Original title: Využití magnetických mikročástic pro izolaci bakteriální DNA
Translated title: The use of magnetic microparticles for bacterial DNA isolation
Authors: Hrudíková, Radka ; Horák, Daniel (referee) ; Španová, Alena (advisor)
Document type: Master’s theses
Year: 2012
Language: cze
Publisher: Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická
Abstract: [cze] [eng]
Práce byla zaměřena na testování dvou typů magnetických mikročástic funkcionalizovaných –COOH skupinami pro izolaci bakteriální DNA. Izolace byla provedena z hrubých lyzátů buněk připravených z čisté kultury Lactobacillus paracassei RL-10, v prostředí 2 M NaCl a 16% PEG 6000. Dále byl sledován vliv degradace RNA enzymem RNasa A na množství izolované DNA. Bylo zjištěno, že degradace RNA v hrubých lyzátech buněk měla vliv na množství izolované DNA. Množství izolované DNA záleželo na použitých mikročásticích. Větší množství DNA bylo izolováno pomocí částic s větším obsahem –COOH skupin. Nosiči byla izolována DNA amplifikovatelná v PCR. V další části práce byly testovány nosiče funkcionalizované –NH2 skupinami při izolaci DNA s využitím elektrostatických sil. Bylo prokázáno, že pro vazbu DNA na nosič je vhodné prostředí s nižším pH. The aim of the work was testing of two types of magnetic mikrosheres functionalised with –COOH groups for the isolation of bacterial DNA. Isolation of DNA was carried out from crude lysates of cells prepared from pure culture of Lactobacillus paracassei RL-10 in the presence of binding buffer with 2 M NaCl and 16% PEG 6000. The influence of RNA degradation by enzyme RNase A on the amount of isolated DNA was investigated. It was estimated that RNA degradation affects the amount of DNA isolated. The amount of DNA depended on the type of microparticles. Higher amounts of DNA were isolated using particles with higher content of carboxyl groups. DNA applicable in PCR was isolated using both types of microsheres. In next part of the work, microparticles functionalised with –NH2 groups were used to DNA isolation using electrostatic forces. It was shown that buffer with lower pH is suitable for DNA adsorption onto magnetic microparticles.
Keywords: bacterial DNA isolation; Magnetic microparticles; polymerase chain reaction; RNA degradation; degradace RNA; izolace bakteriální DNA; Magnetické mikročástice; polymerázová řetězová reakce

Institution: Brno University of Technology (web)
Document availability information: Fulltext is available in the Brno University of Technology Digital Library.
Original record: http://hdl.handle.net/11012/9323

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-546134


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Brno University of Technology
Academic theses (ETDs) > Master’s theses