Original title:
Vliv punikalaginu na životnost bovinních mononukleárních buněk
Authors:
Poláková, Lucie Document type: Master’s theses
Year:
2024
Language:
cze Abstract:
[cze][eng] Cílem práce bylo sledovat vliv punikalaginu, konkrétně kyseliny ellagové, která je derivátem punikalaginu na životnost bovinních mononukleárních buněk a porovnat tyto výsledky s vlivem na oxidativní stres a případnou změnou morfologie buněk. Buňky byly vyizolovány z krve a inkubovány v námi stanovených optimálních koncentracích po dobu 2 hodin a 20 hodin. Jako optimální koncentrace jsme stanovili hodnoty 50 µg/ml, 100 µg/ml, 150 µg/ml, 200 µg/ml, 300 µg/ml a vzorek kontroly bez použití kyseliny ellagové. Po dané inkubační době byla vyhodnocena analýza apoptózy a nekrózy pomocí průtokového cytometru a pro srovnání výsledků jsme dále provedly metodu značící oxidativní stres pomocí buněk pozitivních na MitoSOX a fluorescenční mikroskopii pro pozorování případných změn v morfologii. Při inkubaci 2 hodiny došlo k výraznému snížení počtu nekrotických buněk, a naopak zvýšení počtu živých buněk oproti kontrole u všech zkoumaných koncentrací, avšak největší rozdíl nastal při koncentraci 100 µg/ml, 150 µg/ml a 200 µg/ml. U inkubace 20 hodin se počet nekrotických buněk snížil nejvíce při koncentraci 50 µg/ml stejně tak jako se zvýšil počet živých buněk. Naopak koncentrace 300 µg/ml už byla pro buňky cytotoxická. Výsledky tohoto experimentu korelují s pozorováními získanými pomocí fluorescenční mikroskopie a hodnocení tvorby superoxidů, což naznačuje shodu v závěrech a konzistenci naměřených hodnot.The aim of this study was to investigate the effect of punicalagin, specifically ellagic acid, a derivative of punicalagin, on the viability of bovine mononuclear cells, and to compare these results with the impact on oxidative stress and potential changes in cell morphology. Cells were isolated from blood and incubated at our determined optimal concentrations for 2 hours and 20 hours. Optimal concentrations were set at 50 µg/ml, 100 µg/ml, 150 µg/ml, 200 µg/ml, 300 µg/ml and a control sample without ellagic acid therapy. After the specified incubation period, apoptosis and necrosis were analysed using flow cytometry. Additionally, we performed a method to assess oxidative stress using cells positive for MitoSOX, and fluorescence microscopy was used to observe any morphological changes. After 2 hours of incubation, there was a significant decrease in the number of necrotic cells and an increase in the number of live cells compared to the control at all concentrations studied, with the greatest difference observed at concentrations of 100 µg/ml, 150 µg/ml, and 200 µg/ml. Af-ter 20 hours of incubation, the number of necrotic cells decreased the most at a concentration of 50 µg/ml, along with an increase in the number of live cells. Conversely, the concentration of 300 µg/ml was cytotoxic to the cells. The results of this experiment correlate with observations obtained through fluorescence microscopy and evaluation of superoxide production, indicating consistency in the conclusions and measured values.
Keywords:
ellagic acid; flow cytometry; fytonutrienty; kyselina ellagová; mononuclear cells; mononukleární buňky; phytonutrients; průtoková cytometrie; punicalagin; punikalagin; types of cell death; typy buněčné smrti
guest ::
