Original title: Studium sericinu 3 u \kur{Bombyx mori} a zaklonování sericinu do \kur{Escherichia coli}
Translated title: Studies on the sericin 3 of \kur{Bombyx mori} and cloned sericin into \kur{Escherichia coli}
Authors: KRŮČEK, Tomáš
Document type: Master’s theses
Year: 2011
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Spřádané hedvábné vlákno bource morušového se zkládá z fibroinů a sericinů, které je drží pohromadě. Sericiny jsou na serin bohaté a jeho obsah je kolem 20-30% celkové bílkoviny kokonu. Sericiny se získávají, jako vedlejší produkt při výrobě hedvábí. Při máčení kokonů v horké vodě se luhují sericiny, které jsou v malé míře komerečně využívané. Sericiny jsou známe hlavně z kosmetických přípravků. Velká snaha je, aby bylo možno nahradit bovinní telecí sérum z buněčných medií sericiny, neví se však, který by byl účinný. Naším cílem bylo pokusit se zaklonovat několik zajímavých oblastí se sericinu 3. Sericin 3 je bohatý na aminokyseliny aspartát, asparagin, glutamát, glutamin serin. Bylo izolováno několik úseků o délce: 267, 279, 525, 672 a 528 bp. Tyto úseky jsou vybrány z repetitivních oblastí sericinu. DNA úseky byly zaklonovány do Escherichia coli a exprimovány, jako proteiny obsahující hexahistidin. Tyto úseky byly přečištěny pomocí afinitní chromatografie a prokázány na polyakrylamidovém gelu. The spun-out silk fiber consists of two fibroin filaments that are cemented together by sericin coating. The serine-rich sericins, which make 20-30% of the cocoon silk proteins in Bombyx mori, are dissolved in hot water during silk fiber reeling from the cocoon. The sericin extract is usually discarded. Only small amounts are currently used in cosmetics and lately also as replacement of bovine serum products in the cell culture media. The use in culture media is hindered by poor standardization of the extracts. To overcome this problem, we attempted preparation of several recombinant proteins based on partial sequences of one out of the three sericin genes of Bombyx mori, sericin 3. Translation product of the Ser3 gene is extremely serine-rich with a relatively high representation of the aspartate, asparagin, glutamate, and glutamine. Using specific primers we have prepared a cDNAs of 267, 279, 525, 672, and 528 bp, respectively, derived from the Ser3 gene. The cDNAs were cloned and expressed as fusion proteins with hexahistidine in Escherichia coli. The proteins were purified by affinity chromatography and analyzed by acrylamide electrophoresis. Ser3 gene contain repetitive motifs rich in serine and including some charged amino acids.
Keywords: Bombyx mori; recombinant protein; repetitive motifs; sericin; sericin 3; Bombyx mori; bourec morušový; rekombinantní protein; repetitivní úsek; sericin; sericin 3
Citation: KRŮČEK, Tomáš. Studium sericinu 3 u \kur{Bombyx mori} a zaklonování sericinu do \kur{Escherichia coli}. České Budějovice, 2011. diplomová práce (Mgr.). JIHOČESKÁ UNIVERZITA V ČESKÝCH BUDĚJOVICÍCH. Přírodovědecká fakulta

Institution: University of South Bohemia in České Budějovice (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Digital Repository of University of South Bohemia.
Original record: http://www.jcu.cz/vskp/16869

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-54996


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > University of South Bohemia in České Budějovice
Academic theses (ETDs) > Master’s theses