní buněčné linie. Klonování bylo úspěšné.
|
|
|
Farmakologické ovlivnění endoteliální dysfunkce u experimentálního modelu diabetického potkana
Přidalová, Hana ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
Cílem této rigorózní práce bylo sledovat expresi vybraných adhezních molekul ve stěně arterie femoralis potkana po indukci diabetu a po podání sulodexidu. Zaměřili jsme se zejména na expresi PECAM-1, VCAM-1 a ICAM-1 v cévním endotelu. K hodnocení morfologických nálezů byly použity imunohistochemické metody. Pokusy se uskutečňovaly na potkaních samcích kmene Wistar, kteří byli rozděleni do 3 skupin. První skupině byl vstříknut slaný roztok (kontrolní) a druhá skupina byla léčena sulodexidem (SLX, 100 UI/kg/den). Diabetes byl indukován po injekci streptozotocinu (30mg/kg/den i.p.), podaném ve třech následujících dnech. Co se každého týče, trvala léčba sulodexidem deset týdnů. Výsledky biochemické ukázaly na indukci diabetu po podání streptozotocinu. Podávání Sulodexidu nevedlo k signifikatnímu snížení hladin glukózy ve srovnání se skupinou, u které byl indukován diabetes. Exprese ICAM-1 byla mírně zvýšena po podávání streptozotocinu ve srovnání s kontrolní skupinou. Nicméně podávání sulodexidu tuto expresi nijak neovlivnilo. VCAM-1 exprese dokonce nebyla pozorována u žádné s testovaných skupin zvířat. Výsledky této pilotní studie tedy naznačují, že podávání streptozotocinu nevede k indukci morfologicky detekovatelné endoteliální dysfunkce a tudíž nemůžeme zatím ani přesně určit ani případný vliv...
|
|
|
Oxidační stres u antracyklinové kardiotoxicity u králíka
Dubská, Veronika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
Cílem této rigorózní práce bylo detekovat změny endoteliální exprese 4- hydroxynonenalu ve stěně aortálního oblouku králíků, kterým bylo podáváno antracyklínové cytostatikum daunorubicin. Sledovali jsme případné změny exprese 4- HNE po různých dávkových intervalech podávání daunorubicinu. Chronická antracyklinová kardiotoxicita byla navozena opakovaným podáním daunorubicinu (3 mg/kg=50 mg/m2 i.v., 1x týdně) po dobu 10 týdnů. Pro sledování časového morfologických, změn aorty v průběhu rozvoje toxického účinku antracyklinů bylo utvořeno 10 daunorubicinových skupin (n=6), které reprezentovaly zvířata exponovaná různé kumulativní dávce DAU. Zvířata byla ukončována za 24 hodin nebo za 7 dnů po dané kumulativní dávce cytostatika. Výsledky byly porovnány s hodnotami naměřenými u kontrolních zvířat (n=6), kterým nebyla aplikována žádná látka. Imunohistochemická analýza neprokázala indukci endoteliální exprese markeru oxidačního stresu 4-hydroxynonenalu ani u kontrolní a ani u žádné z daunorubicinových skupin. Výsledky této rigorózní práce neprokázaly rozvoj endoteliální dysfunkce reprezentované zvýšeným oxidačním stresem po akutním ani chronickém podávání daunorubicinu u králíka.
|
|
|
Sledování vlivu atorvastatinu na expresi endoglinu a endoteliální NO syntázy (eNOS) u myšího modelu aterosklerózy
Uhlárová, Iva ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
Ateroskleróza je degenerativní onemocnění cévní stěny. Je to dlouhodobý proces vyznačující se ztvrdnutím tepenné stěny, ztrátou elasticity a zúžením průsvitu. Dvojnásobně knokautované myši (apoE/LDL - receptor double - knockout) reprezentují nový model pro studium aterogeneze, který je schopen rozvinout závažný stupeň hyperlipidémie a aterosklerózy. Statiny (neboli kompetitivní inhibitory 3hydroxy-3-methyl-glutaryl-koenzym A- reduktázy) patří v současné době mezi nejúčinnější a celosvětově nejpoužívanější hypolipidemika s příznivými účinky na hladiny sérových lipidů i na celkovou a kardiovaskulární mortalitu. Snižují především hladiny celkového cholesterolu a LDL cholesterolu. Cílem této práce bylo zjistit a popsat expresi endoglinu a jeho případnou kolokalizaci s endoteliální NO syntázou eNOS v aterosklerotických plátech a u apoE/LDL-receptor deficientních myší. Dále jsme chtěli zjistit, jak jsou tyto proteiny ovlivněny podáváním atorvastatinu. U všech myší byl zahájen výkrm experimentálními dietami ve věku 8 týdnů. Zvířata byla náhodně rozdělena do 2 skupin. Kontrolní, které byla podávána pouze aterogenní dieta a atorvastatinové, které byla podávána aterogenní dieta obohacena o 100 mg atorvastatinu na 1kg váhy denně. Výsledky biochemické analýzy prokázaly, že osmitýdenní podávání atorvastatinu...
|
|
|
Gene silencing of ICAM-1 by lysine modified oligonucleotides
Kocourková, Aneta ; Štaud, František (vedoucí práce) ; Nachtigal, Petr (oponent)
SOUHRN V této studii se projevuje nadějná možnost zvýšení genové exprese konjugací ligandů na antisense oligonukleotidy a siRNA. Při modifikaci se využilo 2'-O-lysylaminohexylové skupiny vázané na uridinovou bazi, která nahradila jednu, dvě až tři baze thyminové. Uvedené záměny a modifikace bazí byly testovány pro zlepšení inhibice proteinové exprese. Efektivita modifikací v inhibici proteinové exprese byla zkoušena na alicaforsenové sekvenci (DNA) a siRNA. Alicaforsen, který se nachází ve třetí fázi klinické studie, je phosphorothioát komplementární k ICAM-1, siRNA, jenž nově prokázala afinitu k ICAM-1, čehož bylo využito při porovnání účinnosti výše zmíněných modifikací a objevení následných možností uplatnění alicaforsen a siRNA v terapii. Poprvé byla pozorována a prokázána down-regulace ICAM-1 na buněčné linii ECV304, která imituje prostředí hematoencefalické bariéry. Nemodifikované/modifikované sekvence oligonukleotidů a siRNA byly transfekovány do ECV304 buněk. Po 24 hodinové transfekci byly buňky rozrušeny chemickou lýzou. Koncentrace získaných proteinů byly stanoveny Bradford analýzou a následná inhibice ICAM-1 byla vyhodnocena western blotem. Hodnoty inhibicí byly standardizovány k odpovídajícímu aktinu a kontrolním buňkám. Vyhodnocení genové exprese proběhlo pomocí denzitometrie autoradiogramů a...
|
host ::
RSS.